摘要：目的探索成纤维细胞生长因子2(FGF2)敲除对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、迁移侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法将FGF2-sgRNA基因序列转入载体lenticrispv2构建CRISPR-cas9-FGF2稳转细胞系,Western blot检测CRISPR-cas9-FGF2稳转细胞系FGF2的蛋白敲除情况及相关凋亡蛋白指标和周期蛋白指标,将MCF-7细胞分为CRISPR-cas9-NC组(对照组)和CRISPR-cas9-FGF2组(FGF2基因敲除组),使用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验和transwell实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果(1)设计的三条FGF2-sgRNA序列均与载体lenticrispv2连接成功。(2)用Western blot检测表明FGF2-sgRNA1敲除作用更明显(P<0.0001)。(3)与对照组细胞相比,FGF2基因敲除组细胞的增殖、迁移侵袭能力明显降低(P<0.01);周期蛋白CDK2和cyclinA蛋白表达显著降低(P<0.001),Bax促凋亡蛋白表达升高(P<0.001),Bcl-2抑凋亡蛋白表达降低(P<0.001),Bcl-2/Bax的比值减低(P<0.0001)促进细胞凋亡。结论FGF2基因敲除后明显抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移侵袭,将细胞阻滞在S期,抑制细胞的增殖与分裂,并促进细胞凋亡,提示FGF2基因具有成为乳腺癌治疗的潜在分子靶点。

摘要：目的 建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法 使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检测体系,优化T/U碱基比例,设置对照试验验证热敏UDG酶防污染能力;根据LFD要求,设计特异性同化探针及淬灭探针,建立UDG-LAMP-LFD核酸检测体系并对LAMP反应时间进行优化;对该体系进行灵敏度、特异性及临床样品的验证,并与QPCR结果进行比较。结果 优化的LAMP反应时间为40 min, T/U比例为1∶1;热敏UDG酶孵育时间为10 min,防污染效果显著;LFD结果判读耗时5 min,整个检测时间为55 min。该UDG-LAMP-LFD核酸检测体系在以HPV18作为检测对象时,灵敏度10^(3)拷贝/μl;29例临床样品的验证结果与QPCR检测结果完全一致。结论 建立的UDG-LAMP-LFD检测体系可快速、特异、灵敏、可视化的检测HPV18,同时可避免气溶胶污染导致的假阳性。该方法对实验设备及工作人员要求较低,适合在偏远地区及基层医院使用。

摘要：目的将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种快速、可视化的HPV16、HPV58检测方法。方法运用LAMP在线引物设计软件,针对HPV16E6基因及HPV58L1基因保守区域设计引物及探针。采用生物素标记LF,荧光基团FAM和淬灭基团BHQ-1标记探针,LFD进行目视检测,建立HPV16和HPV58的LAMP-LFD检测方法,并对其特异性、灵敏度及临床实用性进行验证。将临床样品使用该方法的检测结果与实时LAMP扩增及qPCR结果相比较,计算符合率。结果优化的LAMP最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为50min。LFD检测仅需5min,故完成检测耗时仅55min;建立的LAMP-LFD方法能特异性检出HPV16、HPV58,其他5种常见高危型HPV呈阴性反应;该方法针对HPV16和HPV58的检测灵敏度均为100拷贝/μl,50份临床样品检测结果与实时LAMP和qPCR检测的符合率达100%。结论建立的HPV16、HPV58LAMP-LFD检测体系快速、简便,可视化。该方法对设备的要求低,仅需恒温孵育器即可完成,结果易观察,适用于现场HPV检测,以及经济落后和资源匮乏地区的HPV筛查。

摘要：目的建立基于实时荧光环介导等温扩增的人乳头瘤病58型基因检测体系,用于其快速检测和早期诊断。方法运用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V5,针对人乳头瘤病毒58型的L1区域保守基因设计引物,在反应前加入荧光核酸染料SYBR GreenⅠ,并对该反应体系中的dNTPs、Mg;和内引物（FIP、BIP）浓度进行优化,优化结果通过"S"型扩增曲线判断,并对优化后的实时荧光环介导等温扩增体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。结果针对人乳头瘤病毒58型所建立的实时荧光环介导等温扩增检测体系具有良好的特异性及灵敏度,且与临床实验室检测结果（qPCR方法）的符合率达100%,该检测方法的灵敏度可达10拷贝/μL。结论本研究建立了人乳头瘤病毒58型的实时荧光环介导等温扩增检测体系,它是一种耗时少、操作简便、特异性强、灵敏度高的方法,适用于HPV临床样本的快速检测。

摘要：目的 探讨胃癌细胞中的乙醛脱氢酶2(ALDH2) m RNA发生可变剪接。方法 设计ALDH2基因特异性引物,用胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN45)、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和人外周全血白细胞提取RNA,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,然后对ALDH2扩增产物进行测序分析;使用DNAStar软件分析ALDH2变异体(V)的开放阅读框(ORF)。结果 ALDH2变异体1(V1)外显子2和外显子4发生可变剪接,V1外显子1的3’端和外显子3的5’端3个不同的位点发生可变剪接,V1存在8个长度超过100氨基酸的ORF。结论 ALDH2 m RNA存在多种可变剪接形式,提示其存在复杂的蛋白表达功能。