摘要：【摘要】Ⅳ期NSCLC在2DRT时代的姑息减症作用已经肯定，但是研究设计未能很好体现放疗对生存的作用、部分研究结果延长生存的作用未被人们接受。随着3DRT技术的发展、综合治疗理念的广泛应用、对不同转移状态与生存关系的认识，逐渐开展的前瞻性和回顾性研究证实，基于全身治疗联合原发肿瘤3DRT比单纯药物治疗更有利于改善症状和延长生存，尤其对于寡转移的Ⅳ期NSCLC。原发肿瘤剂量与生存密切相关，高剂量放疗可能更有利于延长生存；但仍存在放疗剂量、时机、技术选择等诸多问题。需要更广泛地开展研究。

摘要：目的研究视蛋白3在正常人真皮成纤维细胞中对Ⅰ型胶原蛋白生成的影响及其可能的机制。方法取小儿包皮真皮成纤维细胞分离、培养、传代,至3~5代,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别检测视蛋白1~5的表达,细胞免疫荧光检测视蛋白3及Ⅰ型胶原蛋白表达及定位。设计针对人视蛋白3的小干扰RNA,利用脂质体转染入正常人真皮成纤维细胞,分别用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检验视蛋白3抑制效率。成功下调视蛋白3后,用荧光定量PCR、免疫印迹法、酶联免疫吸附测定及细胞免疫荧光检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化;通过CCK-8及EDU检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell检测细胞迁移能力;通过蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT及磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达情况。最后抑制通道蛋白AKT的磷酸化,通过蛋白免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化。结果视蛋白1~5均在正常人真皮成纤维细胞中表达,其中视蛋白3基因及蛋白表达水平较其他视蛋白表达高,差异有统计学意义(P<0.05)。下调正常人真皮成纤维细胞中视蛋白3后,细胞合成及分泌Ⅰ型胶原蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖、迁移能力减弱,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期中S期比例明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平被明显抑制;抑制通路蛋白AKT的活化后,细胞合成Ⅰ型胶原蛋白水平降低。结论视蛋白3参与调控正常人真皮成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的合成,可能是创伤愈合、纤维化相关疾病及医疗美容潜在的治疗靶点。

摘要：目的探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B(CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1(TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂GdCl3、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3mRNA。用MTT法检测各组BV2细胞生长活力。用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Westernblot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D(CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶V(CTSV)蛋白。针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H2O2处理,再用Westernblot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB(TFEB)蛋白。结果用H2O2处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3mRNA表达增加,加用GdCl3处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P=0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3mRNA(P=0.037)、半胱天冬酶-1(P=0.021)、IL-1β(P=0.036)均显著减少。H2O2组和H2O2+GdCl3组的细胞生长较慢。在H2O2浓度为200μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSBmRNA与TRPML1mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H2O2诱导的CTSB蛋白表达。组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H2O2处理浓度高低的影响。在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H2O2+siRNA处理组与H2O2处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021)。结论在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导。

摘要：目的通过有限元分析应用静力载荷加载与高处坠落碰撞模拟胫骨平台骨折发生机制、寻找骨折发生的规律，为胫骨平台骨折个体化诊断与治疗提供参考和依据。方法选择1名健康男性志愿者，采用CT、MRI扫描及三维有限元软件等生成带有韧带、半月板、关节面的完整膝关节三维有限元模型。根据胫骨平台骨折的特点，设计不同的工况，对胫骨平台进行静力载荷加载与高处坠落的碰撞过程并进行有限元分析。结果垂直静力加载胫骨内、外侧平台应力主要集中在胫骨平台前缘，外侧应力较为集中。垂直伴内翻应力时，胫骨平台应力集中于内侧髁前部向下延伸至胫骨干。垂直伴外翻应力时，胫骨平台应力由两侧髁向下延伸至胫骨干，应力面积内、外侧相当。跌落过程中，垂直跌落时应力分布与静力加载时一致：垂直伴内翻应力时，胫骨内侧髁应力明显增大，内侧应力向下延伸至胫骨干；垂直伴外翻应力时，胫骨平台应力主要分布在外侧胫骨平台的大部分与内侧胫骨平台的前内缘，腓骨应力分布明显增大。结论内侧胫骨平台起主要承载力的作用。在应力分布上，外侧胫骨平台应力较为集中，内侧胫骨平台应力分布面积较大，且向下延伸至干骺端，因此外侧胫骨平台的前外缘容易发生小块劈裂骨折，内侧胫骨平台容易发生整块、甚至累及干骺端的骨折。

摘要：目的探讨改良拱顶石穿支岛状皮瓣修复头面部皮肤软组织缺损的临床效果。方法2013年1月至2014年9月，应用改良拱顶石穿支岛状皮瓣修复头面部皮肤软组织缺损创面13例，缺损面积为0．8cm×1．0cm～20．0cm×10．0cm，皮瓣切取面积1．5cm×1．0cm-22．0cm×12．0cm。以头面部穿支血管为蒂，于创面旁设计拱顶石形状皮瓣，以既能减轻切口张力又能有好的美容效果为原则，尽量减少辅助切口，面部切口线选择与皮纹方向一致或隐蔽的部位或面部美容单元旁；发际内切口应注意减少对毛囊的损伤，注意皮瓣转移对头发生长方向的影响。结果术后12例伤口愈合良好，1例皮瓣部分坏死，经植皮后愈合。患者均获1—12个月随访，对术后功能、皮肤感觉及外观均满意。结论改良拱顶石穿支岛状皮瓣修复头面部皮肤软组织缺损，可取得较好的效果。

摘要：目的囊性肺癌脑转移瘤由于放疗后评价疗效或与神经系统临床表现不一致，本研究探讨囊性脑转移瘤放疗后评价近期疗效的时间窗和方法。方法回顾分析贵州省肿瘤医院2008—08—01～2014—09-30收治214例肺癌脑转移完成放疗患者的近期疗效，对比其中95例神经系统临床表现改善患者的囊性和实性转移瘤的近期疗效，探讨设计的脑转移瘤评价方法。结果全组囊性和实性瘤放疗后≤1周的近期疗效差异无统计学意义，P值分别为0．165和0．277。放疗后临床表现改善95例患者中，参照WHO标准评价≤1周近期疗效，结果实性组比囊性组的有效率显著增高，x2=4．876，P=0．027；参照RECIST标准，有效率也具有增高的趋势，x2=3．610，P=0．057。治疗后1～3个月，2种标准评估囊性和实性脑转移瘤的近期疗效差异均无统计学意义，P值分别为0．975和0．953。提示WHO和RECIST标准评价囊性病灶疗效的合适时间窗为放疗后1～3个月。设计“囊壁厚度治疗前后变化”评价近期疗效（≤1周），以“囊壁垂直径乘积”评价近期疗效，对比WHO、RECIST标准与实体瘤的差异无统计学意义，P值分别为0．087和0．751；以“囊壁最大径”评价，差异也无统计学意义，P值分别为0．220和0．858。结论囊性肺癌脑转移瘤放疗后评价时间窗可能为1～3个月，“囊壁厚度变化”评价囊性瘤近期疗效可能更合适。

摘要：目的探讨驱动基因敏感突变Ⅳ期非小细胞肺癌分子靶向治疗后肿瘤体积变化规律及开始放疗时机。方法采用前瞻性研究方法通过模拟定位CT结果分析治疗前后每隔10 d原发肿瘤体积变化。当前后两次体积变化≤5%或治疗90天后终止定位和体积测量并实施放疗,记录放疗急性不良反应,比较实施和模拟放疗计划的相关参数。结果30例中29例纳入分析(1例脱落),人表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗后原发肿瘤体积均缩小,但退缩率和速度不一致,至终止定位时最大缩小90%、最小缩小28%;治疗40 d内平均体积缩小明显,每间隔10 d的平均体积不同(P5%,平均体积退缩速度减慢而趋于稳定,退缩率为49.15%~54.77%;70天平均体积略有增大后又缓慢缩小,每间隔10 d的平均体积相近(P>0.05)。终止定位后实施放疗病例的原发肿瘤可给予剂量为(69±7)Gy,发生2、3级急性放射性肺炎和放射性食管炎分别为2例和3例、1例和0例。按照实施放疗计划的技术、剂量参数分别设计EFGR-TKI治疗前和第40天的模拟放疗计划,全部显示实施计划显著优于EGFR-TKI治疗前模拟计划(P均0.05)。结论EGFR-TKIs治疗后Ⅳ期非小细胞肺癌的原发肿瘤退缩率随时间推移逐渐减缓,40天内缩小最显著而后缓慢缩小,每一病例的肿瘤退缩速度不一致,治疗后40天开始放疗可能是获得提高剂量并控制放射损伤的最佳时机。

摘要：目的探讨A20(TNFAIP3)基因对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞生长的影响及其与细胞内核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化的关系。方法采用RNA干扰技术沉默A20,设计3条针对人A20mRNA的siRNA序列,经过lipofectamine RNAiMAX转染至OCI-LY1细胞(DLBCL细胞),用RT-PCR技术检测转染后OCI-LY1细胞内A20 mRNA的表达,用Western blot法检测A20和NF-κB(p65)蛋白的表达。用MTT法检测A20基因沉默后OCI-LY1细胞体外生长活力变化。结果 (1)siRNA转染组A20 mRNA及编码蛋白表达较未转染组及阴性对照组明显降低(P<0.05);(2)转染组p65蛋白的表达较未转染组和阴性对照组明显增高(P<0.05);(3)转染组细胞较未转染组、阴性对照组的OCI-LY1细胞体外生长活力明显增强。三组siRNA序列中siRNA-2序列干扰效果最明显。结论 DLBCL细胞中A20基因沉默会导致NF-κB活性增强,从而增强淋巴瘤细胞的生长活力。

摘要：构建基于Te I3c/4c嗜热二型内含子的温度诱导Targetron基因失活系统(Thermotargetron),并应用于中温微生物基因编辑。在大肠杆菌HMS174(DE3)基因组中,选择Subunitofflagellum基因(fliC)和C4dicarboxylate orotate:H+symporter基因(dctA)为靶基因。根据Te I3c/4c DNA识别规则,在fliC和dctA基因中选择fliC489a、fliC828s、fliC1038s和dctA2a位点为基因打靶位点。使用重叠延伸PCR方法,基于pHK-TT1A质粒构建打靶载体。打靶载体转化HMS174菌株,对数期转化子培养液48℃热激1h后涂布于氯霉素抗性LB平板上。使用菌落PCR和DNA测序检测突变株并计算基因失活效率。获得突变株后,通过琼脂穿刺和碳源代谢实验,鉴定ΔfliC、ΔdctA突变株表型变化。菌落PCR测序结果表明,Te I3c/4c插入到fliC和dctA基因设计位点,且打靶效率高达100%。突变株表型验证实验表明,ΔfliC突变株运动能力显著下降,ΔdctA突变株苹果酸代谢能力缺失。综上所述,文中建立了一套适用于嗜中温微生物的温度诱导型、高效基因失活系统,该系统可通过控制宿主菌在48℃保温时间实现高效、靶向、精准基因失活。

摘要：背景:构建三维的预血管化系统,对于大尺寸、复杂三维结构组织内细胞的存活和功能表达均具有决定性作用。因此,寻找一种合适的预血管化策略已成为3D生物打印大尺寸、复杂三维组织亟待解决的问题。目的:对3D生物打印大尺寸、预血管化三维结构进行初步的探索。方法:用逆向工程软件Catia设计三维生物打印蓝图;以改装后的桌面级双喷头3D打印机为生物打印机,以聚乙烯醇为牺牲材料打印牺牲骨架;以大鼠骨髓间充质干细胞、海藻酸钠、琼脂糖和纳米纤维素溶液的混合物为细胞生物墨水。根据预先设计的参数进行生物打印,构建具有三维流体通道的组织工程三维结构体。观察打印获得的三维结构体,评价打印后及材料溶解后的细胞活性;体外培养打印获得的结构体,并用Alamar Blue试剂盒检测细胞在三维结构体中的增殖。结果与结论:利用Catia软件设计出了具有微孔的外壁及内部纵横交错的微管结构的双喷头打印模型,用该三维生物打印技术构建出具有自定义尺寸(尤其是高度)和预血管化的三维结构,结构体中细胞12h的存活率为(95.47±0.54)%,随着体外培养时间的延长,细胞存活率下降并稳定在80%以上。随着培养时间的增加,构建体中的细胞增殖呈上升趋势。结果表明:该生物打印方法可用于通过使用各种生物水凝胶材料制造不同特性的三维结构体,在生物制造具有临床相关尺寸的预血管化的复杂组织器官方面具有潜力。