摘要：为开发菜豆高效新型分子标记,从分子水平解析菜豆重要种质的遗传多样性及亲缘关系,基于菜豆转录组数据,设计EST-SSR引物,建立EST-SSR标记系统.利用PCR筛选出多态性引物,结合毛细管电泳,分析81份菜豆种质的亲缘关系,并构建分子身份证.通过MISA软件,在菜豆转录组数据85276条非冗余序列中,共挖掘出11649个EST-SSR位点.菜豆转录组SSR标记主要重复单元为1~3个碱基,其中单碱基为主要类型,占总量的56.7%;其次是三碱基重复,占总量的21.1%.从128对EST-SSR引物中筛选出18对多态性高、重复性好的引物进行PCR扩增.供试种质的多态性信息量(PIC)为0.50~0.95,平均为0.88;遗传相似性系数为0.15~0.65,以0.35为阈值可将81份种质分为3大类,其中贵州种质主要分布于第Ⅰ,Ⅲ类,而省外品种仅分布在第Ⅱ类.利用核心引物TDc9和TDc66可以有效区分81份菜豆种质,并构建其分子身份证.研究开发的EST-SSR标记系统,可用于菜豆种质的鉴定及亲缘关系分析.

摘要：木霉具有抑制病原菌、促进植物生长和改善土壤营养等作用。刺梨渣是刺梨榨汁后的废弃物,具有极高的利用价值。本文拟采用刺梨渣为原料,麸皮为辅料进行固体发酵,以橘绿木霉GF-11的分生孢子数量为筛选指标,通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计-响应曲面法(responsesurface methodology,RSM)对影响发酵刺梨渣的条件进行优化。结果表明,培养基配方中对橘绿木霉GF-11产孢影响最显著的3个主要因素麸皮占比、接种量、发酵天数。优化后的发酵培养条件为麸皮占比61%、接种量10.48%、硫酸锌0.5%、含水率250%、发酵天数10d。在此优化条件下发酵获得橘绿木霉菌株GF-11的分生孢子产量为2.32×10^(10)CFU/g。该研究为刺梨渣发酵提供了合适的工艺条件,为减少刺梨渣污染环境及其有效利用提供了基础,也为生产高质量生物有机肥提供了新的途径。

摘要：本研究以柳叶马鞭草盆栽苗为实验材料,探索其快繁体系。结果表明,将5~6 cm的带腋芽茎段以75%酒精与20%NaClO组合设计试验,发现用75%酒精消毒30 s, 20%NaClO消毒8 min的效果最好,7 d后污染率为12.78%,死亡率为4.44%,成活率达82.78%。将3~4 cm腋芽放在添加不同浓度6-BA、NAA的MS培养基中进行增殖诱导培养,发现在培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA培养时,30 d后诱导率为100%,增殖系数达4.77,产生的丛生芽数目多。将3~4 cm的丛生芽剪成单芽,在培养基为MS+0.10 mg/L NAA进行培养时,15 d后株高差为4.64 cm,芽苗健壮且无枯萎现象。将长势好、高度5 cm左右的柳叶马鞭草无根苗置于培养基中探索IBA、NAA激素浓度,在MS+0.10 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA条件下,15 d后生根率为100%,平均生根数为40.43,平均根长为3.27 cm;45 d后,平均根长为14.33 cm。进一步以蛭石代替琼脂作为基质,15 d后生根率为100%,平均根长可达4.50 cm, 45 d后平均根长可达42.33 cm,显著高于琼脂基质中的平均根长。自然光条件下炼苗4 d后,移栽至配比为V_(蛭石)∶V_(营养土)=1∶2的基质上,30 d后成活率为93.33%。

摘要：为挖掘普安大厂茶(Camellia tachangensis ***)的价值,丰富普安茶产品类型,分别以普安大厂茶群体种春梢独芽、一芽二叶、一芽三叶及单叶为原料,参照白茶“萎凋→干燥”的基本工艺设计3种不同萎凋方式制作普安大厂茶白茶。对所制白茶样品进行感官审评及主要内含成分检测,并通过主成分分析评价其综合品质,以确定普安大厂茶白茶加工的最适原料及工艺参数。结果显示,以独芽原料所制的白茶感官品质较好,表现出鲜醇、花蜜香、甜果香的品质,优于其他嫩度原料。白茶内成分含量在不同嫩度原料及不同萎凋方式下均有差异,但变化没有明显规律。利用白茶感官品质得分、内含成分含量及儿茶素评价指标进行主成分分析,筛选出白茶综合品质最佳的组合为W12,即以独芽为原料,采用“日光自然”复式萎凋所制白茶芽头细长、绿黄带褐较润,汤色绿黄尚亮,清香纯正,滋味鲜甜;茶多酚、氨基酸、咖啡碱、可溶性糖含量较高,水浸出物含量适中,可作为普安大厂茶白茶加工的优选模式。

摘要：目的提取临床分离的鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(OmpA)的基因,并进行生物学预测和分析。方法查询鲍曼不动杆菌OmpA基因序列,设计特异性PCR引物,以提取的鲍曼不动杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增OmpA片段。回收目的片段,采用生物信息学软件分析OmpA蛋白的生物学特性。结果12株鲍曼不动杆菌多位点序列分型(MLST)序列分析有6个ST分型,分别是ST 208、ST 229、ST 191、ST 195、ST540、ST 1145,鲍曼不动杆菌OmpA基因序列全长为1070 bp的,单核苷酸多态性(SNP)位点较少,预测蛋白为跨膜蛋白,具有6种三级结构,均由β-桶状结构组成的保守结构域。结论临床分离的不同鲍曼不动杆菌株OmpA蛋白为结构相对保守的跨膜蛋白,具有维持细胞的形状和稳定性,参与细菌耐药机制及免疫原性作用。

摘要：根据钩藤转录组中STR基因核心序列设计特异性引物,并进行RACE扩增,克隆到UrSTR基因(GeneBank:OL310251)的cDNA全长1541 bp,编码345个氨基酸;采用染色体步移克隆到UrSTR基因启动子(GeneBank:OL310252)序列1179 bp。系统进化发育树分析显示,钩藤UrSTR蛋白与同为茜草科的美丽帽柱木和短小蛇根草的STR蛋白聚为一类,其亲缘关系最近;亚细胞共定位实验表明UrSTR蛋白定位于液泡膜上;SDS-PAGE结果表明pET-28a-UrSTR重组蛋白成功表达且大小与预期相符;启动子顺式作用元件分析表明其含有光响应、胁迫响应和激素响应有关的多种调控元件;启动子活性分析UrSTR基因启动子具有转录活性。成功克隆了UrSTR基因及其启动子序列并对其进行生物信息学分析和启动子活性分析;后期需要优化UrSTR原核表达体系,为进一步纯化UrSTR蛋白研究其结构和功能奠定基础。

摘要：基于前期比较基因组学分析,在香猪的丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 4,MAP 3K4)基因第15内含子中发现一个189 bp的结构变异(MAP3K4-I15-sv189)。为探究该结构变异(structural variation,SV)在香猪群体中的多态性分布及其对基因表达的影响,本研究设计一对特异性引物,建立MAP 3K4基因SV的PCR检测技术,分析香猪群体中该结构变异的基因类型;采用RT-qPCR研究结构变异不同基因型之间基因的差异表达。结果显示,香猪群体中MAP3K4-I15-sv189位点存在两种基因型,DD型和ID型(D为缺失基因,I与参考基因一致),其中D等位基因的频率为97.35%;大白猪群体中检测到3种基因型,DD型、ID型和II型,D等位基因频率为80%。相比之下,香猪的D等位基因频率显著高于大白猪的相应值(PID型>II型,表明SV的缺失可能促进MAP 3K4基因的表达。本研究表明,香猪MAP 3K4的结构变异MAP3K4-I15-sv189以缺失型为主,缺失型可促进肺组织MAP 3K4基因的表达。研究结果有助于解析香猪易感肺部疾病的分子机制。

摘要：为评价饲料油菜(Brassica napus)及其不同生长时期的营养品质差异,采用双因素随机区组设计,研究饲料油菜‘牲饲1号’‘牲饲2号’和‘油研50’在薹期(BS)、初花期(EFS)、盛花期(FBS)和终花后1周(FFS)刈割,对生物产量、粗蛋白及其氨基酸组分含量的影响。结果表明,1)品种(组合)对饲料油菜生物产量影响显著(P0.05);其中,‘牲饲2号’FFS生物产量最高。2)从BS至FFS,3个品种(组合)植株粗蛋白(CP)含量(干基)分别从26.88%、27.05%和25.66%降至15.22%、16.06%和15.45%,且品种间差异均达显著水平(PFFS>EFS>BS,‘牲饲1号’为FBS>EFS>FFS>BS,其中‘牲饲2号’FBS刈割处理最高(1855.55 kg·hm^(-2)),‘牲饲1号’FBS处理次之(1645.85kg·hm^(-2))。3)3个品种(组合)均含7种必需氨基酸(E)和10种非必需氨基酸。处理间氨基酸、总氨基酸(T)、必需氨基酸、非必需氨基酸、药效氨基酸、甜味氨基酸、鲜味氨基酸和苦味氨基酸含量均有显著差异。除蛋氨酸外,其他必需氨基酸含量均表现为BS>EFS>FBS>FFS。除蛋氨酸+半胱氨酸外,E/T均高于FAO/WHO推荐标准、必需氨基酸的比值系数均接近1,各处理氨基酸比值系数分(SRC)为56.81~71.34,‘牲饲2号’FFS刈割处理SRC值最高(71.34)。4)以三江牛红牛肉、婆罗门牛肉和巴美肉羊为参比蛋白,‘牲饲2号’和‘油研50’FFS刈割必需氨基酸指数(EAAI)处于0.90~0.94,为良好蛋白质;以蕨麻猪肉为参比蛋白,‘牲饲2号’FFS刈割EAAI值为0.97,为优质蛋白,‘牲饲2号’FBS刈割和‘油研50’FFS刈割,EAAI值分别为0.86和0.94,均达到良好蛋白标准。

摘要：CRISPR/Cas9系统是一类有效的目标基因编辑工具,能够精准编辑植物基因组以改善植物的性状。该技术能够同时靶向一个或多个序列,切割后通过非同源末端连接或同源重组引入新的遗传变异。然而,CRISPR/Cas9技术对于木本植物仍为挑战,主要局限于基因组倍性与再生转基因植物的能力。为了建立一套有效的杜仲(Eucommia ulmoides)基因编辑系统,利用农杆菌介导的遗传转化,以杜仲EuFLC(Flowering Locus C)基因为靶标,通过设计4个向导RNAs(sgRNAs)靶向EuFLC的2个保守区域转化杜仲,在卡那霉素选择培养基上筛选4周后,分离出抗性株系,通过Sanger测序对其进行基因分型。结果表明:EuFLC的编辑效率约为5.62%,sgRNA1与sgRNA2介导的突变类型均为单个碱基的替换,其中sgRNA1编辑效率约为1.12%;sgRNA2编辑效率最高,约为4.49%,首次成功在杜仲细胞中实现基因编辑。本研究为杜仲基因功能鉴定与遗传改良提供了新的途径。

摘要：金佛山方竹是中国西南地区特有的笋用竹种,目前关于金佛山方竹品种选育的研究还不够完善。本研究对金佛山方竹3个发育部位笋箨进行转录组测序,利用Varscan和MISA程序分析、比较转录组序列中SNP和SSR的特征。研究表明,99 744条Unigene序列中含有18 560个SSR,发生频率为15.22%,重复基元共181种,SSR位点以单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸重复基元为主,合计占比96.57%,基元长度在12~20 bp的SSR占比53.28%,具有中等多态性。设计共获得14 888对SSR引物。搜索到的SNP位点分别为CK-S:536 642个、CK-Z:552 763个、CK-X:523 844个,SNP的主要类型是转换型,共计506 057个。金佛山方竹笋箨转录组测序得到的SSR和SNP位点数量多、多态性好、类型丰富,可以为金佛山方竹的品质鉴定、分子辅助育种、遗传多样性分析等提供一定的理论依据。