摘要：为了实现多指标筛选绿茶中抑菌成分,对其提取工艺进行了优化。以3个贵州特色茶树品种(黔茶1号、黔湄419、黔湄601)夏季的一芽三叶为原料,福鼎大白茶为对照,分别加工成绿茶,采用双层平板法比较抑菌活性,并测定各提取物活性成分的含量,以相关成分的含量为指标设计正交试验研究提取工艺。结果表明,4个茶树品种绿茶甲醇提取物与水提取物共8个样品均表现出一定的抑菌效果,其中黔茶1号绿茶醇提取物的抑菌效果最佳。相关性分析表明,与抑菌作用呈相关关系的成分有总酚、总黄酮、儿茶素类、EGCG、ECG和EC。以上述6种成分为指标,最佳的提取工艺条件为:浸提时间12 min,浸提温度70℃,料液质量体积比1∶25,甲醇体积分数75%。3次平行验证RSD值均在5%以内。综上所述,本研究优选出的甲醇提取工艺条件科学合理、简单可行,可为黔茶1号的进一步研究和生产抑菌产品提供理论依据。

摘要：本研究在课题组已构建的杜仲基因组数据库注释的信息基础上设计特异性引物,利用同源克隆的方法从杜仲转录本中克隆得到一个基因的全长编码序列(CDS),将该基因命名为EuDREB1。序列分析结果表明EuDREB1基因的CDS序列全长为255 bp,共编码84个氨基酸,包含1个AP2结构域,且该结构域的第14位氨基酸为缬氨酸(V),符合DREB类转录因子的蛋白序列特征,推断EuDREB1基因属于该类转录因子基因。分析可知,转录因子EuDREB1为不稳定的亲水性蛋白,相对分子质量为9.41 kD,理论等电点pI为5.66,含有磷酸化位点但不具有信号肽及跨膜结构;其二级结构中含有4个α-螺旋、1个β-折叠及6个无规卷曲;其三级结构以α螺旋及β折叠为主,符合AP2结构域的模型特征。本研究通过克隆EuDREB1基因并进行相应的生物信息学分析,为进一步探明杜仲DREB转录因子相关基因的功能提供了一定的实验基础。

摘要：根据本实验室已建立的朝仓花椒转录组数据库提供的序列信息设计引物,以朝仓花椒嫩芽为材料提取总m RNA,采用RACE技术克隆了朝仓花椒几丁质酶基因5’端1 080 bp和3’端896 bp c DNA片段,连接至p UC19载体,经测序拼接后获得全长1 373 bp的（Zanthoxylum piperitum *** Makino Chitnase 1,Za CHI 1）c DNA序列,其中开放阅读框969 bp,共编码322个氨基酸残基。在NCBI中BLASTp比对,Za CHIT 1与c克莱门柚、土瓶草CHIT序列同源性分别为88%和81%;预测的蛋白质Za CHIT 1氨基酸序列经BLAST比对,显示该预测蛋白质序列属于lysozyme-like超家族。对Za CHIT 1基因在不同器官中的表达量进行测定后发现,该基因在不同器官中的表达量有明显的差异,在器官中具体表现为在茎中最高,其次是果实,最后是叶片。此外,该基因的表达量与性别无关。

摘要：为解析杜仲BR相关基因功能,本研究通过前期构建的杜仲转录组数据库注释的信息,获得BRI1同源序列。设计特异性引物,以杜仲基因组DNA及c DNA为模板进行PCR扩增克隆得到3 612 bp cDNA序列,命名为EuBRI1。序列分析发现EuBRI1是一个无内含子的完整开放阅读框,编码1 203个氨基酸的蛋白。分析表明,EuBRI1为稳定亲水性蛋白,相对分子质量为131.361 kD;理论等电点p I为6.31;对其二级结构分析显示α-螺旋占31.50%,无规卷曲占55.94%,延伸链占12.55%,EuBRI1含信号肽序列和跨膜结构以及BRI1家族激酶的保守结构域。进化树分析表明,EuBRI1蛋白序列与醋栗番茄（Solanum pimpinellifolium）BRI1进化上较接近,与橡胶树（Hevea brasiliensis）BRI1相对等较远。研究结果为进一步阐明杜仲BR相关基因的功能奠定基础。

摘要：对贵州省六盘水市田间发病小黄姜进行病毒检测,分析小黄姜病毒种类。采用小RNA高通量测序技术结合生物信息学方法对小RNA数据库进行拼接组装,预测小黄姜病毒种类。设计特异性引物,采用反向PCR及分段克隆测序方法验证小黄姜病毒的存在。检测发现有3条拼接序列与DNA杆状病毒属（Badnavirus）中的薯蓣杆状病毒（Dioscorea bacillifrom virus,DBV）相似,氨基酸相似度均高于80%。并在小黄姜样品中扩增得到1 883 bp病毒序列。RT和RNase H基序核苷酸序列与来自古巴的Banana streak virus（Gen Bank登录号：KF386733）相似性最高,为74%。根据目前的国际病毒分类委员会（the international committee on taxonomy of viruses,ICTV）病毒分类方案,Badnavirus病毒中RT和RNase H核苷酸基序相似度低于80%的可划为不同病毒种,该病毒可能是Badnavirus中的一种新病毒,暂命名为小黄姜杆状病毒（Zingiber bacilliform virus）。小黄姜杆状病毒在30个田间小黄姜样品中存在且存在多态性,该病毒可能是一个古老的病毒,在小黄姜进化过程中将病毒基因组整合到小黄姜基因组中来防御杆状病毒属病毒的侵染。

摘要：为了加强对杜仲资源的有效保护和可持续利用,了解杜仲的遗传背景,我们基于杜仲雌雄株转录组数据库开发SSR标记,能够应用于杜仲的功能基因发掘、分子标记辅助育种、遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究。基于杜仲雌雄株转录组数据库Unigenes序列,利用MISA软件进行SSRs序列查找及其特征分析;根据微卫星的两翼序列设计引物,以1份随机挑选的杜仲基因组DNA为PCR扩增模板,采用L9(34)正交试验设计优化SSR-PCR反应体系,检验引物扩增效果和各引物扩增条件,进一步以10份不同来源的杜仲DNA为模板检测扩增引物的有效性。发掘了74 230个SSR位点,分布在61 629条Unigenes中,占总Unigenes 33.99%,其中,12~24 bp长度的重复基序最多,基序重复次数以11~15次居多;重复基序种类主要以一、二、三重复基元类型为主,占98.6%,其中出现最多的3种重复类型分别为:A/T(73.16%)、AG/CT(10.91%)、AAG/CTT(1.14%)。采用L9(34)正交试验获得的最优SSR-PCR体系为:20μL体系中含2×Premix Taq酶(0.05μmol·min-1·μL-1)10μL、DNA模板(25 ng/μL)1μL,引物(10μmol/L)0.5μL,以dd H2O补足。从210对引物中筛选获得140对引物,成功用于杜仲基因组PCR的有效扩增,占66.66%,进一步以9个地区的10份杜仲资源,检验上述引物多态性,最终获得15个稳定、可重复的多态性SSR位点,上述位点共检测到57个等位基因,平均每个位点包含3.8个等位基因,杂合度(Ho)为0~1.0,期望杂合度(He)为0.28~0.78,多态信息量(PIC)为0.26~0.70,平均值为0.44。经测序验证,该15个SSR位点都含有预期的重复基序序列。杜仲雌雄株转录组序列中含有高频率的SSR位点,以期开发获得的多态性SSR标记能够应用于杜仲不同种群间的遗传结构和遗传多样性分析,为杜仲的合理保护提供科学依据。

摘要：为了阐明microRNA对猪产仔数的调节机制,采用CRISPR/Cas9技术构建针对猪miR-136的基因编辑表达载体。通过实验,在miR-136基因成熟区及其下游设计两个单链引导RNA(sgRNA),合成4条磷酸化的单链DNA寡核苷酸,复性后形成两条带粘性末端的双链寡核苷酸片段,插入线性化的载体pX462的BpiI酶切位点处,转化感受态大肠杆菌DH5α,经测序确认,得到两个编辑表达载体pX462-miR-136-1和pX462-miR-136-2。构建了两个编辑miR-136基因的表达载体,为猪繁殖力的调控研究奠定了技术基础。

摘要：本研究利用MISA软件筛选火龙果转录组测序获得的108 127条Unigenes,共检测出7 622个EST-SSR位点,其发生频率为6.02%,平均每9.00 kb出现1个位点。单核苷酸重复类型占优势,占总EST-SSR位点的56.59%,其次是二核苷酸和三核苷酸,分别占28.4%和14.04%;其它特性重复类型数量较少,所占比例均不足1%。二核苷酸重复基元类型中以AG/CT、AC/GT为优势重复基元,分别占总SSR位点数目的25.37%和2.02%;三核苷酸重复基元类型以AAG/CCT为主,占总SSR位点数目的 3.13%。设计合成125对EST-SSR引物,并随机选取8份形态学差异明显的火龙果种质提取基因组DNA,进行PCR扩增,采用琼脂糖凝胶电泳和10%聚丙烯变性凝胶电泳检测方法对引物进行初步检测,筛选出32对扩增条带锐利清晰的引物。选取38份火龙果种质对筛选出的引物进行多态性检测,获得16对多态性较好的引物,共扩增出47个多态性位点,多态信息含量(polymorphism information content, PIC)范围为0.243～0.667,平均多态性信息含量(polymorphism information content, PIC)为0.459,平均观测等位基因数(number of alleles, Na)为3,平均香农信息指数(Shannon's information index, I)为0.891;利用引物C31931、C13719和C32141等8种引物组合可以有效区分38份火龙果种质,构建其DNA的EST-SSR指纹图谱;UPGMA聚类分析,以0.62为阈值,可将38份火龙果种质分为3类:第一类包括红肉与粉红肉种质,第二类为白肉种质,第三类为蛇鞭柱属的2个种质。本研究基于火龙果转录组测序序列开发了一批具有高度多态性潜力的SSR引物,该引物可有效地将38份火龙果种质区分开来。因此,基于火龙果转录组测序开发的EST-SSR标记,可为火龙果种质鉴定、亲缘关系分析及遗传图谱构建等提供更丰富的标记来源。

摘要：根据前期克隆的火龙果过氧化氢酶基因(HuCAT)设计特异引物,从克隆载体PMD18T-HuCAT中扩增出特异带,将其连入植物表达载体pSH737,构建了CaMV35s启动子驱动的表达载体pSH737-HuCAT;采用农杆菌介导法转化烟草,获得37个抗性植株,经GUS组织化学染色及PCR扩增鉴定,有29个株系为转基因植株;经半定量RT-PCR及荧光定量PCR检测,筛选出高表达株系22个;以PEG-6000溶液模拟干旱胁迫条件,测定转基因烟草的抗旱相关生理指标,结果显示,转基因烟草CAT活性、SOD活性、POD活性、PRO含量和相对含水量均高于野生型烟草,MDA含量低于野生型烟草,表明转HuCAT基因可能提高了烟草的抗旱性.

摘要：为了探究不同土壤类型与土壤厚度对葛根叶绿素荧光特性的影响,为制定葛根相应的栽培管理措施提供科学依据,以葛根为试验材料,设计不同土壤类型(石灰土、黄壤、石英砂)与土壤厚度(10、20、30、40、50 cm),用碳酸盐岩隔板设计成不同高度以模拟喀斯特小生境,测定并分析其叶片荧光特性参数对不同土壤类型与厚度的响应特征。结果表明,不同土壤类型与土壤厚度处理下葛根叶绿素荧光参数均有极显著差异(P<0.01),土壤类型占主导作用,土壤厚度过低或过高均会影响葛根的光合作用;石灰土栽培条件下,葛根叶片的F 0、qN值低于其他2种土壤类型处理,但F m、F v/F m、ETR高于其他2种处理;在40 cm石灰土处理下,葛根叶片的F 0、qN为所有处理中最低,但F v/F m、ETR值为所有处理中最大。由此可知,石灰土是最适宜葛根叶片光合的最佳土壤类型;40 cm石灰土厚度栽培为葛根最佳栽培方式。