摘要：本试验旨在研究刺梨籽对肉兔消化代谢、血浆生化指标、屠宰性能及肉品质的影响。采用完全随机区组试验设计,将96只体重相近、体况良好的5周龄断奶新西兰白兔分为4组,每组12个重复,每个重复2只。对照组饲喂不添加刺梨籽的基础饲粮,试验组分别饲喂添加120、240和360 mg/kg刺梨籽的试验饲粮。饲养试验持续77 d,其中预试期14 d,正试期63 d。结果显示:与对照组相比,1)饲粮添加不同水平刺梨籽均可显著升高酸性洗涤纤维和粗脂肪表观消化率(P0.05)。4)饲粮中添加不同水平刺梨籽均可显著上调肌肉pH_(45 min)(P<0.05),添加240 mg/kg刺梨籽可显著降低肌肉pH_(24 h)(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加240 mg/kg刺梨籽可改善肉兔对饲粮中养分的消化利用,增强血浆抗氧化能力,对屠宰性能与肉品质无不良影响。

摘要：胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素，对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用，本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响。选用健康的成年(2～3岁)关岭牛3头，采集心、肝、脾、肺、肾、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌、胃、小肠12个组织样提取RNA，采集背最长肌组织成功培养关岭牛成肌细胞。运用qPCR技术检测IGF1基因在不同组织中的相对表达量；运用在线软件对关岭牛IGF1蛋白质理化性质、二级结构和三级结构、亚细胞定位进行分析；同时通过在线软件设计IGF1基因的3对短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)干扰序列和1对阴性对照序列，与pGPU6-GFP-Neo载体连接后进行测序，将构建成功的IGF1基因干扰载体转染至成肌细胞；运用qPCR技术检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体，分析该干扰载体对IGF1基因表达的影响；运用qPCR技术检测干扰IGF1基因对细胞增殖相关基因细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclin-dependent kinases 2, CDK2)的相对表达量影响；运用CCK8 (Cell Counting Kit-8)法检测成肌细胞增殖情况。结果表明，IGF1基因在关岭牛心、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌等12个组织样中均有表达，在肝中相对表达量最高，极显著高于其他组织(P<0.01)；在培养关岭牛成肌细胞的基础上，成功构建关岭牛IGF1基因干扰载体，并筛选出shRNA-IGF1-1干扰效率最高(P<0.01);IGF1蛋白的分子式为C744H1186N214O216S15，相对分子质量为17.06581 kD，理论等电点为9.36，属碱性不稳定蛋白；IGF1基因被抑制后，细胞增殖相关基因cyclin D1和CDK2的表达量均极显著低于shRNA-NC (P<0.01)。CCK8法检测细胞增殖结果表明，IGF1基因被抑制后，在24和72 h成肌细胞增殖均显著低于对照组(P<0.05),48 h为极显著水平(P<0.01)，表明体外沉默IGF1基因后，会影响成肌细胞增殖能力和抑制成肌细胞增殖相关基因表达。本研究为进一步研究IGF1基因对关岭牛肌肉生长发育的作用及调控机制提供了基础数据。

摘要：成纤维细胞生长因子10基因(fibroblast growth factor 10, FGF10)属于成纤维细胞生长因子家族成员之一,在脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用。为了进一步揭示FGF10基因在从江香猪(Sus scrofa)肌内脂肪中的调控作用,本研究通过在线软件设计了FGF10基因4对siRNA干扰序列和一对阴性对照序列,连入pGPU6/GFP/Neo载体后,筛选成功构建的干扰载体,并转染从江香猪肌内前体脂肪细胞,并采用qRT-PCR的方法筛选出最佳干扰载体,通过最佳干扰载体抑制FGF10基因的表达,采用qRT-PCR检测沉默FGF10对脂肪分化关键基因—过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(peroxisome proliferator activated receptorγ, PPARγ)、脂肪组织甘油三酯水解酶基因(adipose triglyceride lipase, ATGL)、脂联素基因(adiponectin, ADIPOQ)、脂肪酸结合蛋白4基因(fatty acid binding protein 4, FABP4)、脂肪酸合成酶基因(fatty acid synthase, FAS)、脂蛋白酯酶基因(lipoprotein lipase, LPL)、乙酰辅酶A羧化酶基因(acetyl-CoA carboxylase, ACC)以及激素敏感脂酶基因(hormone sensitive lipase, HSL)表达的影响。结果表明,本实验成功构建了从江香猪FGF10基因的干扰载体,并筛选出最佳干扰载体的干扰效率达74.30%;抑制FGF10基因表达后,相关脂肪分化关键基因ACC、ATGL、ADIPOQ、FABP4、FAS、LPL、PPARγ和HSL的表达量均显著降低,ACC与PPARγ的表达量显著低于空白对照组(P0.05)。本实验将构建的FGF10基因的干扰载体成功地转染了从江香猪肌内前体脂肪细胞,体外沉默FGF10基因可抑制猪肌内前体脂肪的分化,这可能与相关脂肪分化基因的低表达有关。本研究为进一步研究FGF10基因对脂肪沉积的调控机理奠定基础。

摘要：本试验研究了0~6周龄贵州黄鸡的能量需要,旨在为贵州黄鸡的科学养殖和制定其饲养标准提供理论依据和数据参考。采用单因素完全随机试验设计,选取健康1日龄贵州黄鸡雏鸡400只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复20只鸡。4组试验鸡饲粮能量水平分别为10.03、11.71、12.54和13.16 MJ/kg,试验期为6周。通过饲养试验,测定每周的体重和采食量,计算平均日增重、平均日采食量和料重比;通过代谢试验,测定表观代谢能及养分表观代谢率;通过比较屠宰试验,测定鸡体能量、粗蛋白质和粗脂肪含量,计算鸡体能量、粗蛋白质和粗脂肪沉积率,确定饲粮适宜能量水平。结果显示:饲粮能量水平对0~6周龄贵州黄鸡的平均日增重、平均日采食量和料重比均有显著影响(P<0.05),对平均日增重进行二元回归分析得到最适饲粮能量水平为11.17 MJ/kg。饲粮能量水平对0~6周龄贵州黄鸡的各养分表观代谢率均有显著影响(P<0.05),适当提高饲粮能量水平可以提高各养分的表观代谢率,进而提高饲料利用率。以此为判定指标,推荐0~6周龄贵州黄鸡饲粮能量水平为12.54 MJ/kg。饲粮能量水平对0~6周龄贵州黄鸡的能量、粗脂肪以及粗蛋白质的摄入量和沉积率均有显著影响(P<0.05)。适宜的饲粮能量水平会提高三大养分的沉积率,以此为评定指标,推荐0~6周龄贵州黄鸡饲粮能量水平为12.54 MJ/kg。通过回归分析建立的0~6周龄贵州黄鸡的能量需要预测模型为AME G=377.70+1.6069NE G(R 2=0.7591,式中AME G为增重表观代谢能,NE G为增重净能),得出每千克代谢体重的维持表观代谢能需要量为377.70 kJ,其增重表观代谢能的增重净能转化率为62.23%。

摘要：旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列,将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上,转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体,并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响;随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响,各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示,本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后,成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比,干扰组细胞周期明显延长,干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测,MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后,可有效抑制MEF2A基因表达,改变基因表达模式,影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖,为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。

摘要：本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子,定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区,构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞,依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示,MyoD I基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高;目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区;重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达,细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I,4个启动子均具有启动活性,其中P3启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高,初步推断P3启动子为该基因的核心启动子。

摘要：长顺绿壳蛋鸡是贵州特有的一个地方品种,为了更好地保护和利用该品种,有必要对长顺绿壳蛋鸡进行提纯。本试验随机抽取735只长顺绿壳蛋鸡作为研究对象,以绿壳基因(oocyan,O)作为候选基因,设计3条特异性引物,利用多重PCR技术对长顺绿壳蛋鸡进行纯合基因型的筛选。结果显示,在试验群体中,显性纯合基因型个体为172,隐形纯合基因型个体为69,其余的基因型个体为杂合子(494)。对该基因位点进行遗传特性分析,发现该位点属中度多态,且该位点在本群体中未达到Hardy-Weinberg平衡状态,这可能跟本群体经过了一定的选育有关。群体杂合基因型偏高,占67.21%,杂合子会在后代出现性状分离,所以有必要提高群体纯合绿壳基因频率和纯合基因型频率,从而提高群体绿壳蛋率,增加经济效益。

摘要：在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,建立了黄鳝精子激活条件的二次多项数学模型,并以黄鳝精子激活百分比为响应值作响应面和等高线,得到黄鳝精子激活的优化条件:盐度为0.2,pH值为7.4,K+∶Na+浓度为2∶1。在此条件下。

摘要：旨在克隆从江香猪磷酸化酶激酶γ2(phosphorylase kinase gamma 2,PHKG2)基因编码区,并对PHKG2基因功能进行初步探究。本研究利用RT-PCR法扩增从江香猪PHKG2基因完整CDS区。通过构建pEGFP-N3-PHKG2超表达载体,设计并合成4对针对从江香猪PHKG2基因的RNAi表达载体,瞬时转染至C2C12细胞株和从江香猪肾细胞中,以正常生长的细胞为空白对照,24h后检测各个重组载体的绿色荧光蛋白的表达情况。48h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测目的基因PHKG2和糖原代谢相关基因糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,muscle form,PYGM)、肌肉糖原合成酶(glycogen synthase 1(muscle),GYS1)、磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyce rate mutase,PGAM2)基因mRNA的表达情况,并且测定各组细胞中的糖原含量。结果表明,经过双酶切、测序检测以及脂质体瞬时转染至C2C12细胞中,验证超表达载体pEGFP-N3-PHKG2和4对RNAi表达载体均构建成功。转染至从江香猪肾细胞后,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(pEGFP-N3),超表达载体pEGFP-N3-PHKG2能极显著提高PHKG2基因的表达量(P<0.01),同时显著上调PGAM2、PYGM基因的表达量(P<0.05),并且显著降低细胞中糖原的含量(P<0.05)。各RNAi载体中,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(NC),shRNA-1的干扰效率较高,极显著下调PHKG2基因的表达量(P<0.01),显著下调PGAM2、PYGM、GYS1基因的表达量(P<0.05),并且显著升高细胞中糖原含量(P<0.05)。shRNA-2极显著下调PHKG2基因的表达量(P<0.01);shRNA-3对PHKG2基因的表达也能起到显著的干扰作用(P<0.05);shRNA-4对于所检测的4个基因干扰效果不明显;shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4转染细胞后,细胞中糖原含量升高水平不明显。PHKG2基因超表达和RNAi后可分别明显上调和抑制PHKG2、PYGM、PGAM2、GYS1基因的表达,并且分别降低和提高糖原含量,可能是影响从江香猪猪肉品质的重要候选基因,为进一步研究PHKG2基因在细胞糖原代谢通路中的作用机制奠定基础。

摘要：根据GenBank中报道的猪载脂蛋白A5(apoA5)基因序列设计3对引物,通过PCR方法分别对可乐猪和贵州白香猪的apoA5基因进行扩增、测序,将2个猪种apoA5基因序列进行比对,并找出基因变异位点。结果表明:可乐猪apoA5基因DNA长为2474bp,白香猪apoA5基因DNA长为2473bp,分别包含3个外显子,2个内含子。2个猪种apoA5基因编码区长皆为1092bp,编码363个氨基酸。白香猪apoA5基因序列与可乐猪相比,存在12个突变位点,其中6个位点为颠换,5个为转换,1个为缺失,两者核苷酸同源性为99.6%。这为进一步研究猪apoA5基因的多态性、生物学活性以及与猪生产性状相关性研究奠定了一定基础。