摘要：【目的】构建硒结合蛋白1基因(SBP1)过表达与干扰重组慢病毒载体,并通过感染猪骨骼肌卫星细胞验证SBP1基因的过表达和沉默效果,为后续揭示SBP1基因调控肌纤维类型转化及猪肉品质的分子机理打下基础。【方法】在对猪SBP1蛋白进行生物信息学分析的基础上,根据GenBank中猪SBP1基因mRNA序列(XM_021089863.1)PCR扩增SBP1基因全长序列,克隆至过表达慢病毒载体pHBLV-CMV上构建SBP1基因过表达重组慢病毒载体;同时针对猪SBP1基因设计3个干扰靶点序列和1个阴性对照序列,分别克隆至干扰慢病毒载体pHBLV-U6上构建SBP1基因干扰重组慢病毒载体。以构建的重组慢病毒载体感染猪骨骼肌卫星细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞系,并采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测SBP1基因及其蛋白的表达情况。【结果】猪SBP1蛋白分子式为C_(2523)H_(3916)N_(678)O_(727)S_(24),相对分子量为56.14839 kD,理论等电点(pI)为6.40,为稳定的分泌蛋白;存在39个潜在磷酸化位点,包括20个丝氨酸磷酸化位点、6个酪氨酸磷酸化位点及13个苏氨酸磷酸化位点。以构建的SBP1基因过表达与干扰重组慢病毒载体分别感染猪骨骼肌卫星细胞,经嘌呤霉素筛选2代后,在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光。实时荧光定量PCR检测结果表明,过表达组的SBP1基因相对表达量极显著上调32.0倍(P<0.01,下同),干扰组中以shRNA-3的沉默效果达极显著水平,对应的SBP1基因相对表达量下调58.45%;Western blotting检测结果显示,过表达组的SBP1蛋白表达量极显著上调,而shRNA-1、shRNA-2和shRNA-3干扰组的SBP1蛋白表达量均极显著下调。【结论】基于猪骨骼肌卫星细胞成功构建了猪SBP1基因过表达稳定表达细胞系,同时鉴定出shRNA-3对SBP1基因的沉默效果最佳并获得稳定沉默细胞系,为后续揭示SBP1基因调控猪肉品质的分子机理打下了基础。

摘要：本试验旨在探索不同精粗比饲粮对贵州白山羊背最长肌中常规营养成分、氨基酸、脂肪酸等营养成分含量的影响。试验选择体况健康、体重[(15.96±2.94)kg]相近的育肥阶段白山羊36只,采用单因素随机区组设计,随机分为4组,每组9个重复,每个重复1只羊,分别饲喂精粗比为30∶70、40∶60、50∶50、60∶40的饲粮,预试期7 d,正试期60 d。正式期结束后屠宰,每只羊采集背最长肌500 g进行相关指标测定。结果显示:50∶50组和60∶40组水分含量显著高于30∶70组和40∶60组(P<0.05),60∶40组粗脂肪含量显著高于30∶70组(P<0.05),30∶70组粗蛋白质含量显著高于50∶50组和60∶40组(P<0.05)。50∶50组精氨酸含量显著低于60∶40组(P<0.05),60∶40组必需氨基酸、鲜味氨基酸和总氨基酸含量最高,30∶70组甜味氨基酸/总氨基酸最高。40∶60组棕榈酸含量显著低于其他组(P<0.05),30∶70组和40∶60组硬脂酸含量显著高于50∶50组和60∶40组(P<0.05),30∶70组棕榈油酸含量显著低于50∶50组和60∶40组(P<0.05),30∶70组和40∶60组油酸含量显著低于60∶40组(P<0.05),30∶70组二十碳烯酸含量显著低于60∶40组(P<0.05),30∶70组反亚油酸、亚油酸和二十碳三烯酸含量显著低于其他组(P<0.05),30∶70组和40∶60组α-亚麻酸含量显著低于50∶50组和60∶40组(P<0.05),60∶40组二十碳二烯酸含量显著低于其他组(P<0.05),30∶70组饱和脂肪酸含量最高,60∶40组单不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸和总脂肪酸含量最高。综上可知,饲粮精粗比为60∶40时贵州白山羊肌肉粗脂肪含量高,氨基酸和脂肪酸含量丰富,肌肉的多汁性、风味及品质好,营养价值高。

摘要：试验采用4×4拉丁方试验设计,选取8只体况良好的经产萨能奶山羊[体重(41.50±1.84)kg;平均数±标准差]随机分为4组,四种日粮处理分别为(粗饲料均占日粮干物质50%):粗饲料为稻草组(NC)、黏玉米秸秆青贮饲料组(PC1)、黏玉米秸秆青贮饲料+1 g/d商业紫玉米花青素提取物组(PC2)及紫玉米秸秆青贮饲料组(AR)。每期试验周期持续21 d,其中最后7 d为样品采集期。结果表明:1)羊舍平均温度、湿度与温湿指数分别为30.54℃、72.66%及82.28。2)黏玉米和紫玉米秸秆青贮饲料蛋白和能量价值参数差异均不显著(P>0.05)。3)NC组显示较低水平(P<0.05)的消化能、代谢能、总能表观消化能与总能利用率;AR组消化能利用率显著(P<0.05)高于其他组。4)NC组葡萄糖显著(P<0.05)低于PC2组和AR组;但尿素氮显著(P<0.05)高于其他组。5)PC2与AR组谷胱甘肽S-转移酶显著(P<0.05)高于NC和PC1组;PC2与AR组丙二醛显著(P<0.05)低于NC和PC1组。由此可见,紫玉米秸秆青贮饲料可提高热应激奶山羊的消化能利用率,改善能量利用;对血浆代谢参数无副作用影响,但可提升抗氧化参数,有缓解奶山羊热应激的潜力。

摘要：【目的】探明苏氨酸(Thr)水平对1~4和5~7周龄兴义矮脚鸡生长和养分代谢的影响,为兴义矮脚鸡饲养标准的制定奠定基础。【方法】采用单因子设计,选取144只0日龄健康、体重相近的兴义矮脚鸡雏鸡,随机分成4组,1~4周龄1~4组兴义矮脚鸡分别饲喂苏氨酸水平为0.80%、0.87%、0.94%、1.07%饲粮,5~7周龄饲喂水平分别为0.70%、0.80%、0.90%、1.0%,测定兴义矮脚鸡的生长性能和养分代谢率。【结果】在1~4周龄,随着Thr水平提高,兴义矮脚鸡的日增重(ADG)和日均采食量(ADFI)随之增加,1.07%和0.94%水平组ADG和ADFI均显著高于0.87%和0.80%组(P0.05),料重比(F/G)以0.70%水平的最低(P<0.05),显著低于其他3组。【结论】兴义矮脚鸡在1~4周龄时,苏氨酸适宜水平为0.94%;5~7周龄,适宜苏氨酸水平则为0.90%。