摘要：[目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。

摘要：为了寻找枇杷花药愈伤组织诱导的最佳条件及配方。以枇杷花药为试验材料,采用完全组合设计研究了温度、蔗糖浓度、激素对花药愈伤组织诱导的影响。低温处理对愈伤组织的形成没有多大影响,随着低温时间的延长,愈伤组织诱导率低于对照;30 g/L蔗糖诱导花药愈伤组织的效果较好,诱导率为62.5%;在附加1 mg/L 2,4-D和2 mg/L 6-BA的MS培养基上,诱导率最高,为90.00%;MS+0.25mg/L6-BA+1 mg/LNAA最有利于愈伤组织的增殖。高浓度的蔗糖不利于愈伤组织的形成。一定浓度的2,4-D和6-BA对枇杷花药愈伤组织的诱导有较大的影响,且2,4-D起着主导作用。