摘要：为开发菜豆高效新型分子标记,从分子水平解析菜豆重要种质的遗传多样性及亲缘关系,基于菜豆转录组数据,设计EST-SSR引物,建立EST-SSR标记系统.利用PCR筛选出多态性引物,结合毛细管电泳,分析81份菜豆种质的亲缘关系,并构建分子身份证.通过MISA软件,在菜豆转录组数据85276条非冗余序列中,共挖掘出11649个EST-SSR位点.菜豆转录组SSR标记主要重复单元为1~3个碱基,其中单碱基为主要类型,占总量的56.7%;其次是三碱基重复,占总量的21.1%.从128对EST-SSR引物中筛选出18对多态性高、重复性好的引物进行PCR扩增.供试种质的多态性信息量(PIC)为0.50~0.95,平均为0.88;遗传相似性系数为0.15~0.65,以0.35为阈值可将81份种质分为3大类,其中贵州种质主要分布于第Ⅰ,Ⅲ类,而省外品种仅分布在第Ⅱ类.利用核心引物TDc9和TDc66可以有效区分81份菜豆种质,并构建其分子身份证.研究开发的EST-SSR标记系统,可用于菜豆种质的鉴定及亲缘关系分析.

摘要：木霉具有抑制病原菌、促进植物生长和改善土壤营养等作用。刺梨渣是刺梨榨汁后的废弃物,具有极高的利用价值。本文拟采用刺梨渣为原料,麸皮为辅料进行固体发酵,以橘绿木霉GF-11的分生孢子数量为筛选指标,通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计-响应曲面法(responsesurface methodology,RSM)对影响发酵刺梨渣的条件进行优化。结果表明,培养基配方中对橘绿木霉GF-11产孢影响最显著的3个主要因素麸皮占比、接种量、发酵天数。优化后的发酵培养条件为麸皮占比61%、接种量10.48%、硫酸锌0.5%、含水率250%、发酵天数10d。在此优化条件下发酵获得橘绿木霉菌株GF-11的分生孢子产量为2.32×10^(10)CFU/g。该研究为刺梨渣发酵提供了合适的工艺条件,为减少刺梨渣污染环境及其有效利用提供了基础,也为生产高质量生物有机肥提供了新的途径。

摘要：本研究以柳叶马鞭草盆栽苗为实验材料,探索其快繁体系。结果表明,将5~6 cm的带腋芽茎段以75%酒精与20%NaClO组合设计试验,发现用75%酒精消毒30 s, 20%NaClO消毒8 min的效果最好,7 d后污染率为12.78%,死亡率为4.44%,成活率达82.78%。将3~4 cm腋芽放在添加不同浓度6-BA、NAA的MS培养基中进行增殖诱导培养,发现在培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA培养时,30 d后诱导率为100%,增殖系数达4.77,产生的丛生芽数目多。将3~4 cm的丛生芽剪成单芽,在培养基为MS+0.10 mg/L NAA进行培养时,15 d后株高差为4.64 cm,芽苗健壮且无枯萎现象。将长势好、高度5 cm左右的柳叶马鞭草无根苗置于培养基中探索IBA、NAA激素浓度,在MS+0.10 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA条件下,15 d后生根率为100%,平均生根数为40.43,平均根长为3.27 cm;45 d后,平均根长为14.33 cm。进一步以蛭石代替琼脂作为基质,15 d后生根率为100%,平均根长可达4.50 cm, 45 d后平均根长可达42.33 cm,显著高于琼脂基质中的平均根长。自然光条件下炼苗4 d后,移栽至配比为V_(蛭石)∶V_(营养土)=1∶2的基质上,30 d后成活率为93.33%。

摘要：为探明水稻叶片SPAD值的最佳测定叶位和最佳的SPAD值次级指标,并构建基于水稻叶片SPAD值的氮素营养诊断模型,开展以品种为主区,氮肥施用量为副区的双因素裂区设计试验。参试品种为Q优6号和宜香优2115,氮肥施用量设5个水平(纯N 0、75、150、225、300 kg/hm^(2)),分析叶片的敏感性、代表性和稳定性,并探讨SPAD值次级指标与施氮量和叶片含氮量之间,及叶片氮积累量与叶片含氮量和产量之间的关系。结果表明,叶片敏感性、代表性和稳定性大小顺序分别为L4(顶4叶)>L3(顶3叶)>L1(顶1叶)>L2(顶2叶)和L3>L4>L2>L1、L2>L3>L4>L1,可见,L3、L4可作为氮素营养诊断的共同理想指示叶。选择L3、L4的SPAD值几何平均数(GMSI34)作为最佳的SPAD值次级指标。由叶片氮积累量与产量和叶片含氮量的抛物线方程、一元线性回归方程,GMSI34与叶片含氮量的指数方程,求得拔节期、孕穗期、抽穗期的SPAD值次级指标的临界值(GMSI34_(临))分别为48.5、44.3和42.9,与实际获取的GMSI34实相比较,若GMSI34_(实)-GMSI34_(临)<0时,则表明水稻缺氮,需要追氮,若GMSI34_(实)-GMSI34_(临)≥0,则表明水稻氮营养充足,无需追氮。综上,基于杂交水稻叶片SPAD值的氮素营养诊断模型,可为杂交水稻高效氮肥管理提供技术支持。

摘要：【目的】克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础。【方法】基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系。【结果】克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1137 bp,共编码378个氨基酸。UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近。UrLAMT启动子序列长度为1141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用。【结论】获得了UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导。

摘要：目的提取临床分离的鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(OmpA)的基因,并进行生物学预测和分析。方法查询鲍曼不动杆菌OmpA基因序列,设计特异性PCR引物,以提取的鲍曼不动杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增OmpA片段。回收目的片段,采用生物信息学软件分析OmpA蛋白的生物学特性。结果12株鲍曼不动杆菌多位点序列分型(MLST)序列分析有6个ST分型,分别是ST 208、ST 229、ST 191、ST 195、ST540、ST 1145,鲍曼不动杆菌OmpA基因序列全长为1070 bp的,单核苷酸多态性(SNP)位点较少,预测蛋白为跨膜蛋白,具有6种三级结构,均由β-桶状结构组成的保守结构域。结论临床分离的不同鲍曼不动杆菌株OmpA蛋白为结构相对保守的跨膜蛋白,具有维持细胞的形状和稳定性,参与细菌耐药机制及免疫原性作用。

摘要：探究超声波-酸法果胶提取工艺条件并分析狐臭柴叶片果胶分子结构与理化性质。通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法进行优化。结果表明,影响果胶提取的关键因素为pH、液料比、超声功率和反应时间。优化得到的工艺参数为pH值1.9、液料比12.5∶1(mL∶g)、超声功率450 W、反应时间95 min,在此条件下果胶得率为11.53%。通过高效液相色谱法对果胶分子质量进行测定,其重均分子质量(weight-average molecular weight,M w)为87.90 kDa,数均分子质量(number-average molecular weight,M n)为56.06 kDa,M w/M n为1.57。狐臭柴果胶中的单糖有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和果糖,其中半乳糖醛酸含量为70.64%,酯化度为77.77%,属于高酯果胶。狐臭柴果胶有很好的凝胶和增稠功能,且DPPH自由基清除率EC 50为(269.31±0.26)μg/mL,有良好的抗氧化活性。

摘要：为探究半夏疏松愈伤组织继代条件,建立半夏游离块茎悬浮培养体系,并验证其组织培养过程中是否发生体细胞无性系变异,以半夏叶柄为外植体,研究不同浓度的蔗糖与激素配比对其疏松愈伤组织增殖的影响,设计单因素试验和正交试验筛选诱导其游离块茎的适宜条件,通过SSR分子标记技术,检测游离块茎的遗传稳定性。结果表明,半夏疏松愈伤组织形成的适宜继代培养基为MS+2,4-D 2.0 mg·L^(-1)+6-BA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+0.6%琼脂,以此继代可获得大量用于建立悬浮体系的半夏疏松愈伤组织;适于疏松愈伤组织分化形成游离块茎的培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^(-1)+IBA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖20 g·L^(-1),以此培养可获得大量用于人工种子制作或直接播种的半夏游离块茎;通过SSR标记,发现组织培养诱导形成的半夏游离块茎在DNA水平上未发生变异,仍保持其亲本的遗传稳定性。

摘要：根据钩藤转录组中STR基因核心序列设计特异性引物,并进行RACE扩增,克隆到UrSTR基因(GeneBank:OL310251)的cDNA全长1541 bp,编码345个氨基酸;采用染色体步移克隆到UrSTR基因启动子(GeneBank:OL310252)序列1179 bp。系统进化发育树分析显示,钩藤UrSTR蛋白与同为茜草科的美丽帽柱木和短小蛇根草的STR蛋白聚为一类,其亲缘关系最近;亚细胞共定位实验表明UrSTR蛋白定位于液泡膜上;SDS-PAGE结果表明pET-28a-UrSTR重组蛋白成功表达且大小与预期相符;启动子顺式作用元件分析表明其含有光响应、胁迫响应和激素响应有关的多种调控元件;启动子活性分析UrSTR基因启动子具有转录活性。成功克隆了UrSTR基因及其启动子序列并对其进行生物信息学分析和启动子活性分析;后期需要优化UrSTR原核表达体系,为进一步纯化UrSTR蛋白研究其结构和功能奠定基础。

摘要：为评价饲料油菜(Brassica napus)及其不同生长时期的营养品质差异,采用双因素随机区组设计,研究饲料油菜‘牲饲1号’‘牲饲2号’和‘油研50’在薹期(BS)、初花期(EFS)、盛花期(FBS)和终花后1周(FFS)刈割,对生物产量、粗蛋白及其氨基酸组分含量的影响。结果表明,1)品种(组合)对饲料油菜生物产量影响显著(P0.05);其中,‘牲饲2号’FFS生物产量最高。2)从BS至FFS,3个品种(组合)植株粗蛋白(CP)含量(干基)分别从26.88%、27.05%和25.66%降至15.22%、16.06%和15.45%,且品种间差异均达显著水平(PFFS>EFS>BS,‘牲饲1号’为FBS>EFS>FFS>BS,其中‘牲饲2号’FBS刈割处理最高(1855.55 kg·hm^(-2)),‘牲饲1号’FBS处理次之(1645.85kg·hm^(-2))。3)3个品种(组合)均含7种必需氨基酸(E)和10种非必需氨基酸。处理间氨基酸、总氨基酸(T)、必需氨基酸、非必需氨基酸、药效氨基酸、甜味氨基酸、鲜味氨基酸和苦味氨基酸含量均有显著差异。除蛋氨酸外,其他必需氨基酸含量均表现为BS>EFS>FBS>FFS。除蛋氨酸+半胱氨酸外,E/T均高于FAO/WHO推荐标准、必需氨基酸的比值系数均接近1,各处理氨基酸比值系数分(SRC)为56.81~71.34,‘牲饲2号’FFS刈割处理SRC值最高(71.34)。4)以三江牛红牛肉、婆罗门牛肉和巴美肉羊为参比蛋白,‘牲饲2号’和‘油研50’FFS刈割必需氨基酸指数(EAAI)处于0.90~0.94,为良好蛋白质;以蕨麻猪肉为参比蛋白,‘牲饲2号’FFS刈割EAAI值为0.97,为优质蛋白,‘牲饲2号’FBS刈割和‘油研50’FFS刈割,EAAI值分别为0.86和0.94,均达到良好蛋白标准。