摘要：【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性。【结果】成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度0.35 mmol·L^(-1)。经镍柱纯化得到质量较好的RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin)。【结论】RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量。

摘要：查尔酮异构酶(CHI)是类黄酮生物合成过程中的关键酶之一,其在类黄酮的合成过程中发挥着非常重要的作用。本研究以日本蛇根草为研究材料,根据其转录组测序结果设计全长引物,通过RT-PCR方法成功克隆得到日本蛇根草查尔酮异构酶基因完整的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,该基因序列全长为702 bp,编码233个氨基酸,预测其蛋白分子量为25.018 k D,等电点为4.95,是亲水性蛋白质,不含有信号肽,很可能定位在叶绿体基质中。同时,二级结构分析显示,日本蛇根草CHI的二级结构分别由96个α螺旋、51个延伸链、86个无规则卷曲组成,这与三维结构预测结果相一致。日本蛇根草CHI基因的克隆对于研究植物类黄酮的生物合成及其分子机制具有重要意义,同时也丰富了双子叶植物CHI基因家族的相关研究。

摘要：日本蛇根草(Ophiorrhiza japonica)具有很好的观赏价值和药用价值,但基因组信息相对缺乏,导致其分子生物学和基因功能的研究受到限制。为了获得和挖掘日本蛇根草的基因数据和功能,本研究利用日本蛇根草RNA-seq转录组数据进行分析,总共产生8.48 GB数据;对所有单基因在KEGG通路数据库进行分析,共有131913个单基因被分配给KO(KEGG orthology),并定位到20个二层通路129个不同的通路。Unigene功能注释,获得GO分类条目134644条Unigenes;获得COG注释Unigenes 67961条,其中通用预测Unigenes最多。在28483条单基因簇中获得37070个简单重复序列(SSR),出现频率为16.25%,发生频率为12.49%,其平均长度为20 bp。通过设计进行筛选获取20379对SSR引物,随机筛选50对引物进行验证证明SSR引物具备有效性,日本蛇根草SSR位点具有较高的多态性潜能,对遗传多样性的鉴定具有潜在的开发价值。综上所述,本研究提供了有价值的基因研究和分子研究的信息来源,将为功能基因的克隆、基因表达、分子标记开发和遗传多样性研究提供帮助。

摘要：类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(3GT)是花色苷合成途径中首个修饰酶,在花色苷合成与积累过程中起关键作用。本研究以日本蛇根草作为材料,依据其转录组信息设计Oj3GT1基因特异性引物,通过RT-PCR等分子生物学方法,分离并获得Oj3GT1基因的完整cDNA序列,并对Oj3GT1的信号肽、功能结构域、理化参数、亲/疏水性和二级结构等进行了生物信息学分析。根据分析结果可知,Oj3GT1基因的完整CDS长度为1 377 bp,蛋白分子量为50.922 kD,等电点为6.20,属于亲水性蛋白质,不含有信号肽。同时二级结构分析结果显示,Oj3GT1的蛋白二级结构主要是以不规则卷曲为主。综上所述,Oj3GT1基因的克隆与生物信息学分析,将为日本蛇根草花色苷的生物合成研究提供科学依据,同时也为通过基因工程方法调控和改变日本蛇根草花色苷的合成提供理论支撑。

摘要：糖基转移酶是广泛存在于内质网和高尔基体内的一大类酶,参与体内重要生物活性物质如糖蛋白和糖脂中糖链的形成。本实验以日本蛇根草为研究材料,根据转录组测得的OjGT2基因序列设计引物,通过分子生物学方法克隆获得日本蛇根草OjGT2基因的cDNA序列,并完成了该基因及其编码蛋白质的生物信息学分析。分析显示,OjGT2基因的c DNA长度为1 041 bp,共编码346个AA,预测蛋白相对分子质量为52.37 kD,等电点为5.07,归属于糖基转移酶GTB超家族,含有多个糖基转移酶功能保守域,与其它植物糖基转移酶具有很高的同源性。研究结果将为该基因功能的解析及日本蛇根草糖基化代谢产物的研究提供参考。

摘要：糖基转移酶(GTs)是花色苷合成过程中最重要的修饰酶之一,其在花色苷合成过程中发挥重要作用。本研究以日本蛇根草为材料,依据其转录组测序结果,设计引物通过RT-PCR方法成功克隆得到OjGT1基因完整的cDNA序列,随后对OjGT1的功能结构域、生理和化学参数、亲/疏水性、信号肽,二级结构等进行生物信息学分析。分析结果显示,OjGT1基因完整的CDS长度为1 413 bp,翻译形成蛋白的分子量为52.087 kD,等电点为5.12,编码形成亲水性蛋白质,不含信号肽。同时二级结构与三级结构分析显示,OjGT1蛋白结构主要以不规则卷曲为主,其次是α螺旋,延伸链所占比重最小。OjGT1基因的成功克隆与生物信息学分析,将为后续研究茜草目其它植物糖基转移酶提供参考,同时也为日本蛇根草花色苷的生物合成研究提供科学依据。

摘要：为克服圆锥绣球种子萌发困难,提高种子萌发率,推动品种繁殖及选育,以贵州施秉野生圆锥绣球为材料,测量不同储藏条件、消毒处理、培养基类型和暗处理时间下种子的萌发及生长指标。结果表明:4℃低温干燥储藏条件最佳,4个月的发芽率和发芽指数仍高达90.9%和7.9;使用75%酒精消毒30s后再用8%次氯酸钠消毒1min可以消除种子污染,且发芽势、发芽指数、活力指数分别达38.8、10.1、103.9;不同培养基对圆锥绣球种子萌发有显著影响,B-5培养基显著高于其他培养基,发芽指数及活力指数分别达10.0和126.7;暗处理0d时,发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数最高,分别达90.7%、31.4、8.5和85.0。因此,圆锥绣球种子离体保存及培养条件选择4℃低温干燥保存、利用75%酒精消毒30s后再用8%次氯酸钠消毒1min,经过B-5培养基培养且不需要暗处理。

摘要：为探讨青篱柴转录组中简单重复序列(simple sequence repeat,简称SSR)位点信息,开发青篱柴分子标记技术,采用高通量测序技术获得青篱柴转录组原始试验数据,经过生物信息学软件Trinity拼接后,获得66 755条单基因簇(universal gene,简称unigene)。进一步采用生物信息学分析软件MISA对所有的unigene进行SSR位点数据挖掘。共计搜索出22 542个SSR位点,分布在18 972条unigene中,出现频率为33. 77%,发生频率为28. 42%,SSR平均长度为15 bp,平均分布频率是1/3. 98 kb,在青篱柴转录组的SSR中,单核苷酸、三核苷酸和二核苷酸重复序列为主要重复类型,分别占总SSR的47. 59%、27. 95%、23. 45%。青篱柴转录组数据中SSR序列共包括161种重复基元类型。其中出现频率高的基序主要有A/T、AG/CT、AAG/CTT、AT/AT、C/G、AGG/CTT。重复序列长度在10～144 bp之间,大多小于24 bp,大于24 bp的仅有0. 22%(48个SSR位点)。另外,设计筛选得到15 425对SSR引物。综上表明青篱柴SSR位点多态性潜能较高,具有很大的可开发性。

摘要：为研究日本蛇根草功能基因的表达提供内参基因,笔者参照GenBank中桔梗的肌动蛋白基因(Actin)序列设计引物,以日本蛇根草的cDNA为模板,通过RT-PCR方法成功克隆获得日本蛇根草Actin基因片段,并将其命名为OjActin(OjActin片段长469 bp)。功能保守域分析显示OjActin归属于Actin超家族,与其他植物Actin的氨基酸序列同源性达94%以上;系统进化树分析显示,OjActin与咖啡的亲缘关系最近。

摘要：为研究马缨杜鹃相关功能基因的表达模式提供内参基因,本研究根据Gen Bank中公布的锦绣杜鹃肌动蛋白基因(Actin)的保守序列设计引物,以马缨杜鹃c DNA为模板,利用RT-PCR方法克隆得到马缨杜鹃Actin基因部分c DNA片段,将其命名为Rd Actin。结果显示:该基因片段长度为468 bp,编码156个氨基酸;保守域分析表明该基因具有Actin的功能保守域,同时Rd Actin与其它植物Actin的氨基酸序列同源性达97%以上。