摘要：漆酶(laccase, LAC)是一种糖蛋白氧化酶，影响木质素的合成，调节植物体内酚类物质含量，并参与植物对病虫害的防御机制。为获得抗灰霉病能力强且符合转基因安全的番茄(Solanum lycopersicum)新种质，本研究基于实验室前期构建的载体pGM626-Act1，设计并成功构建了1个由果实特异性E8启动子调控FLP基因的基因删除系统，同时构建了Act1启动子驱动杜仲漆酶1 (Eucommia ulmoides laccase 1,EuLAC1)基因的植物表达载体pGM626-Act1-EuLAC1。采用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化技术，对番茄品种'Micro-Tom'进行遗传转化，最终成功获得了5株过表达EuLAC1的阳性番茄转基因植株。抗性分析结果表明，接种灰霉菌(Botrytis cinerea)后，过表达EuLAC1基因的番茄植株在发病时间方面与野生型及转空载体的番茄植株相比呈现出明显延迟。此外，过表达EuLAC1基因的番茄植株病斑直径显著小于对照组(野生型和转空载体的番茄植株)(P<0.05)，表明EuLAC1基因的过表达能够明显增强番茄植株对灰霉病的抗性。过表达EuLAC1基因还可提高番茄植株中保护性酶的活性以及病程相关蛋白(pathogenesis related protein, PR)基因的表达水平。对转基因番茄果实中外源基因的删除分析发现，在40个番茄果实中有22个未检测到外源基因，外源基因删除效率为55%。本研究为开发满足转基因安全要求的抗病番茄新种质提供了一种新的技术手段。

摘要：为建立一套简单、快速、有效的病毒病检测方法,避开病毒病检测中分子生物学方法检测时RNA提取这一复杂、费时、费力的过程,且能在同一个反应中同时检测多种病毒病,对我国常见的2种烟草病毒的外壳蛋白基因部分序列设计引物和Taq Man探针,结合实时荧光逆转录PCR(RT-PCR)和试管捕捉RT-PCR法,对实时荧光RT-PCR法加以改进,与双抗夹心酶联免疫法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbant assay,简称DAS-ELISA)和试管捕捉RT-PCR法进行比较,并在此基础上构建多重试管捕捉实时荧光RT-PCR检测体系。结果首次成功构建能同时检测烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒的多重试管捕捉实时荧光RT-PCR检测体系。该技术无须提取RNA,包括叶片研磨、捕捉、反转录、荧光PCR扩增等步骤,简单快捷、省时省力,具有高效性、系统性和经济简便性等特点。

摘要：SRAP标记是一种新的分子标记技术,建立和优化所研究物种的SRAP反应体系是应用SRAP标记的技术关键。本研究以3个辣椒品种为试验材料,采用单因素试验设计对辣椒SRAP-PCR反应体系的5个主要影响因子(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物浓度)设置8个不同的水平梯度,筛选出比较适宜的Mg2+、dNTP、Primer、Taq酶、模板DNA浓度的范围。在此基础上,进一步采用L16(45)正交设计对辣椒SRAP-PCR反应体系的五因素在四个水平上进行优化实验,得出了如下的优化体系:25μl体系中包含1.5mmol/L的Mg2+、0.2mmol/L的dNTP、0.1μmol/L的单条引物、1U的Taq酶和60ng的模板DNA。经用24个辣椒材料进行扩增验证,该体系检测的结果重复性好,稳定性强。因此,本试验所获得的优化体系适用于辣椒的SRAP分子标记研究。

摘要：从谢瓦氏曲霉间型变种抑制性差减杂交(SSH)文库中,筛选到一个子囊孢子时期差异表达的序列标签A0128.860,以其序列为模板设计特异性引物,利用RT-PCR及RACE技术克隆获得了该基因的全长cD-NA,命名为eYchF。生物信息学分析显示,该基因包含一个1182bp的完整开放阅读框(ORF),编码393个氨基酸,相对分子质量为43.4669kD,预测的理论等电点为6.99,包括一个保守的G domain(guanine nucleotide-binding domain)和一个TGS(ThrRS,GTPase,Spo T)domain,为疏水蛋白。序列同源性分析表明:该基因与棒曲霉(Aspergillus clavatus NRRL1)的GTP结合蛋白YchF相似度为84%,谢瓦氏曲霉间型变种YchF基因的克隆及生物信息学分析为YchF的进一步研究奠定了基础。

摘要：为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中flbA基因的结构及其与有性发育的关系,根据FlbA氨基酸的保守序列设计简并引物,利用RT-PCR、RACE方法从谢瓦氏曲霉间型变种的总RNA中扩增出flbA基因的cDNA序列。该序列全长3060 bp,包含2295bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码一个由764个氨基酸组成的蛋白,该蛋白分子量为83 181.19,理论等电点为6.31,为不稳定的亲水蛋白。序列同源性为:该基因与烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的发育调控子flbA相似度,最高为77%,其编码的氨基酸含有一个RGS(Regulator of G protein Singaling)和两个DEP(dishevelled,Egl-10,pleckstrin)保守域,与Aspergillus其他种的FlbA蛋白保守域一致。

摘要：CRISPR/Cas9系统是一类有效的目标基因编辑工具,能够精准编辑植物基因组以改善植物的性状。该技术能够同时靶向一个或多个序列,切割后通过非同源末端连接或同源重组引入新的遗传变异。然而,CRISPR/Cas9技术对于木本植物仍为挑战,主要局限于基因组倍性与再生转基因植物的能力。为了建立一套有效的杜仲(Eucommia ulmoides)基因编辑系统,利用农杆菌介导的遗传转化,以杜仲EuFLC(Flowering Locus C)基因为靶标,通过设计4个向导RNAs(sgRNAs)靶向EuFLC的2个保守区域转化杜仲,在卡那霉素选择培养基上筛选4周后,分离出抗性株系,通过Sanger测序对其进行基因分型。结果表明:EuFLC的编辑效率约为5.62%,sgRNA1与sgRNA2介导的突变类型均为单个碱基的替换,其中sgRNA1编辑效率约为1.12%;sgRNA2编辑效率最高,约为4.49%,首次成功在杜仲细胞中实现基因编辑。本研究为杜仲基因功能鉴定与遗传改良提供了新的途径。

摘要：目的:探究贵州及周边地区种质、播期及其互作对菘蓝结实习性的影响。方法:采用随机区组设计,播期分别为春、秋播,供试材料为安徽亳州、吉林双辽、河北安国的菘蓝种质,用SPSS 19.0等软件对菘蓝结实期相关性状进行方差分析与多重比较。结果:菘蓝单株有效角果数、株高、茎粗及角果千粒重等性状在不同播期间差异显著,春播单株有效角果数较多,为1919.36±783.09个,秋播角果千粒重较大,为7.56±1.03 g;安国种质在所有性状上与亳州、双辽种质差异显著;春播×HB的单株有效角果数(2862.80±392.21个)显著高于其他组合;单株有效角果数在不同播期、种质及互作间差异显著。结论:菘蓝春播优于秋播;安国种质在单株有效角果数、千粒重等性状上优于亳州、双辽种质;在播期、种质、播期×种质三个变异来源中,种质贡献率最大。在贵州及周边地区进行菘蓝制种时,应优先对种质的选择,再考虑播期对种子生产的影响。

摘要：为从冠突散囊菌中克隆到与有性发育相关的veA基因片段,根据genbank中不同种真菌的veA相关蛋白质序列同源性,设计简并引物,运用touchdown PCR技术,研究了从冠突散囊菌总RNA中克隆有性孢子发育基因veAcDNA片段。结果表明:克隆得到长度为558 pb的cDNA片段。该cDNA片段与棒曲霉veA基因相似性最高,为77%;与构巢曲霉ve A相似性67%。确定为冠突散囊菌veA基因片段。

摘要：通过对蝉拟青霉进行诱导产几丁质酶,采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定其酶活性,发现:有2株不同采集地点的菌株酶活力较强。根据Genebank中多种真菌几丁质酶氨基酸序列的保守区设计引物,以蝉拟青霉基因组DNA为模版,通过PCR扩增获得2个菌株的特异性DNA片段:其中,GZAAS10.0604为563 bp,含有3个内含子;GZAAS10.0601为398 bp,无内含子。其对应的氨基酸序列均具有几丁质酶18家族的2个高度保守的活性区域:几丁质结合区域SXGG和酶作用活性位点DXXDXDXE。

摘要：为给白芨种质遗传多样性评价、分子标记辅助育种和遗传改良研究提供基础,建立适于白芨SRAP-PCR扩增的反应体系,利用L16(45)正交试验设计对白芨SRAP-PCR反应体系中的各影响因子进行探索。结果表明:Mg2+浓度为影响白芨SRAP-PCR反应的关键因素;在优化的20μL SRAP-PCR反应体系中各组分的最适含量为10×Buffer 2.0μL,Mg2+2.5mmo1/L,dNTPs 0.5mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq酶1.0U,模板DNA 2.0ng/μL。利用SRAP反应体系,从72对SRAP引物组合中筛选出条带清晰、扩增稳定、多态性好的引物15对。