摘要：目的：了解新生隐球菌格鲁比变种（ Cryptococcus neoformans var． grubii）两组毒力差异明显的多位点微卫星型（ multilocus microsatellite typing ， MLMT ）菌株间的差异基因，探讨导致新生隐球菌格鲁比变种间毒力差异的相关基因及这些基因的功能。方法根据已有基因组数据，针对可能为新生隐球菌毒力相关的基因设计特异性引物，扩增并测序，通过序列对比分析每个基因在两组微卫星基因型菌株间存在的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms ，SNPs）位点，并对引起差异的蛋白质进行分析和预测。结果在成功测序的11个基因中，除2个基因序列完全相同外，其余9个基因在两组毒力差异明显的基因型菌株间分别存在1～4个规律性SNPs，其中，有2个基因中存在非同义SNPs（ non-synonymous SNPs ，nsSNPs ），这2个基因的编码产物分别为沉默信息调节因子2家族成员HST302和UV切除修复蛋白RAD23。另外，在对RAD23蛋白的系统发育分析发现，与真菌界的其他门类相比，在担子菌纲的多数RAD23蛋白与人类的同源基因亲缘关系更近。结论本研究发现了新生隐球菌两种毒力差异明显的微卫星基因型菌株间具有重要功能的两个差异基因（ Rad23和Hst302），且经预测nsSNPs对蛋白结构和功能均有一定影响，而蛋白的具体功能有待通过各项试验进一步深入研究。

摘要：目的探讨慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞胞体和突触内线粒体分布情况及线粒体分裂基因Fisl表达的改变。方法sD大鼠60只，雌雄各半，体质量100～120g，按完全随机设计法分为3组，每组20只。在饮水中加入不同剂量的氟（0、10和50mg／L）来饲养，实验期6个月。采用荧光素标记细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型1抗体显示线粒体，观察线粒体在神经细胞胞体和突触内分布；用即时荧光定量PCR、Westernblot和免疫组织化学sP方法检测线粒体分裂基因Fisl表达。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙，尿氟含量明显升高，表明成功地复制了慢性氟中毒大鼠模型。饲以10mg／L和50mg／L的染氟大鼠胞体内聚集型的神经细胞数[（34．8±4．7）和（39．3±3．0）]较对照组（4．4±2．3）显著增加（P〈0．05）；分裂基因FislmRNA转录水平[（3773±1292）和（1274±162）]较对照组（277±73）显著升高（P〈0．05）；Fisl蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞数[（54．0±3．6）和（51．3±4．1）]和Westernblot法蛋白印迹平均吸光度值[（2．9±0．4）和（2．6±0．6）]水平较对照组[（25．2±2．5）和（1．8±0．2）]明显升高（P〈0．05）。结论摄人过量的氟可导致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体在胞体和突触内重分布，诱导线粒体Fisl基因表达，促进线粒体分裂。神经细胞线粒体重分布可能与神经细胞Fisl高表达导致线粒体功能障碍有关。

摘要：目的探讨通过RNA干扰技术抑制α3神经型尼古丁受体（nAChR）基因表达后该受体对神经细胞抗氧化能力的影响，来了解α3 nAChR的神经保护作用。方法设计并体外合成α3 nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸，退火后克隆至pSilencer 3．1-H1 neo质粒中，构建重组质粒α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo。将α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo转染SH-SY5Y细胞，用含G418的培养液筛选，挑选阳性克隆后采用即时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染细胞中α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化。用1μmol／L β-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）处理转染细胞后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定细胞活力；用比色法测定其脂质过氧化产物含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果成功构建α3 nAChR siRNA表达质粒，转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株，与对照组相比，α3 nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98％和66％）；经转染处理的细胞活力明显低于对照组，细胞中脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加。超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性不同程度的降低；抑制α3 nAChR基因表达后能增强Aβ的神经细胞毒性作用。结论成功构建的α3 nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3 nAChR基因表达，α3 nAChR基因表达抑制后可引起氧化应激水平升高，并增加Aβ的神经毒性，表明α3 nAChR具有一定的抗氧化能力和神经保护作用。

摘要：目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白。

摘要：目的探讨α7神经型尼古丁受体（nAChR）表达改变与淀粉样蛋白前体蛋白（APP）代谢、细胞存活率及脂质过氧化水平的关系，以了解α7 nAChR的神经保护作用，以及该受体水平与阿尔茨海默病发病的关系。方法设计并合成α7 nAChR基因特异性小分子干扰RNA（siRNA），转染SH-SY5Y细胞；用20μmol／LDMXB处理细胞；培养48h后收集细胞，分别应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测转染细胞及DMXB处理后的细胞α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化；并用1μmol／L β-淀粉样肽25-35（Aβ25-35处理细胞，测定分泌型APP、总APP蛋白表达的变化；比色法测定脂质过氧化产物含量；MTT方法测定细胞活力。结果转染siRNA后，与对照组相比，α7 nAChR mRNA及蛋白表达量降低（抑制率分别为80％和69％）、脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加、分泌型APP表达下降、细胞活力明显低于对照组，且能增强Aβ的细胞毒性作用；用DMXB处理细胞后能使α7 nAChR的表达增加23％、增加分泌型APP的表达、并能对抗Aβ引起的细胞活力下降及脂质过氧化水平的增强。结论α7 nAChR可能通过增强α-分泌酶对APP的切割、增强细胞抗氧化能力及对抗Aβ的神经毒性作用来发挥神经保护作用，其表达减少与阿尔茨海默病的发病机制有密切的关系。

摘要：目的了解抑癌基因 p16启动子区 CPG 岛在燃煤型砷中毒患者中甲基化的情况和意义。方法分别采集燃煤型砷中毒患者与正常人群外周血标本各51例和52例,采用酚-氯仿法提取DNA。紫外分光光度法测定 DNA 的含量,将基因组 DNA 变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式 PCR 扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果燃煤型砷中毒患者与正常对照 p16基因启动子区 CPG 岛甲基化检出率分别为94.1%(48/51)和71.1%(37/52),两者间差异有统计学意义。结论 p16启动子区 CPG 岛甲基化与燃煤型砷中毒有关联。

摘要：目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;将该基因克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,重组质粒在大肠埃希菌BL21/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定。结果 RT-PCR扩增获得Aalb_34ku-2 2个转录本。Aalb_34ku-2_1序列长度为954bp,编码318个氨基酸,等电点为5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF为882bp,编码294个氨基酸,等电点为6.09。两者相差24个氨基酸;构建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组表达载体并转入大肠埃希菌*** BL21(DE3),IPTG诱导后得到的重组蛋白与目的蛋白分子质量(34ku)相符,经鉴定为包涵体蛋白。结论成功构建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组原核表达质粒并表达出融合蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

摘要：生物绘图是生命科学研究中不可或缺的重要环节.生物绘图和艺术绘图具有相通之处,但其绘图目的及其内涵却大相径庭,是两种完全不同的概念.艺术绘图具有主观性、抽象性、艺术性,是精神图像的再现,凭借抽象性和夸张性获得更深层次的艺术价值,要求工笔写意两兼.生物绘图具客观性、科学性、艺术性,强调写真为主,辅以艺术.[第一段]

摘要：通过正交试验及单因素试验对五条蚋S. quinquestriatum ISSR-PCR反应体系中的引物、DNA模板、dNTP、Mg2+、BSA、TaqDNA聚合酶浓度6个关键因素进行优化,建立五条蚋ISSR最适反应体系:20μl反应体系中引物1.0μmol/L、DNA模板50.0ng/μl、dNTP0.15mmol/L、Mg2+1.50mmol/L、BSA2.00mg/ml、TaqDNA聚合酶0.155U/μl。通过对24条备选引物进行温度梯度筛选,获得8条能够稳定扩增且多态性较好的引物。为今后利用ISSR技术进行五条蚋种群遗传多样性研究奠定了良好的技术基础。

摘要：目的：研究贵阳腐霉（Pythium guiyangense Su）几丁质酶的活性及其基因片段的克隆与序列分析。方法：（1）采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定贵阳腐霉分泌的几丁质酶活性；（2）根据NCBI Protein数据库中多种生物的几丁质酶氨基酸序列的保守区设计引物，以贵阳腐霉基因组DNA为模版，通过PCR扩增获得特异性DNA片段；（3）将该片段克隆并进行测序分析。结果：贵阳腐霉经诱导后可以分泌几丁质酶。诱导24h是该酶分泌高峰期。克隆到一207bp的DNA片段，其第182-207碱基序列与狗（Canis familiaris）的几丁质酶基因的部分序列相同。结论：本实验证明贵阳腐霉核DNA含有几丁质酶基因，在几丁质类似物的诱导下，该菌可以分泌几丁质酶。所克隆的DNA片段可能是几丁质酶基因的部分序列。