摘要：目的 观察骨桥蛋白（OPN）在低钙和氟中毒大鼠肾组织中的表达,探讨OPN与氟中毒肾损害的关系.方法 1月龄Wistar大鼠48只,雌雄各半,体质量80～100 g.按2×2析因设计将大鼠按质量随机分为4组：对照组、高氟组、低钙组、低钙高氟组,每组12只,雌雄各半.采用合成饲料喂养,高氟组和低钙高氟组饲料中的玉米来自燃煤污染型氟中毒病区,含氟量为100 mg/kg,对照组和低钙组饲料中的玉米来自于非病区,含氟量为5 mg/kg.喂养16周后处死大鼠,观察各组大鼠牙齿变化,计算大鼠氟斑牙检出率.取大鼠肾脏,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾脏OPN蛋白和OPN mRNA表达.结果 对照组和低钙组牙齿生长良好,高氟组、低钙高氟组大鼠均出现明显的氟斑牙,氟斑牙检出率为100%.免疫组化结果表明,OPN主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞中.对照组和低钙组肾组织OPN阳性细胞淡染、散在分布,高氟组与低钙高氟组OPN阳性细胞着色较深,广泛分布在肾小管上皮细胞中.OPN蛋白表达显示,高氟组（168.64±13.21）和低钙高氟组（169.26±8.92）高于对照组（145.78±10.26,P均〈0.01）和低钙组（149.60±16.84,P均〈0.01） OPN mRNA表达显示,高氟组（1.89±0.37）和低钙高氟组（1.94±0.22）高于对照组（1.32±0.26,P均〈0.05）和低钙组（1.30±0.18,P均〈0.05）.高氟影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=13.821、4.24,P均〈0.05）,低钙不影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=2.164、0.58,P均〉0.05）,但高氟和低钙联合作用时,二者对OPN蛋白和OPN mRNA表达有交互作用（F=6.257、4.32,P均〈0.05）.结论 过量氟可促使大鼠肾组织的OPN表达增加,提示OPN与氟中毒肾损害程度密切相关,可考虑作为一种氟中毒肾损害的标志,并且,高氟与低钙同时存在时,大鼠肾损害会进一步加重,提示低钙是氟化物损害肾脏的重要环节.

摘要：目的探讨通过RNA干扰技术抑制α3神经型尼古丁受体（nAChR）基因表达后该受体对神经细胞抗氧化能力的影响，来了解α3 nAChR的神经保护作用。方法设计并体外合成α3 nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸，退火后克隆至pSilencer 3．1-H1 neo质粒中，构建重组质粒α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo。将α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo转染SH-SY5Y细胞，用含G418的培养液筛选，挑选阳性克隆后采用即时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染细胞中α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化。用1μmol／L β-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）处理转染细胞后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定细胞活力；用比色法测定其脂质过氧化产物含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果成功构建α3 nAChR siRNA表达质粒，转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株，与对照组相比，α3 nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98％和66％）；经转染处理的细胞活力明显低于对照组，细胞中脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加。超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性不同程度的降低；抑制α3 nAChR基因表达后能增强Aβ的神经细胞毒性作用。结论成功构建的α3 nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3 nAChR基因表达，α3 nAChR基因表达抑制后可引起氧化应激水平升高，并增加Aβ的神经毒性，表明α3 nAChR具有一定的抗氧化能力和神经保护作用。

摘要：目的探讨慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞胞体和突触内线粒体分布情况及线粒体分裂基因Fisl表达的改变。方法sD大鼠60只，雌雄各半，体质量100～120g，按完全随机设计法分为3组，每组20只。在饮水中加入不同剂量的氟（0、10和50mg／L）来饲养，实验期6个月。采用荧光素标记细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型1抗体显示线粒体，观察线粒体在神经细胞胞体和突触内分布；用即时荧光定量PCR、Westernblot和免疫组织化学sP方法检测线粒体分裂基因Fisl表达。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙，尿氟含量明显升高，表明成功地复制了慢性氟中毒大鼠模型。饲以10mg／L和50mg／L的染氟大鼠胞体内聚集型的神经细胞数[（34．8±4．7）和（39．3±3．0）]较对照组（4．4±2．3）显著增加（P〈0．05）；分裂基因FislmRNA转录水平[（3773±1292）和（1274±162）]较对照组（277±73）显著升高（P〈0．05）；Fisl蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞数[（54．0±3．6）和（51．3±4．1）]和Westernblot法蛋白印迹平均吸光度值[（2．9±0．4）和（2．6±0．6）]水平较对照组[（25．2±2．5）和（1．8±0．2）]明显升高（P〈0．05）。结论摄人过量的氟可导致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体在胞体和突触内重分布，诱导线粒体Fisl基因表达，促进线粒体分裂。神经细胞线粒体重分布可能与神经细胞Fisl高表达导致线粒体功能障碍有关。

摘要：目的探讨α7神经型尼古丁受体（nAChR）表达改变与淀粉样蛋白前体蛋白（APP）代谢、细胞存活率及脂质过氧化水平的关系，以了解α7 nAChR的神经保护作用，以及该受体水平与阿尔茨海默病发病的关系。方法设计并合成α7 nAChR基因特异性小分子干扰RNA（siRNA），转染SH-SY5Y细胞；用20μmol／LDMXB处理细胞；培养48h后收集细胞，分别应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测转染细胞及DMXB处理后的细胞α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化；并用1μmol／L β-淀粉样肽25-35（Aβ25-35处理细胞，测定分泌型APP、总APP蛋白表达的变化；比色法测定脂质过氧化产物含量；MTT方法测定细胞活力。结果转染siRNA后，与对照组相比，α7 nAChR mRNA及蛋白表达量降低（抑制率分别为80％和69％）、脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加、分泌型APP表达下降、细胞活力明显低于对照组，且能增强Aβ的细胞毒性作用；用DMXB处理细胞后能使α7 nAChR的表达增加23％、增加分泌型APP的表达、并能对抗Aβ引起的细胞活力下降及脂质过氧化水平的增强。结论α7 nAChR可能通过增强α-分泌酶对APP的切割、增强细胞抗氧化能力及对抗Aβ的神经毒性作用来发挥神经保护作用，其表达减少与阿尔茨海默病的发病机制有密切的关系。

摘要：目的:利用小分子干扰RNA(RNA i)技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中α7神经型尼古丁受体(nAChR)基因的表达,并研究α7 nAChR基因表达受抑制后对细胞存活率及脂质过氧化水平的影响。方法:设计并通过分子生物学方法合成α7 nAChR基因特异性小分子干扰RNA(siRNA),转染SH-SY5Y细胞,培养48h后收集细胞,分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和西印迹方法(W estern-b lotting)检测转染细胞中α7nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化,并用1μmol/Lβ淀粉样肽25-35(Aβ25-35)处理siRNA转染细胞,比色法测定脂质过氧化产物含量。四氮基偶氮唑蓝(MTT)方法测定细胞活力。结果:转染siRNA后,与对照组相比,实验组α7 nAChR mRNA及蛋白表达量降低,抑制率分别为52%和36%,脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加,MTT法表明实验组细胞活力明显低于对照组,且能增强Aβ的细胞毒性作用。结论:特异性siRNA能有效抑制α7 nAChR基因的表达,α7 nAChR基因的表达的抑制能增加Aβ的神经毒性作用,间接说明α7 nAChR有一定的神经保护作用,其表达减少与阿尔茨海默病的发生有一定关系。