摘要：目的 运用构建的小发夹状RNA重组质粒pshRNA／H—ras，研究其对卵巢癌SK—OV3细胞株内源H-ras基因的抑制作用。方法 应用基因克隆技术，设计含21bp H—ras基因编码序列片段及中间以4～5个bp间隔的反向重复序列，克隆至转录载体pTZU6＋1上并行序列分析。转染重组质粒pshRNA／H—ras至SKOV3细胞中，分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞内H-rasmRNA和蛋白表达的变化。结果 成功构建发夹状RNA载体，经DNA序列鉴定为正确的目的序列。RT-PCR和Western blot结果表明，重组质粒pshRNA／H—ras1和pshRNA／H—ras2均能在基因转录水平和蛋白表达水平上明显抑制SKOV3细胞内源H—ras蛋白的表达，抑制率达67％以上。结论 重组质粒pshRNA／H—ras可显著抑制SKOV3细胞内源H-ras基因mRNA的转录和相应蛋白质的表达，为进一步研究H-ras基因在卵巢癌细胞异常增殖中的作用打下基础。

摘要：尽管有很多的化疗方案,但针对卵巢癌患者的治疗却非常不理想,免疫疗法为本病提供了一种很有前景的新型治疗手段。嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞免疫疗法已经在卵巢癌治疗的研究中取得进展。CAR-T细胞是基因工程T细胞,具有针对癌细胞的主要组织相容性复合物非依赖性、肿瘤特异性和免疫介导的细胞溶解作用。卵巢癌CAR-T细胞治疗已经取得很理想的疗效,但尚存在一些需要攻克的难题,例如T细胞运输受损、抗原靶向标志物缺乏、细胞因子释放综合征和最重要的免疫抑制性肿瘤微环境。优化设计、改善肿瘤微环境以及与其他疗法的组合可以帮助改善CAR-T细胞的治疗效果。本文系统阐述CAR-T细胞的基本功能、治疗卵巢癌机制和需要改良的方面,旨在为研究者提供新思路。