摘要：目的从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素。方法采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+-NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果。结果成功扩增到2个新型肠毒素P基因;带有质粒pET28a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1 mmol/L IPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度>95%;纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别>30%;抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2),200 ng/mL时抑瘤效果最佳,分别达到82%和86%。结论成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果。

摘要：肠激酶作为一种丝氨酸蛋白酶,能够识别顺序-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,水解赖氨酸C端的肽键.根据NCBI中牛肠激酶基因序列(L19663)设计18条引物,通过重叠延伸拼接PCR技术(SOE-PCR)扩增两端带有酶切位点的牛肠激酶轻链基因.构建表达载体pET32a-EK,表达载体转化*** BL21(DE3),利用IPTG诱导表达嵌合蛋白,并用离子交换柱层析纯化肠激酶,获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础.

摘要：对抗肿瘤溶栓嵌合蛋白在重组大肠杆菌中高效表达作了研究.以装液量、接菌量和初始pH值三因素设计正交试验,确定其最佳培养条件.结果表明:抗肿瘤溶栓嵌合蛋白制备工艺的最佳培养条件是装液量100 m L、接菌量2%、初始pH值7.5.在优化后的培养条件下,1 L发酵液可以得到0.987 mg蛋白,比优化前蛋白量提高了一倍,较高的表达量为进一步研究该蛋白的纯化和性质提供了基础.

摘要：目的:以猪胸腺肽为芯材、壳聚糖为壁材,采用乳化交联结合单凝聚法制备猪胸腺肽壳聚糖口服微球。方法:以壁材浓度、交联剂含量、油水比值、芯材壁材比值为四因素设计正交实验,确定微球最佳制备条件,并对其体外释放及稳定性进行研究。结果:制备微球最优化条件为壳聚糖浓度1%、25%戊二醛含量7%、油水比值2∶1、壳聚糖与胸腺肽比值1∶1;微球在pH1.5的HCl溶液中2 h释放30%,在pH6.8及7.4的PBS缓冲液中最终释放度约80%,并在24 h达到释放终点;微球30 min突释率约为10%,1 h释放率约为20%,其后缓慢而持续地释放;猪胸腺肽壳聚糖微球在0℃保存8个月时微球外观及形态没有差异,药物剩余率约为91.8%。结论:采用乳化交联结合单凝聚法制备的猪胸腺肽壳聚糖口服微球为缓释给药系统的临床应用奠定了理论基础,具有重要的实际应用价值和社会意义。

摘要：通过超声破碎法提取紫薯花青素(purple sweet potato color,PSPC),以盐酸-乙醇比,物料比,超声时间,超声温度四因素设计正交试验,确定其最佳提取条件.结果表明,PSPC最佳提取工艺为:盐酸-乙醇比50∶50、物料比1∶40、提取温度50℃、提取时间25 min,得到的PSPC含量为324.87μg/g.该方法能快速有效地提取出紫薯中的花青素,为紫薯花青素的产业化发展提供技术支持.