摘要：利用带不同电荷的短肽T_(7)+、T_(6)-,探讨正电荷短肽T_(7)+和负电荷短肽T_(6)-对α-淀粉酶的活性和构象的影响。将短肽加入α-淀粉酶体系后,测定其相对酶活、米氏常数(Km)、活化能、Zeta电位等指标。为了更清晰地观察不同带电量的短肽对α-淀粉酶构象的影响,通过紫外吸收光谱、荧光光谱、同步荧光光谱、圆二色光谱进一步考察α-淀粉酶构象的变化。结果表明,将带电短肽加入α-淀粉酶的酶促反应中,正电荷短肽T7+抑制α-淀粉酶酶活,当短肽质量浓度为10^(-7)g/mL时,α-淀粉酶相对酶活降低2.40%,同时也使α-淀粉酶与可溶性淀粉的亲和力降低,活化能升高,Zeta电位增加。负电荷短肽T_(6)-促进α-淀粉酶酶活,当短肽质量浓度为10^(-7)g/mL时,α-淀粉酶相对酶活升高1.40%,同时也使α-淀粉酶与可溶性淀粉的亲和力升高,活化能降低,Zeta电位增加。光谱分析表明,不同带电短肽使α-淀粉酶的紫外-可见吸收光谱、荧光光谱以及二级结构发生不同程度的改变。这表明不同带电短肽可以发挥与电场相似的作用,即电场在作用于蛋白质时,产生的电场力促使蛋白质构象发生改变,人工设计合成短肽所带的表面电荷影响酶表面电荷的分布,进而导致酶的活性和构象发生改变。

摘要：为探究亚硝酸盐对东北酸菜发酵过程中优势细菌属及理化指标的动态变化,设计自然发酵体系(S)和添加亚硝酸盐发酵体系(YS),监测发酵过程中东北酸菜理化指标及OD600nm值的变化,采用16S rDNA技术对理化指标变化明显时期的酸菜样本进行细菌属组成分析。结果表明,东北酸菜中的uncultured_bacterium_f_Enterobacteriaceae、Serratia等有害菌属大量繁殖,导致亚硝酸盐大量积累,而积累的亚硝酸盐对uncultured_bacterium_f_Enterobacteriaceae、Serratia和Enterococcus等有害菌的生长繁殖又起到抑制作用,其中对Serratia的抑制作用最强;乳酸菌能够降解亚硝酸盐,但亚硝酸盐对Lactococcus与Leuconostoc的生长代谢具有促进作用,对Lactobacillus具有抑制作用,随着亚硝酸盐被大量降解,其对Lactobacillus的抑制作用会解除。亚硝酸盐通过影响菌属结构及丰度,进而影响发酵体系的理化指标及OD600nm值的变化。

摘要：人工设计并合成2条等电点分别为12.01和3.18的短肽PF1、PF2,基因全长均为309 bp。以PF1-F、PF1-R、PF2-F和PF2-R为引物,扩增至pET-30a(+)载体中进行克隆表达。经Ni-NTA分离纯化得到纯蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Western Blot分析表明:表达出的目的蛋白与预期估算大小一致。纯化后的短肽加入葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)催化作用体系中,表明纯化后的短肽分别使GOD活力提高8.34%和降低6.88%。因此可以说明,人工设计的不同电短肽PF1、PF2可以促进或抑制GOD的催化作用,进一步拓宽GOD在食品发酵和食品保鲜方面的应用范围。

摘要：高通量测序(HTS)技术极大地促进了对发酵食品中微生物群落结构变化的相关研究,但是对相对丰度的分析忽略了不同样本之间细菌群落积累量存在的现实差异。该研究设计自然发酵体系(S)与添加亚硝酸盐发酵体系(Y),利用16S rRNA高通量测序技术对发酵过程中微生物群落结构变化进行研究,同时通过将相对丰度与OD_(600 nm)值结合的方法对发酵过程中微生物群落积累量进行量化,只修正分析相对丰度带来的偏差,进而更好地分析蔬菜发酵过程中菌群结构的动态变化。研究结果表明,相对丰度的降低并不能代表其微生物积累量的减少;当相对丰度值没有明显波动时不能表示其菌微生物的积累量也没有波动;相对丰度上升或下降的比例也不能完全说明该菌的积累量也呈现相同比例的增加或减少。该研究中对相对丰度的量化方法还未见报道,对未来利用相对丰度对细菌群落结构研究的方法具有借鉴意义,同时进一步强调在利用高通量测序对微生物群落结构变化进行分析时,不能仅仅考虑微生物的相对丰度,应该同时考虑微生物的总量。

摘要：【目的】研究产低温脂肪酶菌株CZW001发酵培养基。【方法】在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman(P-B)设计、Box-Behnken(B-B)设计和响应面试验设计(RSM),在20°C、pH 8.0、160 r/min发酵2 d条件下,对发酵培养基进行优化。【结果】该菌株最适产酶培养基为(g/L):葡萄糖7.68,橄榄油21.93,硫酸铵2.0,磷酸二氢钾1.0,硫酸镁0.27,氯化钙0.3,氯化钠20.0,吐温-80 1.0。其最高酶活为62.8 U/mL,比优化前提高了3.14倍。【结论】通过对产低温脂肪酶菌株CZW001发酵培养基优化研究,明显提高低温脂肪酶活力。

摘要：目的:对青霉(Penicillium sp.)SWD-28发酵生产低温纤维素酶的培养基进行优化。方法:在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman(P-B)设计和响应面试验设计(RSM)对产酶进行优化。结果:影响SWD-28产酶的主要因素为玉米粉、硫酸铵和麸皮的添加量。培养基最佳组成浓度为玉米粉2.2%,硫酸铵0.24%,麸皮1.5%,磷酸二氢钾0.2%,氯化钠1%,硫酸镁0.04%,氯化钙0.03%,吐温-80 0.08%。结论:此时滤纸酶活力为109.8U/mL,是优化前的2.25倍。

摘要：苹果酸脱氢酶(MDH)是参与生物三羧酸循环(TCA)的关键酶,广泛用于临床肝脏相关疾病的诊断,并在生物制药、化工检测等领域具有极大的市场需求。该研究以墓画大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus picturae)XJH-11为苹果酸脱氢酶(MDH)产生菌,基于单因素试验,通过Plackett-Burman响应面试验并结合Box-Behnken试验设计对发酵条件进行响应面优化。结果表明,菌株XJH-11产MDH的发酵培养基为葡萄糖10 g/L、酵母膏20 g/L、硫酸镁0.1 g/L、初始pH值8.0,最佳发酵条件为发酵温度27 ℃、摇床转速150 r/min、接种量5%、装液量125 mL/500 mL。在此优化条件下,MDH酶活为43.67 U/mL,比优化前提高了197.87%。

摘要：在单因素试验基础上,采用Plackett-Burman试验得出麸皮添加量、蛋白胨添加量及发酵温度是影响菌株产酶的3个最重要的因素。利用Box-Behnken试验设计对类芽孢杆菌(Paenibacillus)N30发酵生产纤维素酶的产酶条件进行响应面优化。结果表明,单因素试验优化结果为麸皮添加量2.5%、蛋白胨添加量0.5%、初始pH值为7.0、发酵温度37 ℃、接种量1.5%、转速150 r/min、装液量125 mL/250 mL、种龄32 h、KH2PO4 0.2%;响应面优化后发酵条件为麸皮添加量2.8%,蛋白胨添加量0.5%,发酵温度38 ℃。在此优化条件下,纤维素酶酶活为42.5 U/mL,是优化前酶活(12.1 U/mL)的3.5倍。

摘要：在单因素试验基础上,结合Plackett-Burman、Box-Behnken设计及响应面分析法进行回归分析以确定海洋胶红酵母菌Rhodotorula ***-008产超氧化物歧化酶最佳发酵条件,并通过盐析、超滤离心、Sephadex G-100凝胶过滤层析研究了酶的分离纯化条件。结果表明,pH、转速、温度对酶活力有显著影响,最优发酵条件为pH 5.34、转速150 r/min、温度21.40℃,优化后发酵液酶活力达到6 430.52 U/g湿菌体,比优化前提高了1.53倍。粗酶液经65%饱和度的硫酸铵盐析、超滤离心、Sephadex G-100凝胶过滤层析后获得的SOD比酶活达到419.90 U/mg,纯化倍数为9.60倍,蛋白回收率为8.2%。SDS-PAGE凝胶电泳显示,纯化后的SOD的分子质量约为37.5 ku。

摘要：该研究添加人工设计短肽进行酶促反应,通过测定α-淀粉酶活性和Zeta电位变化,考察其对α-淀粉酶催化作用的影响。结果表明,α-淀粉酶酶促作用的最优条件为温度40℃、磷酸缓冲液浓度0.01 mol/L、磷酸缓冲液pH 6.9。人工设计合成T_(8)^(-)和T_(9)^(+)两条带电荷短肽加入酶解体系,发现短肽T8-的加入使α-淀粉酶活性增强了3.13%,米氏常数(Km)增大了14.38%、活化能降低至497.44 J/mol;短肽T_(9)^(+)的加入使α-淀粉酶活性降低1.36%,Km减小4.1%,活化能(4942.90 J/mol)增加130%。因此可以说明,人工设计的不同带电荷短肽可以有效提高或降低α-淀粉酶的催化作用,可拓宽α-淀粉酶在食品发酵和食品保鲜方面的应用范围。