摘要：目的设计合成肿瘤靶向穿膜肽TAT-DV3,联合Bcl-2 siRNA,体外实验研究其对U251胶质瘤细胞的作用。方法设计合成特异性Bcl-2 siRNA及靶向肽TAT-DV3,利用静电作用使两者结合。体外培养U251胶质瘤细胞,TATDV3-Bcl-2 siRNA复合物处理细胞后,激光共聚焦显微镜追踪Bcl-2 siRNA进入细胞的分布。PCR检测靶基因Bcl-2沉默情况,Western blot检测Bcl-2蛋白表达;Annexin-V FITC与PI联合标记细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果激光共聚焦显微镜结果证明TAT-DV3-Bcl-2 siRNA成功进入U251细胞内。PCR及Western blot验证了TAT-DV3-Bcl-2 siRNA沉默了目标基因Bcl-2。利用流式细胞仪进行凋亡检测,发现与对照组相比TAT-DV3-Bcl-2 siRNA可以显著促进U251细胞凋亡。结论靶向肽TAT-DV3可有效投递Bcl-2 siRNA进入U251胶质瘤细胞,通过降解Bcl-2 mRNA抑制Bcl-2的表达并促进胶质瘤细胞的凋亡。

摘要：目的设计和构建特异性siRNA纳米载体SWCNT-siRNA,通过体外实验,研究其对脑胶质瘤的作用。方法设计合成特异性Bcl-2 siRNA,利用超声技术合成SWCNT-siRNA复合物,动态散射粒度分析仪进行粒径分析;体外培养U251胶质瘤细胞,SWCNT-siRNA复合物处理细胞后,激光共聚焦显微镜追踪siRNA进入细胞的分布。PCR检测靶基因Bcl-2沉默情况,Annexin-V FITC与PI联合标记细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果通过粒径分析证明siRNA成功缠绕到SWCNT上形成稳定的复合物siRNA-SWCNT。利用激光共聚焦显微镜对标记红色荧光的siRNA进行追踪,发现siRNA成功投递到细胞内。PCR验证了被投递到胞浆的siRNA很好的沉默目标基因Bcl-2。通过流式细胞仪分析发现,与对照组比较发现其可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞早期凋亡。结论 SWCNT作为纳米载体投递Bcl-2 siRNA进入U251胶质瘤细胞,通过降解Bcl-2 mRNA抑制Bcl-2的表达并促进胶质瘤细胞的凋亡。