摘要：目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果正常人外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCRβ链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论"荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。

摘要：目的 :调查NICU患儿母亲照护相关需求现况并分析其影响因素。方法 :采用自行设计的一般资料调查表及中文版新生儿重症监护室患儿家长需求量表(NICU-FNI),对遵义市某三级甲等医院110名NICU患儿母亲进行调查。结果:患儿母亲需求总分(107.30±8.03)分,处于中等水平。多元逐步回归分析结果显示,受孕方式、是否定期产检,患儿入院日龄、疾病诊断、是否下病危是影响患儿母亲需求的主要因素(P<0.05)。结论 :NICU患儿母亲需求总体处于中等水平,但具体的需求随着母亲孕产期情况和患儿出生后的病情发生改变,因此,护士应客观评估患儿母亲需求,给予其个性化的护理,提高患儿母亲对患儿疾病治疗的支持,完善以患儿家庭为中心的护理服务模式。

摘要：目的根据贵州省手足口病患儿肠道病毒71型(EV71)分离株的VP1结构蛋白序列研制多肽疫苗并研究其对小鼠的免疫保护作用。方法 2013年3月1日至2015年12月31日从贵州省手足口病患儿的咽拭子样本中分离到17株EV71毒株,其VP1氨基酸序列一致(共297个氨基酸),据此设计并合成多肽片段(除最后一段为27个氨基酸外,其余均为20个氨基酸);用感染EV71的手足口病病愈患儿的阳性血清,通过间接ELISA法筛选出免疫原性较好的多肽片段,制成多肽疫苗;用多肽疫苗免疫ICR健康雌鼠,并设未免疫的对照(Con);将雌鼠的子代小鼠随机分为注射和不注射EV71病毒颗粒的2个亚组;注射病毒2 d后处死所有小鼠,分别取小鼠的骨骼肌、小肠和脑组织,通过RT-PCR检测病毒感染情况,同时HE染色后在显微镜下观察病理改变。结果共设计并合成19段含交叉序列的多肽片段,从中筛选出3段免疫原性较好的(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNASDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成多肽疫苗并免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠进行后续试验。RT-PCR结果显示,各感染病毒亚组的骨骼肌、小肠和脑组织中均能检测到EV71病毒,而未感染病毒亚组均检测不到;病理结果显示,未接种多肽疫苗母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小肠和脑组织均出现明显的炎性改变;接种多肽疫苗母鼠的子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织的炎性改变明显减轻,3种多肽疫苗对EV71所致炎症的改善作用无明显差异;接种多肽疫苗母鼠的未注射病毒亚组子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织中均未检测到EV71病毒,也未观察到明显的炎性改变。结论本研究成功制备VP1抗原表位多肽疫苗并在动物实验中证实了其有效性和安全性,可为今后相关疫苗的研制提供方法学借鉴。

摘要：目的了解并调查COPD患者氧疗情况,为制定针对性护理提供依据。方法采用自行设计的问卷调查表,对符合LTOT标准的90例病人进行调查,包括一般情况、是否开展LTOT及未能开展氧疗的原因、LTOT执行情况等。结果COPD患者执行LTOT情况与年龄、文化程度、职业等有关,并且大部分患者对氧疗并不能正确执行。结论护理人员应从多方面开展对COPD患者和家属的LTOT相关知识的宣教,提高COPD患者家庭氧疗的依从性。

摘要：准分子激光原位磨镶术（LASIK）是目前公认的一种较理想的角膜屈光手术,近年来随着准分子设备的改进及手术技术的迅速发展,一些病理性、炎性并发症逐渐趋于减少,但往往会出现一些视觉功能方面的问题,人们对视力的要求不仅仅是裸眼视力的提高,所期待的是更好的视觉质量,本文通过对在我院进行LASIK手术的近视患者750例（1468眼）中出现视觉质量下降的72例（144眼）做了相关检查分析，探讨影响LASIK术后视觉质量下降的相关因素，以寻求更好的手术设计方案。

摘要：目的筛选太子参多糖提取优化的最佳工艺。方法以太子参多糖为工艺筛选指标,采用正交实验设计方法筛选最佳水性工艺极其提取条件。结果通过正交试验验证最佳水性浸提工艺组合是A1B3C3,即最佳工艺条件为料液比1∶30、提取时间150min、温度90℃。结论采用该提取工艺,太子参多糖提取率得到提高。

摘要：目的利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测多系统萎缩病人TCRβ链CDR3谱序。方法提取1例多系统萎缩病人外周血单个核细胞中的总RNA逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,用荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,根据其溶解曲线图分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果该病例外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,有的家族呈现缺失状态,有的家族出现寡克隆状态。结论该多系统萎缩病人TCRβ链CDR3存在谱系漂移,有的表达呈寡克隆,有的无表达呈缺失。

摘要：为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌,并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变,本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lyt A基因所需引物,采用插入失活的方法构建SPY1-△lyt A突变株,并以缺陷菌的生长特性以及PCR的方法进行鉴定;将SPY1-△lyt A突变株于富钙环境中培养,用不同浓度的磷酸盐进行滴定,使其形成磷酸钙矿化壳,通过扫描电镜以及直接荧光反应来检测疫苗菌株矿化情况;并将矿化菌株与未矿化菌株同时置于37℃不同时间后通过比较其存活率来评价矿化菌的热稳定性。PCR结果以及细菌长时间不溶解的生长特性表明成功构建了SPY1-△lyt A突变株;扫描电镜以及直接荧光反应结果显示细菌表面形成Ca Pi矿化外壳,并且SPY1-△lyt A-Ca Pi矿化菌具有较好的热稳定性。本研究为肺炎链球菌活菌疫苗的进一步研发奠定了基础。

摘要：目的探讨慢病毒靶向沉默Bmi-1基因对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响。方法设计3条Bmi-1shRNA干扰系列,构建慢病毒重组载体PLVx-shRNA2-Bmi-1,用重组载体转染293T细胞,收集上层病毒液浓缩、滴定。将CNE2细胞随机分为5组,对照组不进行感染,shRNA1、2、3组分别感染表达shRNA1、2、3的慢病毒,空载体组感染空载的慢病毒。感染48 h,用RT-PCR及Western blotting法分别检测Bmi-1基因及蛋白的相对表达量,筛选沉默Bmi-1效率最佳的干扰序列。用平板克隆形成实验检测Bmi-1基因沉默后CNE2细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布。结果插入的序列与设计的3条shRNA序列碱基排列一致,说明目的片段均已正确插入,PLVx-shRNA_2-Bmi-1慢病毒表达载体构建成功。与其他两组比较,Bmi-1-shRNA1、2、3组Bmi-1 mRNA及蛋白相对表达量低(P均<0.05),Bmi-1-shRNA3组最低(P均<0.05),沉默效率最佳。与空载体组比较,Bmi-1-shRNA3组增殖能力弱(P均<0.05),细胞凋亡率高(P均<0.05),Bmi-1-shRNA3组G1期细胞比例高、S期细胞比例低(P均<0.05)。结论沉默Bmi-1基因可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、促进其凋亡,并改变细胞周期。

摘要：猪精液冷冻过程中,精子质膜往往因受到活性氧(ROS)的氧化而发生损伤,精子品质也随之下降.精子ROS水平受抗氧化酶活性的影响,然而冷冻过程中精子细胞内抗氧化酶活性变化与细胞膜完整性的关系还缺乏报道.该试验将巴马香猪精液冷冻保存降温过程中的精子分为4种状态,即鲜精、15℃精液、5℃精液和冷冻-解冻后精液,检测了各种状态下精子的运动参数、质膜完整性(PMI)和顶体完整性(AI),分析了超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性和ROS(丙二醛-MDA)水平.结果表明:15℃精子各项指标和鲜精无显著差异(p>0.05);5℃精子运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性低于鲜精(p0.05);冷冻-解冻后精子的运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性均低于其他各组(p<0.05),精子MDA水平显著高于其他各组(p<0.05).同时,SOD和Gpx活性与精子PMI和AI之间的相关性均达到了显著水平(p<0.05).可见,当精子降温至15℃以下直至冷冻时,SOD和GPX活性逐渐降低,精子细胞清除ROS的能力随之下降,精子质膜脂质过氧化反应增强,质膜受损,内容物外渗是精液品质降低的重要原因.