摘要：背景:研究发现人羊膜上皮细胞系WISH和FC植入裸鼠体内均可分化成软骨和成骨,作者检索关于足月分娩人胎膜的羊膜上皮细胞是否具有成骨特性国内外报道少见。目的:以足月分娩胎膜的人羊膜上皮细胞为前体细胞,观察其在体外定向诱导条件下分化为成骨细胞的能力。设计、时间及地点:细胞分子水平检测,于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成。材料:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准。方法:采用机械法剥离胎盘羊膜组织,用胰蛋白酶消化法分离人羊膜上皮细胞,按3×108L-1密度接种进行原代培养。取第1代人羊膜上皮细胞,设立两组:诱导组以1×108L-1密度接种于培养皿内,24h后更换为含体积分数为0.1的胎牛血清、100nmol/L地塞米松、50mg/L抗坏血酸、5mmol/Lβ-甘油磷酸的诱导培养液。对照组换液成分为仅含体积分数为0.1的胎牛血清的LG-DMEM培养液。主要观察指标:原代细胞用流式细胞仪分析其表型,免疫细胞化学法检测细胞角蛋白19的表达。诱导后采用钙-钴法检测成骨细胞特异性碱性磷酸酶的表达,茜素红S检测钙盐沉积情况。结果:人羊膜上皮细胞表达间充质干细胞表面标志CD29、CD44和上皮细胞标志细胞角蛋白19。向成骨细胞诱导分化21后,人羊膜上皮细胞由圆形变成梭形、三角形,细胞胞浆内碱性磷酸酶呈阳性表达,且可见钙盐沉积。结论:源自足月分娩胎盘的人羊膜上皮细胞具有分化为成骨细胞的特性。

摘要：背景:近年来的研究表明,除已知的人骨髓、外周血和脐带血中存在造血干/祖细胞外,人胎盘组织中也有造血干/祖细胞存在。目前为止,还缺乏对人胎盘组织造血干/祖细胞的增殖分化特性及人胎盘组织淋巴细胞亚群组成和免疫原性等的深入研究。目的:探究人胎盘组织是否含有比脐带血更丰富的造血干/祖细胞,并对其造血祖细胞系增殖分化能力进行检测,同时对人胎盘组织淋巴细胞亚群组成及表型特征进行分析。设计、时间及地点:开放性实验,于2004-01/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成。材料:经产妇知情同意,无菌采集遵义医学院附属医院产科健康足月分娩新生儿胎盘和脐带血共12份。淋巴细胞亚群检测试剂盒,CD34绝对计数试剂盒(Becton Dickinson公司);CD34磁珠分选试剂盒,FITC标记的CD38单克隆抗体,抗FITC磁珠和MS/LS免疫磁式细胞分选柱(Miltenyi Biotec)。方法:脐带血与RPMI-1640培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)按1∶1的比例混合,采用Ficoll-Histopaque分离液离心30min,吸取界面层细胞,PBS洗涤一次,获得脐带血单个核细胞。采用机械法加0.25g/L胶原酶消化制备胎盘组织单个细胞悬液,之后同脐带血单个核细胞分离步骤分离胎盘单个核细胞。流式细胞仪检测胎盘单个核细胞中CD34+CD38-,CD34+CD38+造血干/祖细胞(HSPCs)和淋巴细胞亚群的组成比例。免疫磁珠分选法分选人胎盘CD34+CD38-、CD34+CD38+造血干/祖细胞,并分别进行粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位系集落形成培养,以评价其造血祖细胞系增殖分化能力。实验全程用脐带血作平行比较分析。主要观察指标:胎盘和脐带血CD34+造血干/祖细胞组成百分率、祖细胞系集落形成能力、淋巴细胞亚群表型及组成特点。结果:①胎盘CD34+造血干/祖细胞百分率是脐带血的8.8倍,差异有显著性意义(P0.05)。结论:人胎盘组织富含CD34+造血干/祖细胞,其CD34+CD38+、CD34+CD38-两个造血干/祖细胞亚群均具有增殖分化为粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位的能力,并且人胎盘组织具有淋巴细胞亚群低比例和抑制性T细胞高比例的特点,使其有望成为造血干/祖细胞移植的新来源。

摘要：目的探测鉴定汉族和布依族个体表皮生长因子前体基因(preproEGF)第20、21外显子及其内含子DNA序列区段中的单核苷酸多态。方法设计合成11条引物分别以布依族和汉族个体的基因组DNA为模板进行大片段PCR扩增和产物的DNA测序;以GenBank资料库相应的核酸序列为参照分析比较布依族、汉族个体和外国人种的单核苷酸多态分布。结果布依和汉族个体基因组样本的PCR扩增均得到一条长约4.5kb的DNA片段,其长度覆盖preproEGF基因的第20、21外显子及其内含子;汉族个体与布依族个体的DNA测序图显示:汉族个体有两个单核苷酸变体存在,一个位于preproEGF基因序列的第86380bp(C/T),另一个位于第84580bp(T/-);布依族个体也有一个单核苷酸变体存在,位于preproEGF基因序列的第84329bp(T/C);与GenBank的DNA序列对比分析发现:汉族个体的(C/T)变体是一个单核苷酸多态位点,迄今虽有报道见于欧洲和非洲撒哈拉民族人种,但在汉民族则未见报道;布依族个体的(T/C)变体也是一个单核苷酸多态位点,该位点的多态虽已有报道见于汉族和其它民族人种,但在布依民族则未见报道。结论本研究发现了汉族和布依族个体preproEGF基因的第20内含子区段存在3个新的单核苷酸多态,即86380bp(C/T)、84580bp(T/-)和84329bp(T/C),但汉族个体的84580bp(T/-)单核苷酸多态尚需进一步证实。

摘要：背景:组织工程心血管补片在外科手术治疗先天性心脏病的解决方案中起着决定性的作用。组织工程心血管补片构建策略灵活丰富,基础研究和临床应用范围广泛。目的:对心血管补片在先天性心脏病外科手术治疗中的应用进展以及组织工程心血管补片的构建方法进行综述。方法:采用电子检索方式检索PubM ed数据库、Medline数据库、中国期刊全文数据库、临床试验注册资料库2001年1月至2016年12月收录的有关组织工程心血管补片分类、设计研究以及基础和临床研究的文献。以"cardiac tissue engineering,pericardium patch,stem cell,congential heart disease,congenital heart conditions,CHD"为英文检索词,以"心脏补片,血管补片,心血管补片和先天性心脏病"为中文检索词。最终纳入32篇文献进行分析。结果与结论:随着人类干细胞生物学、材料学和检测技术的进步,组织工程心血管材料有望实现标准化和产业化管理。但随之而来的问题也有很多,例如:三维血管设计策略的具体实施方法,多种种子细胞联合搭载的比例控制,临床前质控和产业化管理标准等,紧密的国际间合作能够推动整体产业健康良好地发展。

摘要：总结开设研究生新课程《干细胞原理、技术与临床》的教学经验与体会,为课程设置推广提供借鉴,并不断提高教学质量。文章从课程设计、教材内容选择、教学理念、教学模式、师资队伍培养等方面介绍了教学中所采取的措施与取得的成效。在教学上强调摒弃陈旧的以知识灌输为主教学理念,发挥学生的主观能动性,并针对性地着重论述教材内容既要注重基础与临床应用,又要结合现有法律法规紧盯科技前沿,教学过程中既要重视教师素质与教学水平提高,强调师生之间的互动,又要重视研究生学习方法的掌握,强化研究生创新思维与能力培养、激发学生学习兴趣,采用多种教学方式如视频教学及问题式教学提高学生自主学习和实践能力。该课程教学取得的良好教学效果,所取得的实践经验值得在今后的研究生教学中加以推广。

摘要：背景与目的单核苷酸多态性(SNPs)在蛋白编码序列中多以富集成簇的方式分布,并提示其可能有民族区域和人种之间的差异性,然而SNPs在黔西南汉族人群表皮生长因子前体蛋白(prepro EGF)编码序列第14和16外显子中的分布状况迄今尚未见报道,本研究拟对35例黔西南汉族受试者进行研究,旨在分析SNPs在prepro EGF编码序列第14和16外显子中的分布特征。方法设计合成4条引物,分别对35例汉族受试者prepro EGF编码序列第14和16外显子区段进行PCR扩增和产物的DNA测序;检索单核苷酸多态性资料库(db SNP)获取资料并与测序结果进行对比分析。结果 35例黔西南汉族受试者中13例(37.1%)在prepro EGF编码序列的2 525 bp位点出现SNPs,基因型为AG和GG,频率分别为69.2%和30.8%,其等位基因频率分别为A 34.6%和G 65.4%;27例(77.1%)在2 576 bp位点有SNPs,基因型为AA和AG,频率分别为66.7%和33.3%,等位基因频率分别为A 83.3%和G 16.7%。相比之下,北京汉族受试者较黔西南汉族受试者在prepro EGF编码序列第14外显子内多了1个单核苷酸多态位点,即2 619 bp位点;欧美等其他民族不仅在prepro EGF编码序列第14外显子内分布有rs199935855等7个SNPs,而且在其第16外显子内也分布有rs149396988等6个SNPs;黔西南汉族和北京汉族受试者在prepro EGF编码序列的第16外显子内均未见有SNPs分布。结论在黔西南汉族、北京汉族和欧美等民族的prepro EGF编码序列第14和16外显子中,SNPs分别具有各民族、各种族的特征性分布,据此可区分不同地域的种族和人群,甚至进行个体识别。也可将这些呈特征性分布的SNPs视为遗传标记进而深入研究SNPs与疾病发生的关系。

摘要：目的比较分析单核苷酸多态在布依族、苗族和汉族个体preproEGF基因第20、21外显子及其内含子中的分布状况。方法 设计合成11条引物分别以布依族、苗族和汉族各个体的基因组DNA为模板进行大片段PCR扩增;DNA测序各PCR扩增产物;以GenBank资料库相应的核酸序列为参照分析比较布依族、苗族、汉族个体和外国人种的单核苷酸多态分布。结果布依、苗和汉族个体基因组样本的PCR扩增均得到一条长约4.5kb的DNA片段,其长度复盖preproEGF基因的第20、21外显子及第20内含子;与汉族个体相比较,布依族个体DNA测序结果显示有两个单核苷酸多态位点存在,一个位于preproEGF基因序列的第84329bp(T/C),另一个位于第83634bp(T/-);而苗族个体则仅存在一段长约20bp的套峰区,其中可见两个明确的套峰,分别位于第84583bp(N)和84597bp(N);与GenBank的DNA序列对比分析发现布依族个体的(T/C)多态位点在资料库中虽已报道见于其它民族群体,但在布依民族则未见报道。结论本研究首次证实了在布依族个体第20内含子区段存在一个单核苷酸多态位点84329bp(T/C);另一个多态位点83634bp(T/—)尚需进一步的研究加以完善证实;苗族个体的20bp套峰区显示其可能存在着杂合等位基因多态。