摘要：目的构建过表达HLA-G5的慢病毒载体,感染人羊膜间充质干细胞(human amnion drived mesenchymal stem cells,h AD-MSCs),为后续探索HLA-G5在h AD-MSCs诱导免疫耐受中的作用和机制,并为探索以其作为生物反应器生产HLA-G5提供前期实验基础。方法人工合成HLA-G5全长序列,定向接入真核表达载体p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP,转化入大肠杆菌,酶切鉴定和测序正确后进行慢病毒包装。按照慢病毒滴度梯度感染h AD-MSCs,DAPI复染细胞核,荧光显微镜下观察感染效率。MTS检测连续感染24 h后慢病毒对h AD-MSCs的毒性。ELISA法检测感染后细胞上清中的可溶性HLA-G5表达。结果 (1)酶切鉴定和测序结果显示,HLA-G5表达质粒质量合格,序列比对与设计序列符合率100%;(2)感染h AD-MSCs后有较高的感染效率(接近100%);(3)构建的慢病毒毒性较小;(4)感染后h AD-MSCs分泌可溶性HLA-G5增高。结论本研究中构建的HLA-G5慢病毒过表达载体能够安全高效的感染h AD-MSCs,为进一步研究其体内外诱导免疫耐受的作用和机制,并将其作为细胞反应器生产HLA-G5的前期工艺奠定了基础。