摘要：目的 分析梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的生物学特性,表达、纯化并制备TrkA蛋白的抗血清。方法 从NCBI中查到梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的氨基酸序列,采用生物信息学方法分析TrkA蛋白的基本理化性质、信号肽、定位、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位。按照梅毒螺旋体TrkA的DNA序列设计引物,PCR扩增TrkA基因,双酶切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-TrkA转转化入大肠埃希菌BL21,培养后使用IPTG诱导重组TrkA蛋白表达,利用Ni^(2+)亲和层析法纯化TrkA蛋白。取TrkA蛋白皮下接种小鼠,免疫3次,制备小鼠血清,ELISA法检测血清TrkA特异性IgG滴度。结果 生物信息学预测TrkA蛋白共有236个氨基酸,相对分子质量26.7ku,为胞内蛋白。该蛋白二级结构中α螺旋占45.34%,β折叠占20.76%,无规卷曲占27.97%,β转角占5.93%。Phyre2网站预测TrkA蛋白三级结构中85.5%氨基酸处于最合理区。TrKA蛋白含有6个连续B细胞表位和4个非连续表位。成功构建重组质粒pET28a-TrkA并获得高纯度的重组TrkA蛋白。该蛋白免疫小鼠能够诱导产生特异性IgG抗体,血清抗体滴度为1∶25 600。结论 生物信息学分析梅毒螺旋体TrkA为亲水性蛋白,含有B细胞歌表位,纯化的重组TrkA蛋白具有良好的抗原性,能诱导小鼠产生高滴度抗体。

摘要：目的表达、纯化肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)烷基过氧化氢还原酶C(Alkyl hydroperoxide reductase C,Ahpc)并测定其活性。方法利用Clustal Omega分析不同细菌Ahpc蛋白的同源性;利用生物信息学方法分析肺炎克雷伯菌Ahpc蛋白的生物学特性。根据Ahpc基因,设计PCR引物,以肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板,PCR扩增Ahpc基因,双酶切后将其连接到pET28a,获得重组质粒pET28a-Ahpc。将重组质粒转化大肠埃希菌,使用IPTG诱导重组Ahpc蛋白的表达,使用亲和层析纯化目蛋白,采用氧化铁二甲酚橙法测定Ahpc蛋白降解叔丁基过氧化氢活性。结果肺炎克雷伯菌Ahpc蛋白含有两个半胱氨酸的经典过氧氧化还原蛋白,定位在细菌细胞质,无跨膜结构域。其α螺旋、β片层以及无规卷曲的含量分别为27.8%,19.7%和52.4%。三级结构是由10个同源的Ahpc蛋白组成同源多聚体。Ahpc蛋白具有多个B细胞表位。PCR扩增得到564bp的Ahpc基因,构建的pET28a-Ahpc重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后能表达分子质量单位约为24.7ku的重组Ahpc蛋白。亲和层析法获得纯度较高的重组Ahpc蛋白,纯化的重组蛋白能降解丁基过氧化氢。结论成功表达了肺炎克雷伯菌Ahpc蛋白,该蛋白纯化后仍具有降解能够降解丁基过氧化氢的活性,为肺炎克雷伯菌的抗氧化机制研究奠定了基础。

摘要：目的表达及纯化肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)菌毛FimA蛋白并制备多克隆抗体。方法在Clustal Omega网站上比对不同细菌FimA蛋白的同源性。设计特异引物,PCR扩增肺炎克雷伯菌FimA基因,双酶切后将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-FimA。将pET28a-FimA转化表达菌BL21 star(DE3)后培养,使用IPTG诱导FimA蛋白表达。使用IEDG在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,然后用层析纯化的重组FimA蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA检测IgG、IgG1、IgG2a和IgA.结果肺炎克雷伯菌的FimA与其他FimA蛋白同源性较低,为23.6%?30.6%。构建的重组质粒PET28a-FimA在大肠埃希菌中能表达21.6×10^3的重组FimA蛋白,经亲和层析后得到单一电泳条带的高纯度目的蛋白。用FimA蛋白免疫小鼠,获得高滴度的IgG和IgA,且IgG2a的A450值高于IgG1.结论成功构建了表达质粒pET28a-FimA,获得高纯度的重组蛋白FimA。FimA具有免疫原性,用该蛋白免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体。

摘要：医学寄生虫学是医学基础课程之一,各专业的教学目标及培养要求不尽相同,因此采用以成果为导向的教育(outcome-based education,OBE)教学理念,对各教学要素和教学环节进行分析、计划,针对不同医学专业制订相应的教学设计文案,才能保证教学效果的有效实现。文章就临床专业、护理专业、医学检验技术专业的医学寄生虫学课程教学设计的要素进行具体分析,为撰写不同专业的医学寄生虫学具体章节教学设计文案提供参考。

摘要：目的以鲍曼不动杆菌甲硫氨酸亚砜还原酶A(methionine sulfoxide reductase A,MsrA)构建p ET28a-MsrA并表达、纯化原核表达重组质粒,观察在氧化应激条件下MsrA的表达水平,为其抗氧化功能的研究提供依据。方法设计并合成分别带NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点的MsrA引物,用PCR方法扩增MsrA基因,构建p ET28a-MsrA重组质粒并转化大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组MsrA蛋白表达,经Ni2+亲和层析分离纯化。利用荧光定量PCR方法,观察在氧化应激条件下MsrA蛋白的表达量。结果构建了编码MsrA蛋白的重组质粒p ET28a-MsrA,SDS-PAGE显示在相对分子质量约22 000处有一明显条带的重组MsrA蛋白,并利用Ni2+亲和层析柱纯化获得纯度较高的MsrA蛋白。氧化应激也可快速诱导MsrA蛋白的表达。结论成功构建了p ET28a-MsrA重组质粒及表达纯化系统,且氧化应激条件下MsrA蛋白表达上调。

摘要：案例教学法已成为现在较重要的教学方法之一,如何将案例教学法与互联网+相结合并在教学中进行应用,对学生的培养起着重要作用.因此,本文从案例选择、设计及其与互联网+的联系等方面探讨在病原生物学与免疫学课程中的教学应用.

摘要：随着检验医学技术的不断进步与发展,常规的检验基础实验教学已无法满足教学需求。因此,需要在常规教学中引进先进的教学模式,采取正确的引导方式,以提高学生对学习的兴趣及热情,将科研发展方向与前沿内容相结合,通过丰富的教学手段,培养学生科研及创新思维。此次研究对设计性实验在临床检验基础实验教学中具体应用作简要阐述。

摘要：[目的]表达纯化穿透支原体(Mycoplasma penetrans)铁蛋白(Ferritin)并利用生物信息学方法分析该蛋白的生物学特性。[方法]从NCBI网站上查到Mpe Ferritin的DNA和蛋白序列,并合成Ferritin基因,设计PCR引物,以合成基因为模板扩增Ferritin片段,将其与pET15b载体连接,将连接产物转化到大肠杆菌Top10感受态细胞。挑取阳性菌落,利用PCR和测序验证,提取质粒pET15b-Ferritin并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目的蛋白表达,并使用Ni2+亲和法纯化Ferritin蛋白。然后用生物信息学方法分析Ferritin蛋白的生物学特性。[结果]Mpe Ferritin基因全长为540 bp,编码180个氨基酸。成功构建重组质粒pET15b-Ferritin,表达并纯化得到Ferritin蛋白。Ferritin蛋白定位于细胞质,无信号肽。它的α-螺旋占71.5%,β-转角占6.7%,延伸链占5.0%,无规卷曲占16.8%。由24个同源Ferritin蛋白分子组成24聚体。[结论]通过基因工程方法纯化得到Ferritin蛋白并分析了Ferritin的生物学性质。