摘要：目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰介导的MAGE3基因表达默寂对肺癌细胞定植和转移的影响。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneoGFP载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR和Western印迹检测MAGE3基因mRNA和蛋白表达水平的变化。用软琼脂克隆形成实验和细胞体外侵袭实验,观察对肿瘤形成能力和侵袭力的影响。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPERneoGFP载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western印迹检测显示,MAGE3基因的表达水平明显降低;转染siRNA表达载体组的肺癌细胞在软琼脂中形成克隆数和穿透Matrigel的细胞数都显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.05)。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体,RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉寂可有效降低肺癌细胞定植和转移。

摘要：目的利用RNA干扰（RNAi）技术将针对性构建的重组质粒转染人人肺癌细胞株NCI-H520，观察下调Pokemon基因对人肺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Ambion公司设计软件设计针对Pokemon基因的2条小干扰RNA（siRNA）序列，并合成2对互补的siRNA编码DNA片段，定向克隆至RNAi-ReadypSIREN-RetroQ载体的BamHI和EcoRI位点，构建重组体质粒，分别命名为pSIREN-Pokemon-1和pSIREN-Pokemon-2，同时设立转染空载体对照组。Westernblot检测人肺癌细胞中Pokemon蛋白表达，噻唑蓝（M1vr）比色实验检测转染后细胞的增殖抑制结果，流式细胞分析技术检测转染后细胞周期的分布。结果利用RNAi-Ready pSIRENR RetroQ载体构建的重组质粒可以成功抑制人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白的表达。Westernblot检测发现人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白高水平表达，转染后其表达水平明显下降。转染后第3天，M1Tr比色实验显示pSIREN-Pokemon-1组（0．0015±0．0030）和pSIREN-Pokemon-2组（0．0086±0．0015）与pSIREN-Pokemon.0组（0．0230±0．0010）比较差异有统计学意义（P〈0．05），而pSIREN-Pokemon-1与pSIREN-Pokemon-2组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞分析检测发现转染siRNA细胞与转染空载体细胞的细胞周期差异无统计学意义（P〉0．05）。pSIREN-Pokemon-1转染组及pSIREN-Pokemon-2转染组形成克隆的数量（18．0±0．3、16．0±0．4）明显低于pSIREN-Pokemon-O组（52．0±0．4，P〈0．05）。结论使用pSIREN载体成功构建的重组质粒转染人肺癌细胞可有效抑制原癌基因Pokemon的表达。转染后细胞增殖受到抑制，生长速度减慢。抑制Pokemon蛋白表达对细胞周期无明显影响。靶向siRNA可以存人肺癌细胞中抑制Pokemon蛋白表达，负调节肺癌细胞生长。

摘要：目的探讨肺癌合并肺栓塞(pulmonary thromboembolism,PTE)的危险因素,为有效防治肺癌患者并发PTE提供参考依据。方法采用1∶3配比设计的病例对照研究方法,对郑州大学第五附属医院2009-02-03-2014-05-01收治的35例肺癌合并PTE患者和经年龄与性别匹配的105例肺癌患者进行条件Logistic回归分析。结果单因素条件Logistic回归分析显示,合并慢性阻塞性肺病、超重、肺腺癌、肺癌Ⅲ~Ⅳ期、化疗、中心静脉置管、白细胞增高、血红蛋白增高和D-二聚体增高等因素为肺癌合并PTE的危险因素,P11×109 L-1,OR=3.09,95%CI为1.85~5.17)和D-二聚体增高(>500ng/L,OR=2.66,95%CI为1.50~4.71)等因素为肺癌合并肺栓塞的危险因素。合并PTE肺癌患者生存时间显著低于不合并PTE肺癌患者,χ2=16.998,P<0.001。结论肺腺癌、晚期肺癌、化疗、高白细胞、高D-二聚体肺癌患者并发PTE的风险增加,应作为PTE重点防治对象。

摘要：目的调查中国儿科医务人员对脉搏血氧饱和度监测的知识、态度和行为(简称知信行),并分析其影响因素。方法采用自行设计的问卷,在2022年3月11日至14日对来自中国31个省、自治区、直辖市的11849例儿科医务人员进行线上调查。采用Logistic回归分析儿科医务人员脉搏血氧饱和度监测知信行的主要影响因素。结果儿科医务人员脉搏血氧饱和度监测知识、态度、行为总得分分别为(5.57±0.96)分、(11.24±1.25)分和(11.19±4.54)分,得分率分别为69.61%、74.95%和55.99%。Logistic回归分析显示,儿科医务人员的年龄、从业年限、所在地区和所在单位是否配置脉搏血氧仪是知识水平的主要影响因素(均P<0.05);知识水平、性别、学历、从业年限、所在地区、所在医院级别和所在单位是否配置脉搏血氧仪是态度水平的主要影响因素(均P<0.05);知识水平、性别、年龄和所在单位是否配置脉搏血氧仪是行为水平的主要影响因素(均P<0.05)。结论中国儿科医务人员对脉搏血氧饱和度监测的知识和态度水平有待进一步提高,脉搏血氧仪的使用存在明显不足。亟须制定相关政策/指南,加强教育培训,提高知信度,增加脉搏血氧仪的配置,普及推广脉搏血氧饱和度监测在临床实践中的应用。

摘要：目的探讨中国北方汉族人群基质金属蛋白酶1(MMP1)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法(PCRRELP)检测MMP1基因型在59例中国北方汉族人COPD患者和109例健康人中频率的分布,用回顾性病例对照实验设计分析人群对COPD易感性的相对危险度及相应可信区间。结果COPD患者MMP1基因的突变型(2G/2G)、杂合型(2G/1G)、野生型(1G/1G)频率分布分别为54.2%(32/59)、37.3%(22/59)和8.5%(5/59),健康人为71.5%(78/109)、20.2%(22/109)和8.3%(9/109)。以野生型(1G/1G)与杂合型(2G/1G)为参考组,MMP1基因突变型(2G/2G))与参考组相比,OR=0.467,95%CI=0.237～0.924,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP1基因突变型(2G/2G)降低中国北方汉族人群对COPD的遗传易感性。

摘要：目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对MAGE3基因的干扰作用。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入***载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染胃癌细胞BGC823,采用RT-PCR检测MAGE3基因mRNA表达水平的变化。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到***载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;稳定转染人胃癌细胞BGC823后,RT-PCR检测显示,MAGE3基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制MAGE3基因表达。

摘要：背景与目的肺癌是目前发病率较高的恶性肿瘤之一,其病死率居恶性肿瘤的首位,随着分子生物学研究的不断进展,人们越来越清楚地认识到肺癌的发生和发展是一个多基因参与的多步骤的过程,RNAi作为基因治疗中一种新的效率高、特异性强的治疗手段愈来愈多地受到人们的重视。本研究应用RNA干扰(RNAi)技术,以AKT2为靶基因,设计并构建重组真核表达载体,转染肺癌细胞NCI-H446,观察其对AKT2基因的沉默作用。方法利用已知AKT2的mRNA基因序列设计并合成具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列及一条无关对照序列,与pGEM-TEasy载体连接后以T7和SP6为引物进行PCR鉴定,对表达载体pRNAT-U6.2及阳性克隆产物进行双酶切,将得到的基因及线性化的表达载体再次连接,利用PCR的方法进行重组体的筛选鉴定及测序分析,利用脂质体转染肺癌细胞NCI-H446,RT-PCR检测AKT2-mRNA沉默效果。结果将合成的DNA序列克隆到表达载体上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染肺癌细胞NCI-H446后,AKT2-mRNA表达明显降低。结论成功构建的靶向AKT2-RNA的干扰重组表达载体可有效抑制肺癌细胞NCI-H446mRNA的表达。