摘要：目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT8细胞系中的表达,以期为肿瘤的基因治疗提供新的思路和手段。方法构建逆转录病毒表达载体pSIRENEphA2,应用逆转录病毒载体介导的RNAi技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌细胞HCT8中的表达,同时利用Western免疫印迹和免疫组织化学SP法分别检测转染后HCT8细胞中EphA2蛋白的表达水平。结果从EphA2mRNA序列中筛选出有效的siRNA序列,并设计了互补双链寡核苷酸发夹结构,成功构建了EphA2siRNA的逆转录病毒表达载体,重组逆转录病毒载体pSIRENEphA2经酶切鉴定结果正确;测序分析证实插入的EphA2siRNA的方向及序列正确。Western免疫印迹和免疫组织化学方法分析,与对照空载体及未转染细胞相比,重组pSIRENEphA2转染的HCT8细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi能够抑制HCT8细胞中EphA2的蛋白表达,为以EphA2为靶向的结直肠癌的基因治疗提供了新的思路和手段。

摘要：目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）对人乳腺癌移植瘤组织中乳腺癌特异性基因BCSGl表达的抑制作用。方法根据BCSG1的已知cDNA序列，设计并体外转录合成4条特异性siRNA，分别导入载体质粒中，用脂质体介导分别转染人乳腺癌细胞系MCF7细胞中，以无关序列转染和未转染的MCF7细胞为对照。将用上述4条特异性siRNA和无关序列转染后的细胞连同未转染的MCF7细胞（共6组细胞）注入裸鼠皮下，构建裸鼠乳腺癌移植瘤模型，分析肿瘤生长抑制情况。采用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学SP法分别检测6组裸鼠移植瘤中BCSG1mRNA和BCSG1蛋白的表达情况。3组人肿瘤组织（浸润性导管癌、癌旁乳腺导管增生组织和乳腺纤维腺瘤）同时用作对照。结果BCSG1-siRNA转染的4组的抑瘤率均明显大于无关序列转染组及未转染对照组（P〈0．01）；与无关序列转染组及未转染对照组相比，BCSG1-siRNA转染的4组肿瘤组织中BCSG1蛋白的表达明显减弱；未转染细胞对照组和无关序列转染组、人乳腺浸润性导管癌组均有大量BCSG1mRNA阳性条带，而在BCSG1-siRNA转染的4组中，仅有少量BCSG1较弱的mRNA阳性条带，与未转染细胞对照组和无关序列转染组相比，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论BCSG1-siRNA能有效抑制肿瘤的生长，下调裸鼠乳腺癌组织中BCSG1蛋白及mRNA的表达。

摘要：阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)作为一种不可逆转的神经退行性疾病,能在其发病初期进行干预治疗对病情的控制和改善具有重要意义。近年来,研究者广泛地使用深度学习方法对AD的核磁共振成像(Magnetic resonance imaging,MRI)进行分析并做出早期诊断。但AD早期的脑部结构变化与正常人差别较小,目前单一尺度的分析方法难以有效捕捉到这些细小差别的特征。针对以上问题,本文提出特征增强金字塔网络(Feature enhanced pyramid network,FEPN)进行AD的MRI早期诊断,通过设计的浅层特征重提取模型利用上下文信息补充高层特征,并计算融合权重指导高低层特征图的融合,增强了上下文信息交互和多尺度特征融合的匹配度。对比实验采用Kaggle公开的Alzheimer数据集对该方法进行验证,实验结果表明,相比于其他同类方法,FEPN有效提升了4种AD脑状态(非痴呆、非常轻度痴呆、轻度痴呆、中度痴呆)MRI的分类精度。

摘要：目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B(CB)基因表达的影响。方法:设计并用体外转录方法合成针对CB基因的siRNA,转染EC9706细胞(设10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L3个转染浓度),分别培养24h、48h、72h(实验组),采用免疫细胞化学及原位杂交方法检测转染细胞中CB蛋白和mRNA表达的变化,并设正常对照、空白对照、无关对照。结果:不同浓度siRNA转染24h、48h、72hEC9706细胞CB蛋白表达量均较正常、空白及无关对照降低(P0.05)。3个时间段内随浓度增加siRNA抑制效应增强,3者相比差异有统计学意义(P<0.05),正常对照、空白对照、无关对照均未表现出对CB蛋白表达的抑制效应。转染siRNA后部分细胞形态发生改变。结论:特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CB蛋白和mRNA表达。

摘要：目的:探讨RNAi技术对人食管癌EC9706细胞肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达的影响。方法:针对Hpa不同基因位点设计合成寡核苷酸,然后转录为小分子干扰RNA(siRNA),分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导转染EC9706细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中Hpa基因的表达。结果:siRNA可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达,以15μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义(P>0.05),不同浓度siRNA对Hpa基因表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组(P<0.05)。结论:RNAi技术可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达。

摘要：目的利用RNA干扰（RNAi）技术将针对性构建的重组质粒转染人人肺癌细胞株NCI-H520，观察下调Pokemon基因对人肺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Ambion公司设计软件设计针对Pokemon基因的2条小干扰RNA（siRNA）序列，并合成2对互补的siRNA编码DNA片段，定向克隆至RNAi-ReadypSIREN-RetroQ载体的BamHI和EcoRI位点，构建重组体质粒，分别命名为pSIREN-Pokemon-1和pSIREN-Pokemon-2，同时设立转染空载体对照组。Westernblot检测人肺癌细胞中Pokemon蛋白表达，噻唑蓝（M1vr）比色实验检测转染后细胞的增殖抑制结果，流式细胞分析技术检测转染后细胞周期的分布。结果利用RNAi-Ready pSIRENR RetroQ载体构建的重组质粒可以成功抑制人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白的表达。Westernblot检测发现人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白高水平表达，转染后其表达水平明显下降。转染后第3天，M1Tr比色实验显示pSIREN-Pokemon-1组（0．0015±0．0030）和pSIREN-Pokemon-2组（0．0086±0．0015）与pSIREN-Pokemon.0组（0．0230±0．0010）比较差异有统计学意义（P〈0．05），而pSIREN-Pokemon-1与pSIREN-Pokemon-2组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞分析检测发现转染siRNA细胞与转染空载体细胞的细胞周期差异无统计学意义（P〉0．05）。pSIREN-Pokemon-1转染组及pSIREN-Pokemon-2转染组形成克隆的数量（18．0±0．3、16．0±0．4）明显低于pSIREN-Pokemon-O组（52．0±0．4，P〈0．05）。结论使用pSIREN载体成功构建的重组质粒转染人肺癌细胞可有效抑制原癌基因Pokemon的表达。转染后细胞增殖受到抑制，生长速度减慢。抑制Pokemon蛋白表达对细胞周期无明显影响。靶向siRNA可以存人肺癌细胞中抑制Pokemon蛋白表达，负调节肺癌细胞生长。

摘要：目的 观察RNA干扰（RNAi）对MCF7细胞株BCSG-1基因表达的抑制作用.方法 针对BCSG-1的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性siRNA（BCSG-1-siRNA-1、BCSG-1-siRNA-2、BCSG-1-siRNA-3、BCSG-1-siRNA-4）,1条非特异性siRNA,用脂质体介导转染MCF-7细胞48 h,同时设空白对照组（空脂质体）、正常MCF7对照组（不转染）.采用免疫细胞化学及半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测7组细胞中BCSG-1蛋白及mRNA的表达,免疫细胞化学7组中BCSG-1蛋白表达分别为4.27±0.12、4.19±0.22、4.15±0.14、4.17±0.13、7.92±0.22、8.02±0.13、8.02±0.13 RT-PCR测7组细胞中BCSG-1 mRNA的表达分别为0.624±0.010、0.626±0.013、0.634±0.008、0.631±0.010、0.976±0.076、0.983±0.052、1.014±0.034.结果 7组中BCSG-1蛋白表达结果比较,差异有统计学意义（P＜0.01） mRNA的表达结果比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.与各对照组比较,BCSG-1-siRNA转染的4组细胞中BCSG-1蛋白及mRNA的表达均减弱,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 BCSG-1-siRNA能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞中BCSG-1蛋白及mRNA的表达.

摘要：目的:研究RNA干扰下调CXCR4基因对膀胱移行细胞癌T24细胞体外侵袭力的影响。方法:根据CX-CR4基因特点,设计合成CXCR4特异性小干扰RNA(siRNA),并转染T24细胞,同时设置空白对照(转染时只加脂质体)和阴性对照(采用无关序列RNA转染)组。通过RT-PCR方法检测CXCR4mRNA的表达,采用Westernblot方法检测CXCR4蛋白的表达,用Boyden小室体外细胞侵袭模型检测细胞体外侵袭能力。结果:各组T24细胞的CXCR4mRNA、蛋白水平和穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(F=140.822、473.079和133.247,P<0.001)。siRNA转染组T24细胞的CXCR4mRNA、蛋白表达下调,体外侵袭力减弱(P<0.05)。结论:CXCR4特异性siRNA可降低膀胱移行细胞癌T24细胞体外侵袭力。

摘要：目的探讨靶向干扰骨架蛋白Transgelin对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法设计并体外合成靶向Transgelin的短发夹RNA（shRNA）真核表达质粒，将其转染人胰腺癌细胞BxPC3，采用RT—PCR、Western印迹法检测转染前后Transgelin表达的变化。成功造模胰腺癌裸鼠24只，按皮下注入细胞不同均分为3组：实验组（接种BxPC3／shRNA）、阴性对照组（接种空质粒转染细胞BxPC3／Neo）和空白对照组（接种未转染细胞BxPC3）。每周测量肿瘤大小，术后第28天处死所有裸鼠，计算瘤体体积，治疗前、后裸鼠体重的变化以及抑瘤率。免疫组织化学法检测移植瘤组织切片中Transgelin和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达。结果实验组、阴性对照组和空白对照组在各时间段的肿瘤体积增长差异有统计学意义（均P〈0．05）。实验组在第21，28天肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）。实验组第28天瘤重为（0．74±0．21）g，阴性对照组为（1．42±0．28）g，空白组为（1．59±0．24）g。实验组瘤重与阴性、空白对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05），抑瘤率达53．5％。实验组PCNA指数显著低于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）。结论靶向封闭Transgelin基因能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在裸鼠体内的增殖及肿瘤生长。

摘要：目的构建pSilencer3．1．细胞周期检测点激酶1（Chkl）小干扰RNA（siRNA）重组载体，观察其对顺铂抑制食管癌EC9706细胞增殖及诱导其凋亡的影响。方法根据Chkl基因序列，设计合成3条ChklsiRNA片段，构建3个***重组载体，转染人食管鳞癌EC9706，采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测细胞中ChklmRNA的表达，Westernblot检测Chkl蛋白的表达，选择抑制Chkl表达最强的pSilencer3．1-ChklsiRNA转染EC970624h后，再应用浓度为10μmol／L的顺铂处理EC9706细胞12h，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，原位末端转移酶标记（TUNEL）法及流式细胞术检测各组细胞凋亡，同时设顺铂单独处理组和正常对照组。结果pSilencer3．1-ChklsiRNA转染食管癌EC9706细胞，人食管癌EC9706细胞中ChklmRNA及蛋白（siRNAl：1．828±0．077，siRNA2：1．801±0．072，siRNA3：1．833±0．079，未处理的EC9706细胞2．793±0．086，对照siRNA组2．724±0．084）的表达均减弱，且差异均有统计学意义（P〈0．05），并增强顺铂对人食管癌EC9706细胞增殖的抑制作用[ChklsiRNA＋顺铂组、顺铂组及正常对照组细胞生长抑制率分别为（24．67±0．54）％、（13．56±0．28）％及（1．93±0．12）％]及对细胞凋亡指数[ChklsiRNA＋顺铂组、顺铂组及正常对照组分别为（11．76±1．02）％、（19．97±1．23）％及（3．76±0．54）％]的诱导作用（P〈0．05）。结论成功构建的pSilencer3．1一ChklsiRNA重组载体，其可能通过抑制Chkl基因的表达，增强顺铂抗肿瘤的敏感性。