摘要：目的探讨短发夹状干扰 RNA(shRNA)诱导 FMS 样酪氨酸激酶3(FLT3)的靶向抑制对急性单核细胞白血病(AMOL)细胞株 THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成 FLT3靶向 shRNA(FLT3-shRNA),转染 THP-1细胞。以半定量逆转录 PCR(RT-PCR)、流式细胞法(FCM)检测细胞 FLT3在 mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8(CCK-8)检测细胞增殖活力,FCM 法检测细胞周期,DNA 梯度条带(DNA Ladder)和 Annexin V-FITC 染色法分析细胞凋亡。结果合成的 FLT3-shRNA 15 nmol/L 转染48 h 对 FLT3 mRNA 和蛋白的抑制率分别达(72.95±2.07)%、(65.39±5.57)%。shRNA 干扰后细胞增殖活力受到抑制,48 h 抑制率达(36.66±3.67)%,72 h 达(35.56±0.73)%。转染48 h 细胞周期出现 G_0/G_1期到 S 期的阻滞,FLT3-shRNA 组 G_0/G_1期的细胞百分比(65.71±4.47)%明显高于对照组,S 期(25.11±2.70)%低于对照组。FLT3-shRNA 作用48 h 有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC 检测细胞的早期凋亡率(18.59±2.07)%明显高于对照组。结论由 shRNA 诱导的 FLT3靶向干扰可有效的抑制 THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童 AMOL 治疗中具有潜在的价值。

摘要：FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达。结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强。25nmol/LshRNA1转染48小时对FLT3mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时。5nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系。15nmol/LshRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%。FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%。结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具。