摘要：目的探讨干细胞因子(SCF)/c-KIT系统对Bx PC-3胰腺癌细胞侵袭能力的影响以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)的作用。方法分别在正常氧分压条件下加入SCF以及低氧环境培养Bx PC-3细胞,使用实时定量PCR和Western blot法检测HIF-1αmRNA和蛋白水平的变化;设计并合成HIF-1α特异性的小干涉RNA(si HIF-1α),转染Bx PC-3细胞,实时定量PCR和Western blot法分别检测SCF和下调HIF-1α水平后对基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)表达的影响,TranswellTM检测SCF和下调HIF-1α水平后对Bx PC-3细胞侵袭能力的影响。结果 SCF和低氧刺激均可以上调HIF-1α的蛋白表达;si HIF-1α可以高效、特异性抑制Bx PC-3细胞中HIF-1α的蛋白表达;SCF能够促进MMP2、MMP9和u PA的表达,而敲低HIF-1α后下调上述基因的表达;SCF作用后Bx PC-3细胞的侵袭能力增强,而敲低HIF-1α后促进Bx PC-3细胞的侵袭。结论 SCF/c-KIT系统可以通过HIF-1α上调MMP2、MMP9和u PA的表达,从而增强Bx PC-3细胞的侵袭能力,而敲低HIF-1α可抑制其作用。

摘要：目的:探讨肝癌Hep3B细胞白细胞抗原-G(HLA-G)过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法:实验分为正常对照组(无干预措施,Hep3B组)、空载体对照组(转染空质粒,Hep3B-GFP组)和实验组(转染pEGFP-C1-HLA-G质粒,Hep3B-HLA-G组)。构建HLA-G真核表达质粒,转染至Hep3B细胞,经G418筛选,建立稳定过表达HLA-G的肝癌Hep3B细胞。Real-time PCR及Western blotting检测肝癌Hep3B细胞HLA-G mRNA及蛋白质水平的表达。分析肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。Real-time PCR和Western blotting结果均表明,转染重组质粒的Hep3B细胞HLA-G过表达(P<0.01)。NK细胞对转染pEGFP-C1-HLA-G的Hep3B细胞杀伤作用明显降低(P<0.01),HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对Hep3B、Hep3B-GFP和Hep3B HLA-G细胞的杀伤均增加(P<0.01)。结论:pEGFP-C1-HLA-G表达载体可有效增加HLA-G表达,HLA-G过表达可以削弱NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。

摘要：目的探讨基于贝叶斯网络建立进展期胆囊癌患者根治性切除术后生存预测模型的临床价值。方法回顾性分析国内9家中心2010年1月至2015年12月收治的经根治性手术治疗的进展期胆囊癌患者临床资料，纳入生存时间、阳性淋巴结数目（NMLN）、T分期、病理学分级、切缘、黄疸、肝脏浸润、年龄、性别、肿瘤形态10个变量因素，运用Bayesia Lab软件建立模型，基于树增益朴素贝叶斯算法建立以生存时间为目标节点的中位生存时间预测模型。采用混淆矩阵和受试者工作特征（ROC）曲线及ROC曲线下面积评价模型预测效果的优劣。运用Bayesia Lab进行10个变量因素的先验统计分析和以生存时间为目标变量、剩余因素为属性变量的后验分析，基于后验分析结果开展多态Birnbaum重要度计算，给出各属性变量的重要度排序。排序结果筛选前4种因素建立胆囊癌生存概率预测表。使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，生存分析采用Log-rank检验。结果共316例患者纳入研究，其中男性109例，女性207例，男女比例为1.0∶1.9，年龄（62.0±10.8）岁。R0切除298例（94.3%），R1切除18例（5.7%）。T分期：T3期287例（90.8%），T4期29例（9.2%）。总体中位生存时间（MST）为23.77个月，1、3、5年累积生存率分别为67.4%、40.8%、32.0%。正确预测值分别为121例（MST≤23.77个月）和115例（MST〉23.77个月），模型预测精确度为74.86%。生存时间的先验概率为0.503 2（MST≤23.77个月）和0.496 8（MST〉23.77个月）。重要度排序结果表明，NMLN（0.366 6）、切缘（0.350 1）、T分期（0.319 2）和病理分级（0.258 9）是影响患者术后生存时间的前4位预后因素。将NMLN、切缘、T分期和病理学分级4个因素作为观测变量，得出不同状态下患者处于各个生存时间段的概率。在此基础上，设计一种基于NMLN、切缘、T分期、病理分级的生存预测评分系统，4～9分患者的中位生存时间分别为66.8、42.4、26.0、9.0、7.5、2.3个月，差异有统计学意义（P〈0.01）。结论基于贝叶斯网络建立的进展期胆囊癌生存预测模型具有较高的准确性，NMLN、切缘、T分期和病理学分级是影响患者术后生存时间的预后因素，基于NMLN、切缘、T分期及病理分级的生存预测评分系统可用于进展期胆囊癌患者的生存预测与治疗决策指导。

摘要：目的构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P<0.01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P<0.01)。结论成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应。