摘要：目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。

摘要：为了建立猪衣原体（Chlamydia suis ）实时荧光定量 PCR（real-time PCR）检测方法，根据猪衣原体（*** ）的 MOMP 基因，选取高度特异保守的区域，设计实时荧光定量 PCR 引物和探针，并构建了重组质粒。结果显示，该方法建立的标准曲线方程为：Y＝-3．2147x＋41．218，线性相关系数为0．9991，扩增效率为104．6％，最低检测量为1．7＆#215;102 copies ！μL。该检测方法特异性较好，与鹦鹉热亲衣原体、流产亲衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、牛羊亲衣原体、鼠衣原体无交叉反应。批内和批间重复试验的变异系数在0．458％～1．174％范围内，具有较好的重复性；与普通 PCR 方法相比较，该方法具有较高的检出率。建立对猪衣原体的监测和流行病学调查都具有非常重要的意义。

摘要：通过设计特异性引物建立基于猪博卡病毒（Porcine Bocavivus,PBoV）NP1基因的特异性PCR方法,从重庆地区猪血液中扩增出PBoV-NP1的部分基因片段,进行基因测序,并与GenBank公布的PBoV、HBoV及PPV基因序列进行生物信息学分析.结果显示：本次试验克隆得到的PBoV重庆株NP1部分基因片段大小为257 bp,与已公布的PBoV-NP1基因的同源性为97.3％～100％;重庆株与PBoV瑞典株、PBoV中国株属同一进化分支,且PBoV重庆株NP1基因与PBoV瑞典株NP1基因亲缘性非常接近;PBoV重庆株NP1基因与GenBank公布的猪PBoV-NP1和1个人HBoV st1聚在博卡病毒一大分支,与PPV分属两大分支,而HBoVst1株又单独形成另一簇.这表明,PBoV重庆毒株与国外毒株的亲缘性非常接近,推测重庆地区猪群中感染的PBoV可能是通过引进或者进口国外动物性产品而传播感染猪群.

摘要：为了提高变耦合系数型时栅感应信号的强度,选取其转齿和定齿间气隙宽度(A),定子齿宽(B),转子与定子齿宽比(C)和齿厚度(D)4个参数,采用水平正交表L16(45)采集16种不同参数组合的感应信号强度,对电磁仿真求解结果进行极差分析和方差分析。结果表明:最优结构参数组合A～D分别为0.300mm、1.500mm、4∶1、3.000mm,优化后感应信号强度提高16.1%;各参数影响信号顺序为:A>C>B>D,且A、C显著影响信号.该方法具有较强的工程实用价值。

摘要：为鉴别牛结节性皮肤病病毒野毒株(wild type lumpy skin disease virus,WT LSDV),本研究根据GenBank中发表的WT LSDV全基因组序列,设计并合成1对特异性引物和MGB探针,优化反应条件,建立了鉴别检测WT LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对WT LSDV核酸有特异性扩增,对LSDV疫苗株等其他病毒核酸无交叉反应;标准曲线在一定浓度范围内呈现良好的线性关系,标准曲线为y=-3.361 x+34.979,R^2>0.999,扩增效率为98.39%,最低检测限为4.6 copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于3%。对63份模拟临床样品的检测结果显示,本研究建立荧光定量PCR方法的阳性检出率为90.57%,OIE推荐的普通PCR方法的阳性检出率为64.15%,两种方法检测临床样品均为WT LSDV核酸阴性。结果表明,建立的WT LSDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速、重复性好,且能快速准确地检测WT LSDV,适用于临床样品的鉴别检测,为该病的鉴别、监测、防控提供了技术支撑。

摘要：为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。

摘要：为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(***)Taq Man-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据***主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了检测***的荧光定量PCR方法。结果表明,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.6×103拷贝/μL^1.6×107拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999。该方法仅对***的靶基因扩增呈阳性,而对鹦鹉热嗜衣原体、家畜嗜衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、猪源衣原体核酸扩增结果均为阴性,特异性强;其最低检出限为1.6拷贝/μL;组内和组间重复性试验变异系数均小于3%,具有良好的重复性。利用建立的方法和普通PCR方法同时对225份临床样品进行检测,结果显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高4.5%,表现较高的灵敏度和准确性。本研究建立的方法对***的临床鉴别检测和疾病诊断具有重要意义。

摘要：为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)和猪肺炎支原体(***)的多重PCR方法,分别针对PRRSV的ORF1a基因、PCV2的ORF2基因、APP的OMLA基因和***的P46基因的保守区域设计4对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了可同时扩增PRRSV(225bp)、PCV2(337bp)、APP(107bp)、***(176bp)相应基因的四重PCR方法。结果显示,该方法能单管同时特异地鉴别检测PRRSV、PCV2、APP、*** 4种病原体,对猪瘟病毒、副猪嗜血杆菌、猪呼吸道冠状病毒、猪流感病毒、猪细环病毒及猪细小病毒等无特异性扩增,说明该PCR具有良好的特异性;方法的灵敏度分别为195、272、241、321pg/μL。应用该方法对重庆市的61份样品进行检测,其中PRRSV、PCV2、APP、***的阳性率分别为22.9%(14/61)、18.0%(11/61)、8.2%(5/61)和18.0%(11/61)。该方法的建立为临床上4个病原的快速鉴别诊断提供了有力的技术手段。

摘要：为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。

摘要：本文介绍了基于串行EEPROM的CPU监控器X4043/45工作原理,讨论了它在小脑电刺激器系统中的应用,并给出了与单片机通讯的实用程序。