摘要：基于小规模限制性在线课程(small private online course,SPOC)的翻转课堂教学模式结合了线上线下教学的优势,已经广泛应用于医学教育领域。为了进一步提高医学检验专业学生的形态学检验能力,本研究在重庆医科大学2019级四年制医学检验技术专业和卫生检验与检疫专业共211名学生的临床基础检验学技术课程形态学教学中采用该教学模式。本文阐述了该教学模式在临床基础检验学技术课程形态学教学中的设计和实施过程,通过考试成绩和问卷调查评价教学效果。结果显示,2019级医学检验技术专业和卫生检验与检疫专业学生的形态学考试总评成绩分别为(83.22±1.63)分和(76.67±2.48)分,其均值分别比2018级2个专业学生的相关成绩[(76.39±0.69)分,(67.36±1.37)分]高了6.83分和9.31分;在回收有效问卷的198名学生中,190名(96.0%)学生认为该教学模式有助于形态学知识的巩固,143名(72.2%)学生认为其能够针对性地解决形态学学习中的难点,119名(60.1%)学生认为增强了他们的临床实践能力。基于SPOC的翻转课堂教学模式有助于学生对形态学知识的理解和掌握,进而培养了其自主学习能力,使其能够主动解决学习中的难点,增强其对细胞及其他有形成分的辨认能力,提高了该课程形态学的教学效果。

摘要：针对相关研究提出的在创新创业中如何结合学生专业知识、激发学生创新创业激情、营造创新创业氛围的问题,该文提出同伴教育结合项目发展(Peer education-Project development,PEPD)的创新创业教学新方法。结合前期PEPD在创新创业教学中的良好效果,分享PEPD的具体流程,剖析PEPD中必备的核心要素以及各个核心要素的作用,总结PEPD的优点和不足。

摘要：目的 设计合成4个苯氧乙酸类化合物,通过不同方法表征其对人谷胱甘肽-S-转移酶Mu(glutathione-S-transferase Mu, GSTM)的抑制性能,考察苯氧乙酸类化合物与GSTM之间的构效关系。方法 设计合成含α,β-不饱和酮结构的4-丙烯酰苯氧乙酰乙胺(Ⅰa)、N,N’-(4-(丙烯酰基)苯氧乙酰基)丁二胺(Ⅱa)和不含α,β-不饱和酮结构的4-丙酰苯氧乙酰乙胺(Ⅰb)、N,N’-(4-(丙酰基)苯氧乙酰基)丁二胺(Ⅱb),利用初速度法表征4个化合物对GSTM的半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC)和表观抑制常数(inhibition constant,K),利用荧光光谱法表征4个化合物对GSTM的解离常数(dissociation constant,K)。结果 含α,β-不饱和酮结构的Ⅰa、Ⅱa可与谷胱甘肽(glutathione, GSH)发生亲电加成反应,与酶和GSH孵育原位生成产物后,其对GSTM的IC分别为(67±6)μmol/L、(0.10±0.02)μmol/L (n=2);不含α,β-不饱和酮结构的Ⅰb、Ⅱb对GSTM无明显抑制作用。Ⅰa相对GSH的K为(19.9±1.6)μmol/L,相对CDNB的K为(9.1±0.7)μmol/L (n=3);Ⅱa相对GSH的K为(0.063±0.005)μmol/L,相对CDNB的K为(0.079±0.006)μmol/L (n=3);可见Ⅱa较Ⅰa的K低(P0.05),而Ⅱa较Ⅰa、Ⅱb较Ⅰb的K低(P<0.05)。结论 α,β-不饱和酮结构是苯氧乙酸类化合物抑制作用的必须官能团;二价抑制剂Ⅱa、Ⅱb较单价抑制剂Ⅰa、Ⅰb对GSTM具有更高亲和力,Ⅱa的产物较Ⅰa的产物抑制作用更强。

摘要：目的:构建并鉴定靶向人转录因子STAT3基因的shRNA慢病毒载体。方法:设计合成针对人STAT3基因的shRNA序列,运用基因重组技术将其插入到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pSicoR中,构建shRNA重组质粒pSicoR-STAT3-shRNA。经双酶切及DNA测序鉴定后,利用转染试剂X-tremeGENE HP将第3代慢病毒载体共转染至HEK293细胞进行病毒包装。以阴性载体为对照,用RT-PCR和Western blot分别检测STAT3基因和蛋白表达水平。结果:双酶切及测序证实载体构建正确,在HEK293中成功包装出高滴度慢病毒颗粒,感染HEK293后STAT3基因表达和蛋白质表达水平均较对照组明显降低(P<0.05)。结论:成功构建了靶向人STAT3基因的shRNA慢病毒载体。

摘要：目的探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响。方法针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状（shRNA）真核表达载体，转染K562细胞后用RT—PCR方法鉴定沉默效果。采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT—PCR，观察抑制IER3IP1基因表达后对1（562细胞的影响；采用0．2μmol／L伊马替尼诱导K562细胞2d，观察诱导分化过程中IER3IP1基因表达变化情况，抑制IER3IPl基因表达后对红系分化相关基因Gfi—1B、GPA和γ—globin以及细胞表面GPA蛋白表达的影响。结果成功构建针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体，转染至K562细胞中，该基因mRNA表达水平明显降低，抑制率达76％（P〈0．01）。与对照组细胞相比，K562-shRNA—IER3IP1组bcr—ablmRNA表达升高（P〈0．05）；MTT检测结果显示细胞增殖能力增强（P〈0．01）；流式细胞术检测结果显示S期细胞比例增加，G0／G1期细胞比例减少（P〈0．05）；电镜可见细胞常染色质增加、异染色质减少，内质网部分扩张，囊泡样结构滞留。0．2μmol／L伊马替尼作用48h后，K562-shRNA—IER3IP1组联苯胺染色阳性率由作用前的（44．7±2．5）％降低至（22．7±1．5）％（P〈0．01），且红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ—globin的mRNA表达水平明显降低，细胞表面GPA蛋白表达水平降低。同时伊马替尼作用过程中IER3IP1基因在作用3h时表达明显升高，6h时降低，12～48h表达水平基本不变。结论干扰IER3IP1基因表达后，K562细胞增殖加快，红系分化过程受阻，提示该基因可能在K562细胞增殖和向红系分化过程中发挥作用。

摘要：用前期设计并合成好的重组腺病毒质粒pAdsiALK2,经Pac I酶切后转染至HEK293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定,以重组腺病毒siALK2(AdsiALK2)感染MDA-MB-231细胞,以含RFP的腺病毒作为感染对照,并设空白对照组。通过RT-PCR验证MDA-MB-231细胞中ALK2表达显著下降;MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验证实MDA-MB-231/siALK2组相比MDA-MB-231/RFP组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P0.05)。该研究表明,下调ALK2表达后可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭。

摘要：目的建立快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,探讨其用于淋球菌感染早期诊断的可行性。方法利用Primer-ExplorerV3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计6条引物(2条内引物FIP、BIP,2条外引物F3、B3,2条环引物LF、LB),以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,同时,以外引物F3、B3为PCR引物,进行PCR扩增,并比较2种扩增方法的灵敏度和特异性。结果LAMP法与PCR法灵敏度相同,可检测到10个拷贝的目的基因;其针对淋球菌porA和16S rRNA基因的引物对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌的DNA均不能扩增。结论已成功建立了检测淋球菌porA和16S rRNA基因的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法。

摘要：目的构建靶向Y-box结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定其抑制率。方法设计并合成3对针对YB-1基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGenesil-1连接,构建3个重组质粒pGSi1、pGSi2和pGSi3,脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞中YB-1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果重组质粒pGSi1、pGSi2和pGSi3经酶切及测序证明构建正确;转染MDA-MB-231细胞后,YB-1基因在mRNA和蛋白水平的表达均降低,其中pGSi2的抑制效果最好,在mRNA和蛋白水平的抑制率分别为57.4%和90%。结论成功构建了靶向YB-1基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对YB-1基因有显著抑制作用的shRNA,为进一步研究YB-1对乳腺癌细胞侵袭、迁移和多药耐药性的影响奠定了基础。

摘要：目的：设计单纯疱疹病毒1型（HSV-1）诊断芯片的寡核苷酸（Oligo）探针;方法：利用BLAST软件对HSV-1的基因序列进行对比,得出对设计HSV-1探针有意义的特异序列,并通过生物学软件Oligo 6.0设计特异性高Tm值相近、长度均一的Oligo探针;结果：获得在相同的杂交、清洗条件下可得到最佳杂交效果的10条30-mer的Oligo探针;结论：通过生物信息学方法设计出HSV-1诊断芯片的探针,可为后期制备成基因芯片,为进行HSV-1的检测打下良好的基础。

摘要：目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HA标签的SH2基因重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体Ad5-hSH2mt-EGFP,并观察其对K562细胞增殖的影响。方法设计并化学合成引物,采用RT-PCR法扩增hSH2基因,重叠PCR法扩增hSH2mt基因,分别克隆至pAdTrack-CMV,构建穿梭质粒,经PmeⅠ酶切,转化感受态pAdEasy-BJ5183,在细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGPF和pAd5-hSH2mt-EGPF,PacⅠ酶切后转染AD293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,扩增病毒,测定滴度并经PCR和Western blot鉴定。重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测病毒对K562细胞增殖活性的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGFP和pAd5-hSH2mt-EGFP经酶切鉴定构建正确;重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP的滴度均可达1.6×1012;PCR结果表明,2种重组腺病毒包装和扩增成功,Western blot结果表明,重组腺病毒携带的目的基因能够在AD293细胞中表达;MTT检测证实,Ad5-hSH2-EGFP对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。结论已成功构建重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,Ad5-hSH2-EGFP能在体外明显抑制K562细胞的增殖,为进一步探讨SH2基因对慢性粒细胞白血病的治疗作用及其机制奠定了基础。