摘要：目的构建组蛋白乙酰化酶转录辅激活酶Gcn5基因表达的干扰shRNA质粒并初步检测其性质,为研究干细胞诱导分化过程中乙酰化修饰所起的调控作用奠定基础。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。脂质体共转染5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs),利用乙酰化酶特异性抗体Gcn5(H75)对转染细胞进行免疫化学检测,荧光显微镜图象分析系统,记数细胞,在同视野中记数转染阳性细胞以及干扰的阳性细胞,初步计算出其转染率和干扰效率。结果通过限制性内切酶酶切和DNA序列分析,重组质粒shRNA与设计相吻合;免疫细胞化学检测,发现转染阴性对照HK的细胞显现“饱满核”,乙酰化作用蛋白表达明显;转染shRNA质粒的细胞呈现十分明显表达减弱的“淡染核”或不表达的“空洞核”,转染率和干扰效率分别为93.7%和46.6%。结论构建的shRNA质粒能够达到干扰乙酰化作用的目的,为深入研究乙酰化作用奠定了一定的试验基础。

摘要：目的通过组蛋白乙酰化作用相关shRNA质粒转染5氮杂胞苷(5-azacytid ine,5-aza)诱导后不同时间段间充质干细胞心肌发育基因的检测,探讨乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence prote in,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。5-aza诱导大鼠间充质干细胞(m esenchym al stem cells,MSCs)24 h、2、4、7 d,分别用重组shRNA质粒脂质体共转染后提取RNA,逆转录PCR检测Gcn5基因和心肌早期发育基因GATA4的表达。结果经特异性限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定,质粒构建与设计符合;各个时间段对照组Gcn5和GATA4均有表达,而实验组却无相应表达。结论通过实验提示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化可以达到抑制干细胞特化心肌细胞转录过程的作用,这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定实验室基础。

摘要：背景血小板输注疗效影响临床诊疗效果及临床决策,目前缺乏针对急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的血小板输注后疗效的预测模型。目的构建及验证ALL患儿输注血小板后血小板校正计数增量(CCI)预测模型。设计回顾性队列研究。方法纳入2022年1月至2023年3月在重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤科初诊、初治的ALL住院患儿,以2022年12月31日为入院时间节点划分为建模组和验证组。采集可能影响血小板输注疗效的变量(性别、年龄、脾大或脾亢、出血等级、贫血程度、血小板储存天数、输血前使用药物、ALL形态学、危险度分组和治疗阶段等)进行单因素COX回归和Lasso回归分析,再行多因素COX回归确定最终预测因子,构建列线图预测模型,并对模型进行区分度和校准度的预测效能检测。主要结局指标输注血小板疗效CCI列线图模型的预测效能。结果研究期间133例247例次输注血小板病例纳入本研究,建模组198例次,验证组49例次,两组变量的基线差异均无统计学意义。最终纳入性别、年龄、ALL危险度分组、输注前白细胞数、脾大或脾亢、感染情况六个因子构建列线图预测模型。在建模组中,CCI为11.4(P_(25))、18.5(P_(50))和28.2(P_(75))时ROC曲线下面积(AUC)分别为0.783、0.695和0.654,在验证组中分别为0.765、0.714和0.580;校准曲线显示在建模组和验证组中CCI为11.4、18.5和28.2时模型预测发生率和实际发生率基本一致。结论成功构建ALL患儿血小板CCI预测模型;利用性别、年龄、输注前白细胞数、感染情况、ALL危险度分组、脾大或脾亢建立的列线图预测模型对ALL患儿血小板输注疗效具有较好的预测效能。

摘要：背景妊娠高血压不仅是孕妇围生期死亡的主要原因之一,而且可能会增加子代罹患心脑血管疾病的风险。目的探讨妊娠高血压对子代儿童期血压的影响。设计回顾性队列研究。方法使用2014~2016年在重庆地区已建立的6~12岁儿童队列,根据基线调查时对队列人群进行的问卷调查,将母亲患有妊娠高血压的6~12岁儿童定义为暴露组,以1∶4比例匹配(性别、年龄和BMI)母亲无妊娠高血压的儿童为非暴露组。体格检查由经过统一培训的重庆医科大学附属儿童医院的护士完成,血压和心率测量工具为欧姆龙(HEM7051)上臂式电子血压计,血压同日重复测量3~5次,取3次最相近的计算平均值,若血压超出正常范围,2~4周后重新测量,2次血压值均符合高血压诊断标准判断为高血压,分年龄别、性别别与身高别的收缩压与舒张压分别取P_(90)~<P_(95)为高血压前期,≥P_(95)为高血压。主要结局指标妊娠期高血压对子代儿童期高血压风险比值比(OR)。结果共纳入1630例儿童,平均年龄(9.1±1.7)岁,其中暴露组326例,非暴露组1304例。暴露组收缩压[(105.1±10.0)vs(103.5±9.7)]mmHg、舒张压[(64.2±7.6)vs(63.2±7.9)mmHg]均高于非暴露组,差异有统计学意义;暴露组和非暴露组高血压前期+高血压患病率分别为28.5%和21.9%,差异有统计学意义(P=0.012),高血压的患病率分别为16.9%和12.9%,差异无统计学意义(P=0.061)。多因素Logistic回归分析显示,校正年龄、性别、家庭收入、母亲肥胖、母乳喂养、出生体重、现体重、心率和是否肥胖等因素后,与非暴露组相比,暴露组儿童患高血压的相对风险增加66%(OR=1.66,95%CI:1.13~2.43)。结论母亲患有妊娠高血压会增加子代儿童期血压升高的风险。