摘要：目的利用二聚体蝎型荧光探针技术，建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品，自行设计二聚体蝎型探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果（1）成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3IR。（2）建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^7拷贝／μ1；灵敏度：10^1拷贝／μ1；重复性：批内变异系数（CV）为2．35％，批间CV为3．17％，日间CV为4．06％；特异性100％；（3）初步临床应用证明：该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高，检测时间更短和成本也明显降低。结论本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础。

摘要：目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。方法设计并合成STAT5decoyODNs、FAM荧光标记的decoyODNs和decoyODNs突变型(M-decoyODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoyODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C3种转染试剂对decoyODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72h时FAM-decoyODNs摄取率和荧光强度,检测decoyODNs的稳定性;MTT实验检测decoyODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoyODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响。结果退火缓冲液(10mmol/LTris,pH8.0,50mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA)更有利于decoyODNs双链形成。DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P98%。MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoyODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P<0.05);RT-PCR结果发现decoyODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P<0.05)。结论建立了decoyODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoyODNs转染K562细胞的效率;decoyODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT5靶基因的转录。

摘要：密度感应系统(quorumsensing,QS)是细菌的一种群体行为调控机制,它控制着细菌的多种生命活动,在医学、工业和农业上都有重要意义。微生物QS信号分子和信号传导机制的发现有利于研究设计出各种信号干扰方法来阻断QS信号传导从而应用于微生物感染的防治。文章综述了近年来有关QS信号干扰及其应用方面的研究进展。

摘要：肝细胞癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一，其发生、发展过程受诸多因素的影响。近年研究发现，信号转导和转录激活因子（STAT）具有强烈的抑制细胞凋亡，促进细胞增殖的作用，参与了人类恶性肿瘤的发生、发展和演变，其中以STAT3尤为活跃。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术，用短发夹样RNA（shRNA）设计并构建RNAi-DNA质粒，筛选稳定表达小干扰RNA（siRNA）的肝癌HepG2及SMMC-7721细胞株，体外研究siRNA稳定和特异性诱导肝癌STAT3基因转录后沉默并逆转其恶性表型的能力，从而探索肝癌治疗的新方法。

摘要：目的利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi与抑制肝癌细胞增殖的时-效关系.方法设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil-shR-NA-hTERT并导入肝癌SMMC-7721细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA-hTERT的细胞株.采用real-time RT-PCR、MTT和PCR-TRAP法同时检测pGenesil-shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理SMMC-7721细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化.结果在稳定表达pGenesil-shRNA-hTERT的SMMC-7721细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERTmRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制.结论RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mR-NA表达及肿瘤细胞增殖,是有潜力的基因治疗肿瘤新方法.

摘要：目的　研究MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活及其与E2 F1转录因子之间的关系。方法　以含ARF启动子基础转录调控区E2 F1结合位点野生型序列的W6重组质粒为模板 ,设计该片段中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的引物 ,用聚合酶链反应构建该区域中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的ZE、ZF、ZG重组质粒。再将W6、ZE、ZF、ZG重组质粒转染进Jurkat细胞 ,检测其荧光素酶报告基因的表达。结果　构建的ZE、ZF、ZG重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2 F1位点野生型重组质粒W6比较 ,突变型重组质粒ZE、ZF、ZG在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少 ,以E2 F1A位点突变的重组质粒减少明显。结论　构建ARF启动子E2 F1A、B、C结合位点序列突变的重组质粒成功 ;MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活可能与E2 F1转录因子的作用有关。

摘要：背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达。同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展。但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道。本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性。方法:设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT-PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化。结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,hTERT蛋白表达由86.3%下调到46.6%。裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99.1%下调到76.2%,hTERT蛋白表达由87.2%

摘要：背景：近年有学者提出高压氧对缺血再灌注损伤氧自由基的清除有正性作用，并能提高三磷酸腺苷合酶的活性，调节钠钙平衡，抑制钙内流，从而有效保护细胞，减轻缺血再灌注损伤。目的：从骨骼肌的病理和细胞因子改变角度，观察高压氧对不同时相肢体缺血再灌注的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-04/09在重庆医科大学实验动物中心完成。材料：健康SD大鼠108只，体质量250～300g。随机分为空白对照组12只、缺血再灌注组48只与高压氧组48只，雌雄对等。方法：空白对照组不做缺血再灌注；缺血再灌注组和高压氧组持续缺血8h，分别行再灌注0，4，24，72h。高压氧组造模后连续5d给予高压氧处理。主要观察指标：检测各组大鼠组织萃取液中自细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量：以大鼠腓肠肌制备电镜和光镜标本，观察其骨骼肌微血管超微结构和组织形态变化；结果：①再灌注后各个时点，高压氧组组织纤溶酶原激活物含量较缺血再灌注组均显著升高：白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量较缺血再灌注组均显著降低（P〈0．05）。②再灌注24h，与缺血再灌注组比较，高压氧治疗组骨骼肌细胞肿胀及炎性细胞浸润均较轻，微血管内几乎无微血栓形成，肌小节极少断裂，质膜较少破坏，少数线粒体肿胀，髓样结构形成。结论：损伤后72h之内高压氧对缺血再灌注肢体产生了较显著的保护作用，该作用可能与抑制炎症因子激活释放，促进纤溶系统激活有关。

摘要：目的以二聚体突变荧光引物技术为基础建立对沙眼衣原体进行定量检测的新方法。方法以沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因构建重组质粒作为DNA标准品,设计二聚体突变荧光引物,优化定量PCR体系并进行性能评价;同时对148例临床生殖道标本进行检测。结果建立的二聚体突变荧光引物的定量PCR方法,其线性范围为101～109 copies/μL,灵敏度为10 copies/μL;低浓度样品的批内变异系数(CV)为4.71%,批间CV为5.57%;高浓度样品的批内CV为3.20%,批间CV为3.66%;常见生殖道病原菌检测结果均为阴性;对确诊的148例患者标本检测准确率为99.32%。结论建立的沙眼衣原体定量PCR检测方法具有快速、准确、结果可靠等特点,可为沙眼衣原体感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持。

摘要：目的开发药物干扰检验结果信息的检索系统。方法以LOINC代码、临床检验项目分类与代码、国际疾病分类代码-10(ICD-10)、《药理学》作为基础数据标准化编码来源;收集近年来有关药物影响检验结果的文献,分析整理获取药物干扰信息数据,采用MicrosoftAccess2003建立信息数据库和Borland Delphi7.0程序设计开发检索系统。结果建立了信息检索系统,为临床提供一种信息检索工具。结论软件界面美观,操作简便,实用性强,可在临床广泛应用。