摘要：在多相分散体系的动力稳定性理论基础上,设计了以DEC-205单抗为导向、以脂质体为载体、DCs为靶点的免疫策略,将包裹药物的脂质体特异性地靶向树突状细胞(DCs).对影响DEC-205的免疫脂质体稳定性的各种因素如粒径分布等进行考察分析,对条件进行优化,构建了经DEC-205单抗靶向DCs的免疫脂质体模型.模型的成功构建为进一步研究抗原靶向DEC-205受体后的体内免疫应答情况提供了工作基础,有望开发一种新型DCs疫苗应用于临床.

摘要：目的构建ΔNp63特异性短发夹RNA(shRNA)的表达载体,探讨其在膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞中的作用。方法设计、合成ΔNp63特异性的短链寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1质粒载体中,构建ΔNp63特异shRNA表达载体,转染TCCB细胞；免疫组化S-P法检测ΔNp63蛋白表达水平,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ΔNp63 mRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性。结果经PstⅠ和SalⅠ双酶切和测序鉴定,成功构建ΔNp63-shRNA质粒表达载体,并能够成功转染TCCB细胞。转染后可显著抑制细胞中ΔNp63蛋白和mRNA的表达,其中ΔNp63 mRNA的表达抑制率为63．0%；G_0/G_1期细胞显著增加,为(66．38±3．08)%,S期细胞显著减少,为(33．68±2．06)%；细胞增殖活性明显降低。结论运用Pgenesil-1质粒载体构建的ΔNp63-shRNA表达载体可成功转染TCCB细胞,有效抑制ΔNp63蛋白和mRNA表达,并可调控TCCB细胞的细胞周期,抑制其增殖。

摘要：心率变异性信号的获取在生理研究和临床诊断中都有着重要的应用价值。为了保证心率变异性分析的准确性 ,必须考虑心率变异性的获取方法。本文利用信号奇异点及其小波变换的关系 ,设计了 HRV信号的 R波获取软件 ,对 MIT/BIH心电数据库中的 37个记录文件进行 R波的检测实验 ,检测实验效果令人满意。

摘要：目的利用二聚体蝎型荧光探针技术，建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品，自行设计二聚体蝎型探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果（1）成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3IR。（2）建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^7拷贝／μ1；灵敏度：10^1拷贝／μ1；重复性：批内变异系数（CV）为2．35％，批间CV为3．17％，日间CV为4．06％；特异性100％；（3）初步临床应用证明：该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高，检测时间更短和成本也明显降低。结论本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础。

摘要：目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。方法设计并合成STAT5decoyODNs、FAM荧光标记的decoyODNs和decoyODNs突变型(M-decoyODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoyODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C3种转染试剂对decoyODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72h时FAM-decoyODNs摄取率和荧光强度,检测decoyODNs的稳定性;MTT实验检测decoyODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoyODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响。结果退火缓冲液(10mmol/LTris,pH8.0,50mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA)更有利于decoyODNs双链形成。DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P98%。MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoyODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P<0.05);RT-PCR结果发现decoyODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P<0.05)。结论建立了decoyODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoyODNs转染K562细胞的效率;decoyODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT5靶基因的转录。

摘要：目的通过应用诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)抑制信号转导因子和转录激活因子5(signal transducers and ac-tivators of transcription5,STAT5)信号转导途径,观察对白血病K562细胞细胞周期的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外设计合成STAT5Decoy ODNs,在脂质体的介导下转染K562细胞,FCM检测细胞周期,用RT-PCR和Western blot方法检测STAT5下游基因细胞周期素D1(cyclin D1)和c-myc的表达。结果Decoy ODNs作用K562细胞24h后的细胞周期显示,S期细胞由(48.71±5.42)%减低为(31.94±2.35)%,G0/G1期细胞由(40.83±5.20)%增加为(61.39±2.18)%;而错配寡核苷酸(mutant ODNs)对细胞周期没有明显影响。RT-PCR实验和Western blot实验证实Decoy ODNs作用引起STAT5下游基因cyclin D1和c-myc mRNA和蛋白表达下调。结论STAT5Decoy ODNs能抑制细胞G1/S转换而影响细胞周期进程,其作用机制可能与Decoy ODNs下调STAT5下游cyclin D1和c-myc基因的表达有关。

摘要：目的　研究MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活及其与E2 F1转录因子之间的关系。方法　以含ARF启动子基础转录调控区E2 F1结合位点野生型序列的W6重组质粒为模板 ,设计该片段中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的引物 ,用聚合酶链反应构建该区域中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的ZE、ZF、ZG重组质粒。再将W6、ZE、ZF、ZG重组质粒转染进Jurkat细胞 ,检测其荧光素酶报告基因的表达。结果　构建的ZE、ZF、ZG重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2 F1位点野生型重组质粒W6比较 ,突变型重组质粒ZE、ZF、ZG在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少 ,以E2 F1A位点突变的重组质粒减少明显。结论　构建ARF启动子E2 F1A、B、C结合位点序列突变的重组质粒成功 ;MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活可能与E2 F1转录因子的作用有关。

摘要：背景：近年有学者提出高压氧对缺血再灌注损伤氧自由基的清除有正性作用，并能提高三磷酸腺苷合酶的活性，调节钠钙平衡，抑制钙内流，从而有效保护细胞，减轻缺血再灌注损伤。目的：从骨骼肌的病理和细胞因子改变角度，观察高压氧对不同时相肢体缺血再灌注的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-04/09在重庆医科大学实验动物中心完成。材料：健康SD大鼠108只，体质量250～300g。随机分为空白对照组12只、缺血再灌注组48只与高压氧组48只，雌雄对等。方法：空白对照组不做缺血再灌注；缺血再灌注组和高压氧组持续缺血8h，分别行再灌注0，4，24，72h。高压氧组造模后连续5d给予高压氧处理。主要观察指标：检测各组大鼠组织萃取液中自细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量：以大鼠腓肠肌制备电镜和光镜标本，观察其骨骼肌微血管超微结构和组织形态变化；结果：①再灌注后各个时点，高压氧组组织纤溶酶原激活物含量较缺血再灌注组均显著升高：白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量较缺血再灌注组均显著降低（P〈0．05）。②再灌注24h，与缺血再灌注组比较，高压氧治疗组骨骼肌细胞肿胀及炎性细胞浸润均较轻，微血管内几乎无微血栓形成，肌小节极少断裂，质膜较少破坏，少数线粒体肿胀，髓样结构形成。结论：损伤后72h之内高压氧对缺血再灌注肢体产生了较显著的保护作用，该作用可能与抑制炎症因子激活释放，促进纤溶系统激活有关。

摘要：目的利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi与抑制肝癌细胞增殖的时-效关系.方法设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil-shR-NA-hTERT并导入肝癌SMMC-7721细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA-hTERT的细胞株.采用real-time RT-PCR、MTT和PCR-TRAP法同时检测pGenesil-shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理SMMC-7721细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化.结果在稳定表达pGenesil-shRNA-hTERT的SMMC-7721细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERTmRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制.结论RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mR-NA表达及肿瘤细胞增殖,是有潜力的基因治疗肿瘤新方法.

摘要：密度感应系统(quorumsensing,QS)是细菌的一种群体行为调控机制,它控制着细菌的多种生命活动,在医学、工业和农业上都有重要意义。微生物QS信号分子和信号传导机制的发现有利于研究设计出各种信号干扰方法来阻断QS信号传导从而应用于微生物感染的防治。文章综述了近年来有关QS信号干扰及其应用方面的研究进展。