摘要：目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)不同靶区发夹样RNA(shRNA)抑制HBV复制与表达的效率。方法根据shRNA表达载体设计原则,设计并构建了针对HBV P、C、S和X区7种特异性和2种序列突变的shRNA表达载体,将其与1．3倍HBV全基因表达载体共转染于HepG2细胞,通过Southern blot和酶联免疫吸附法分别检测HBV DNA复制中间体和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平,来观察shRNA抗HBV复制与表达的效率。结果发现针对HBV不同靶区shRNA均有抗HBV复制和表达效果,以P1、S2、C2、S1和X抑制HBV DNA复制效率较高,P1的抑制率高达95％。HBsAg表达受抑制情况与HBV DNA复制受抑制的程度相似,其中C2、C1和S2对HBsAg的抑制作用较强。结论针对HBV四个开放性读码框进行RNA干扰对HBV复制和抗原表达均有抑制作用,其中P1和C2分别对HBV复制和表达的抑制效率较高。

摘要：本文将Dicer基因的RNA酶III结构域作为靶区,设计并构建了两个抗Dicer基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,将其转染2215、结肠癌TC细胞和基因组中整合有绿色荧光蛋白基因(GFP)的HepG2A9细胞,通过RT-PCR评价RNA干扰抑制Dicer基因表达的效率;当HepG2A9细胞Dicer基因表达被上述RNA干扰抑制时,再转染抗GFP的shRNA表达载体,通过RT-PCR和荧光显微镜观察GFP表达水平。结果显示,在不同细胞系中,这两个抗Dicer基因shRNA表达载体,均能明显抑制Dicer基因的表达;当Dicer基因受抑时,后续转染抗GFP的shRNA表达载体不能有效抑制GFP的表达。结果表明,抗Dicer基因shRNA表达载体,能够明显抑制Dicer基因的表达;shRNA表达载体的功能发挥需要Dicer酶的直接参与。

摘要：细菌核糖体是一种主要的抗生素靶标,许多抗生素通过阻断细菌核糖体蛋白合成发挥它们的抗菌作用。核糖体结构的解析为抗生素结合位点提供分子基础。晶体结构数据解释许多生物化学及遗传表型,包括药物的抑制效应,联合用药以增加或减少各自的结合,核糖体组分改变导致细菌耐药。细菌核糖体与天然产生的抗生素及其衍生物复合物晶体结构的解析为抗生素作用机制提供重要基础,且有利于设计有效的抗生素靶向多药物耐受细菌。本文将从结构生物学讨论核糖体靶向抗生素的作用机制以及细菌耐药的分子机制,这将为开发新药物靶向细菌核糖体蛋白合成提供重要线索。