摘要：目的:系统评价云芝糖肽配合化疗对恶性肿瘤患者生活质量、血液系统及免疫功能的影响。方法:计算机检索MEDLINE、Pubmed等数据库。按Cochrane评价标准严格评价文献,纳入高质量研究。结果:共纳入7个研究,701例患者。Meta分析结果示:云芝糖肽具有一定改善恶性肿瘤病人化疗后生活质量的作用。云芝糖肽联合化疗药物组在改善白细胞、血红蛋白、血小板方面与单纯使用化疗药物或鲨肝醇联合化疗药物组之间无明显差异。云芝糖肽联合化疗药物组可提高CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值,而NK细胞无明显差异。结论:云芝糖肽配合化疗治疗恶性肿瘤有一定的疗效。但鉴于本系统评价纳入的研究大多质量低下,有必要进行更多的质量高、设计严谨、多中心的随机对照试验。

摘要：目的:利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除Lrtm1(leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1)基因的C2C12细胞系,为研究Lrtm1基因的作用提供实验基础。方法:设计3对针对Lrtm1基因的向导RNA(sgRNA),将sgRNA插入载体pCRISPRLvSG06中;利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pCRISPR-LvSG06;将病毒感染C2C12细胞,并加入嘌呤霉素筛选,将筛选嘌呤霉素阳性的细胞提取RNA,逆转录成c DNA;设计Cas9引物,利用cDNA为模版,PCR验证C2C12细胞中Cas9的表达,确认慢病毒成功感染C2C12细胞;利用96孔板挑选单克隆细胞的方法筛选得到单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序Lrtm1基因相关序列并与野生型Lrtm1基因进行对比,确认敲除成功的克隆细胞株;诱导敲除Lrtm1稳定细胞株成肌分化,检测成肌分化标志因子Myosin的蛋白表达,RT-PCR检测转录因子PAX7的mRNA表达,Western blot检测H3K27me3蛋白水平。结果:测序结果显示向导RNA(sgRNA)成功插入载体质粒;将单克隆细胞DNA测序结果显示A和C克隆成功敲除Lrtm1基因;敲除Lrtm1基因后成肌分化标志因子Myosin蛋白表达降低,成肌转录因子PAX7 mRNA的表达降低,在分化72和96 h组,H3K27me3蛋白水平较野生型组增高。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功敲除Lrtm1基因,稳定敲除Lrtm1基因的C2C12细胞系构建成功;敲除Lrtm1后能抑制C2C12细胞成肌分化,并且抑制成肌转录因子PAX7的m RNA表达,PAX7mRNA表达降低的原因可能为H3K27me3水平增高。

摘要：目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

摘要：目的构建靶向抑制骨形态发生蛋白BMP4基因RNA的siRNA腺病毒,为进一步研究其在乳腺癌骨转移中的作用打下基础。方法以PCR扩增获得BMP4全长片段,插入筛选质粒pSOS载体,同时设计6段靶向BMP4基因RNA的干扰片段,分别经酶切、连接及鉴定后获得pSOS-sirBMP4。脂质体转染293细胞,根据荧光表达量筛选获得干扰效率较高的4个干扰片段,插入穿梭质粒pSES-HUS,经重组、HEK-293细胞包装获得BMP4-siRNA腺病毒。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,RT-PCR、Western blot检测其干扰效率。MTT法检测其对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果筛选获得4个干扰效率较高的片段,插入穿梭质粒,经重组、包装获得腺病毒pAd-sirBMP4。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,明显抑制BMP4的表达并促进MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建具有较高干扰效率的腺病毒pAd-sirBMP4,为进一步研究BMP4在乳腺癌中的作用打下基础。

摘要：背景：既往对损伤骨骼肌的处理主要是修复肌膜及肌外神经。目的：实验拟观察肌内神经对损伤股直肌的修复作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验。组织学观察，于2006-09／2007-08在重庆医科大学动物实验中心完成。材料：新西兰大白兔20只，体质量2．0～2．5kg，右侧股直肌用于制备骨骼肌损伤模型，左侧股直肌作为对照。方法：20只大白兔随机数字表法分为2组。肌内神经完整组采用不全离断方式，在神经入肌点以远4．0～5．0mm处横断股直肌而保留肌内神经完整，肌内神经断裂组采用完全离断方式在神经入肌点以远4．0～5．0mm处横断股直肌及肌内神经。主要观察指标：①术后28周测量股直肌的湿重、股直肌等长收缩力的变化。②苏木精-伊红染色观察股直肌形态变化，Masson三色染色观察纤维化程度，肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色及还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶染色区别肌纤维的类型，并计算肌纤维横断面面积。结果：①与对照侧相比，肌内神经断裂组实验侧股直肌湿重下降，等长收缩力下降（P〈0．05）。②与对照侧相比，肌内神经完整组Ⅰ型、Ⅱa型肌纤维横断面面积恢复较佳。Ⅱb型肌纤维较差（P〈0．05），各型肌纤维构成比例基本恢复；肌内神经断裂组Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型肌纤维横断面面积均恢复较差（P〈0．05）。结论：肌内神经能够促进损伤骨骼肌的肌纤维再生，减轻肌肉萎缩及纤维变性，恢复肌纤维的正常形态及组成方式，从而促进损伤骨骼肌的恢复。

摘要：背景:新近研究表明骨水泥诱导成骨能力较差、在体内降解过慢,其单独应用的效果并不理想。因此,需要对其进行改型,希望研制出一种能克服上述缺点的新型材料运用于临床。目的:观察脱钙骨基质颗粒、丙烯酸树脂骨水泥复合物填充修复股骨骨缺损的能力,从而确定该复合材料的最佳配方。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/09在重庆医科大学动物实验中心完成。材料:将脱钙骨基质颗粒和丙烯酸树脂骨水泥按不同质量比例(2∶8,3∶7,4∶6,5∶5,6∶4)构成复合材料。方法:在新西兰大白兔双侧股骨制备骨缺损填充模型,将各比例复合材料植入骨缺损处,以单纯丙烯酸树脂骨水泥材料作为对照。主要观察指标:对复合材料和单纯材料进行扫描电镜观察及生物力学测试。在术后4,8,12周时进行大体标本观察、组织病理学、X射线片观察,比较其修复填充骨缺损的能力。结果:脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比在3∶7～6∶4的范围内,复合材料中存在较多100μm以上的裂隙,当质量比小于3∶7时,材料内部的大部分间隙<100μm,质量比大于6∶4时两种材料不能有效地凝固在一起。随质量比的增加,材料抗压极限强度递减,各组数据经方差分析,差异具有显著性意义(P<0.05)。在各时间点大体标本观察、组织病理学、X射线片观察显示骨缺损填充部位均有不同程度新骨形成。12周时脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比在4∶6时骨结合率最高。结论:随着脱钙骨基质颗粒质量比的增加,孔隙越丰富而材料力学强度逐渐降低。脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比为4∶6时修复低承重部位松质骨的骨缺损效果较好。

摘要：目的通过活体动物实验测试自行设计研发的64晶阵心腔内超声(ICE)换能器的性能。方法将导管化ICE换能器送入犬左心室,观察ICE声像图,测量心室壁、室间隔及乳头肌厚度,比较测量值与实测值的差异;建立犬急性心肌梗死模型,通过ICE评估室壁运动。结果此ICE换能器导管化后外径为8F,可于在体条件下清晰显示犬心腔内的细微结构,精确测量心室壁、室间隔及乳头肌厚度,所测参数与实测值差异无统计学意义(P均>0.05);建立犬心肌梗死模型后,ICE测量显示左心室前壁心肌收缩末期厚度、增厚率、最大搏幅均显著下降(P均<0.05)。结论此64晶阵心腔内超声ICE换能器尺寸满足介入操作要求,成像性能较好。

摘要：背景:阿仑磷酸钠是新一代的二磷酸盐,属第2代骨质疏松药,临床上广泛用于治疗骨吸收增加类疾病。目的:观察阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及护骨素(OPG)mRNA表达的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-11/2008-03在重庆医科大学基础研究所完成。材料:成骨细胞来源于手术中取得的松质骨骨块;阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司生产,批号:06130。方法:在含1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5,1×10-4mol/L不同浓度的阿仑磷酸钠培养液中培养成骨细胞,以不加阿仑磷酸钠培养为对照。主要观察指标:①成骨细胞观察。②以四甲基偶氮唑盐检测阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖的影响。③以半定量反转录-聚合酶链反应方法观察不同浓度阿仑磷酸钠对成骨细胞表达OPG/RANKLmRNA的影响。结果:1×10-5,1×10-4mol/L的阿仑磷酸钠抑制成骨细胞增殖,1×10-9～10-6mol/L的阿仑磷酸钠促进成骨细胞增殖,其中1×10-8mol/L的阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖作用最强。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性降低RANKLmRNA表达,干预72h,1×10-5mol/L抑制作用最大(P<0.01)。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性增加护骨素mRNA表达,干预72h,1×10-6mol/L增加作用最明显(P<0.01),而1×10-5mol/L时又减低。结论:阿仑磷酸钠能使成骨细胞增殖,1×10-8mol/L浓度增殖作用最强,其可能通过调节OPG/RANKLmRNA表达而影响骨代谢。

摘要：目的静脉血栓栓塞患者的个性化治疗与其良好的预后密切相关,而治疗方案的正确制订迫切需要精准的诊断,由于四氧化三铁和聚乳酸羟基乙酸良好的生物安全性,本研究设计了四氧化三铁-聚乳酸羟基乙酸-五肽(Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA)纳米探针(nanoprobe,NP),通过靶向纤维蛋白去提高血栓的检测能力。材料与方法通过双乳化法和碳二亚胺法制备Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA纳米探针,检测其理化特性;用T2WI及T2 mapping序列对Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA纳米探针进行体外MRI,分析纳米探针浓度与T2弛豫率的相关性;采集大鼠静脉血制作冰冻切片,分别与Fe_(3)O_(4)-PLGA/DiI-CREKA NPs(靶向组)、Fe_(3)O_(4)-PLGA/DiI NPs(非靶向组)孵育,经倒置荧光显微镜观察不同纳米探针对血栓的靶向性;细胞上验证探针的安全性后,在SD大鼠的颈静脉建立静脉血栓模型,尾静脉分别注射Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA NP(靶向组)、Fe_(3)O_(4)-PLGA NP(非靶向组),经T2WI和T2 mapping序列扫描后采集数据;同时收集主要器官,通过H&E染色验证纳米探针的安全性。结果本研究成功制备出粒径为(255.3±56.0)nm的Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA纳米探针,其表面电位为(-18.90±5.84)mV;TEM结果显示该纳米探针为均匀球体,分散性良好;具备增强MR信号的能力;与非靶向组纳米探针比较,靶向组纳米探针可很好地靶向静脉血栓,并具备良好的生物安全性;非靶向组打药前、打药后;靶向组打药前、打药后的T2弛豫率分别为(17.33±2.25)s^(-1)、(49.00±6.66)s^(-1)、(19.00±3.90)s^(-1)、(72.83±6.68)s^(-1)。结论本研究制备的Fe_(3)O_(4)-PLGA-CREKA纳米粒具备良好的生物安全性和MRI能力,对静脉血栓有较高的特异性,有望为静脉血栓栓塞诊疗提供有效的帮助。

摘要：目的利用RNAi技术干扰耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的BCRP(乳腺癌耐药蛋白)基因的表达,观察MCF-7/ADR细胞BCRP的mRNA变化,BCRP蛋白的表达以及对阿霉素耐药性的变化。方法设计3条不同(BCRP1,BCRP2,BCRP4)的RNA干扰链,构建出pGenesil-BCRP-EGFP(绿色荧光蛋白)质粒,设立对照组,空白质粒(HK)组及RNAi干扰组进行实验。半定量RT-PCR检测不同组的BCRP的mRNA水平,Western-blot检测不同组的BCRP蛋白的水平,MTT法分析RNAi干扰组药敏性变化。结果RT-PCR和Western-blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制,以BCRP1组干扰效果明显,明显弱于其他组。MTT比色法结果显示:BCRP1组对阿霉素的药物敏感性明显提高,与对照组差异有显著性(P<0.05)。结论RNAi能抑制BCRP基因转录和翻译水平的表达,其中以BCRP1的干扰效果明显,能明显提高MCF-7/ADR对阿霉素的药物敏感性。