摘要：背景:间充质干细胞具有多向分化能力,在体外能诱导分化为上皮细胞,而胚胎原始消化管上皮的分化受肠壁间充质的诱导。肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞,尚不明确。目的:观察胎儿肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞。设计:体外培养,对比观察。单位:实验于2004-07/2006-07在重庆医科大学组织胚胎学教研室完成。材料:表皮生长因子为Sigma公司产品;CK,CK20为中山生物有限公司产品。收集四五个月流产胎儿标本6例的四肢骨髓,Ficoll离心,分离、培养、扩增获取骨髓间充质干细胞。取胎儿十二指肠乳头以下肠段,剥去肌层和外膜,酶消化去除上皮,剪成约15 mm×5 mm的组织块。胎儿标本由临床学院妇产科提供,产妇同意提供胎儿用于实验,实验经医院伦理委员会批准。方法:实验分4组进行:干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组分别将DAPI标记的第3代骨髓间充质干细胞(3×104)个移植于肠壁结缔组织块的黏膜下层表面;干细胞组和干细胞+表皮生长因子组为骨髓间充质干细胞爬片;其中干细胞移植+表皮生长因子组和干细胞+表皮生长因子组加入终浓度为10μg/L表皮生长因子;4组均体外培养12 d。主要观察指标:①用荧光显微镜观察DAPI标记的骨髓间充质干细胞的形态及分布。②干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组组织块培养12 d后,采用苏木精-伊红染色观察与荧光显微镜观察同一肠壁结缔组织表面细胞形态。③免疫组化染色检测标记细胞CK及CK20的表达,以及肠壁结缔组织是否表达表皮生长因子。④高碘酸-希夫反应(PAS反应)检测DAPI标记细胞与结缔组织间有无基膜样物质产生。结果:①荧光显微镜下干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组的组织块表面均有DAPI标记的荧光阳性细胞,苏木精-伊红染色显示该部位细胞呈上皮样形态,而且在培养时经多次换液未被洗去为长在结缔组织表面的细胞。②免疫组织化学染色显示两组组织块表面的细胞均可表达CK及CK20。③免疫荧光染色显示组织块表面的细胞同时有标记细胞核的DAPI蓝色荧光与标记CK的红色荧光,表明DAPI标记的骨髓间充质干细胞已经分化为上皮细胞。④干细胞组细胞CK及CK20阴性,而干细胞+表皮生长因子组则为阳性,提示表皮生长因子有诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的作用。⑤PAS反应显示在标记细胞与结缔组织之间有基膜样结构糖蛋白出现。未经培养的结缔组织组织块内有表皮生长因子表达。结论:表皮生长因子和胎儿肠壁结缔组织在体外均能诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞;肠壁结缔组织中的表皮生长因子可能是结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的因素之一。

摘要：背景:造血生长因子可分别作用于不同的造血细胞和细胞的不同分化阶段。红细胞生成素可促进晚期红系祖细胞的增殖分化,白细胞介素3为多潜能集落刺激因子,对多种造血细胞的分化成熟具有促进作用。目的:观察细胞因子的不同组合及人参总皂苷对CD34+细胞体外定向诱导分化为红系血细胞的影响。设计:观察对比实验。单位:重庆医科大学。材料:实验于2002-07/2004-01在重庆医科大学组织胚胎学教研室、基础医学研究所、重庆市生物化学与分子药理学重点实验室完成。正常人骨髓细胞来自第三军医大学大坪医院胸外科无血液系统疾病患者手术摘除的肋骨,所有患者知情同意。人参总皂苷和试剂由重庆中药研究所惠赠。胎牛血清、FITCCD34+抗体、FITC标记同型对照小鼠IgG1为BectonDickinson公司产品,CD71+抗体为SantaCruz公司产品,血小板生成素、Flt-3配基、干细胞因子、白细胞介素-3为SantaCruz公司产品,红细胞生成素为Amgen公司。方法:应用阴性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞。经造血细胞因子不同组合(白细胞介素3+红细胞生成素、干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素、Flt-3配基+血小板生成素+干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素)进行液体培养,并以干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素为对照组,在其中加入终浓度分别为10,20,50,70,100mg/L人参总皂苷为加药组,检测细胞总数、CD71+细胞比例;在CD34+细胞培养体系中加入不同剂量的人参总皂苷(剂量同前)为药物组,以不加人参总皂苷为对照组,通过甲基纤维素半固体培养法检测人参总皂苷诱导CD34+造血干/祖细胞向红系祖细胞(早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞)增殖与分化能力。主要观察指标:①不同的细胞因子组CD34+细胞体外增殖情况。②人参总皂苷对CD34+细胞定向诱导分化为红系血细胞的影响。③人参总皂苷对CD34+细胞形成红系祖细胞能力的影响。结果:①各因子组合中以Flt-3配基+血小板生成素+干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素细胞因子组合诱导CD34+细胞分化为红系血细胞的能力最强,2周时CD71+细胞比例为(61.20±5.31)%。②人参总皂苷20mg/L是液体培养诱导CD34+细胞向红系分化的最佳浓度,与干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素协同作用CD34+细胞2周后,CD71+细胞比例从(48.39±5.07)%增加到(56.20±1.40)%。③人参总皂苷10～50mg/L均能提高CD34+细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率。结论:含有Flt-3配基+血小板生成素+干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素的细胞因子组合,可诱导CD34+细胞定向生成大量的红系细胞;人参总皂苷能促进CD34+细胞定向诱导分化为红系血细胞。

摘要：背景：研究证实多数造血生长因子通过JAKs-SWATs途径转导信号，调节血细胞的增殖与分化。人参总皂苷能够促进早期的造血干，祖细胞向红系细胞分化，具有类似造血生长因子的功效，在红系血细胞发生中造血细胞膜表面红细胞生成素受体起着关键性的作用。目的：通过红细胞生成素及其受体介导的JAK2／STAT5信号转导途径，分析人参总皂苷定向诱导红系血细胞发生的分子机制。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006—05，2008—10在在重庆医科大学基础医学研究所、组织胚胎学教研室完成。材料：脐血细胞来源于正常足月妊娠产妇分娩脐带血，由重庆医科大学第一附属医院提供。人参总皂苷由重庆中药研究所惠赠，纯度95％以上，添加MI-1640培养液配成1g/L的工作液。方法：①集落形成实验：取5×10^6L^-1脐血单个核细胞，添加含马血清的RPMI-1640培养液，10，25，50，75，100mg／L人参总皂苷组分别加入对应终浓度的人参总皂苷，并设立空白对照组。在96孔板上培养，0．2mL/孔，14d计数早期红系祖细胞，6d计数晚期红系祖细胞。②取脐血单个核细胞悬液100uL（5×10^8L^-1），进行MTT检测。（3）分别将0，25，50，100mg／L人参总皂苷与脐血造血细胞1×10^9L^-1共培养24h，进行Westemblot检测。④取脐血造血细胞1×10^9L^-1，对照组加入含体积分数为10％马血清的RPMI-1640培养液，人参总皂苷组在常规培养体系中加入终浓度25mg／L人参总皂营。分别用5U／mL红细胞生成素诱导0，2，5，30min后终止反应，进行免疫沉淀检测。主要观察指标：人参总皂苷刺激红系造血祖细胞增殖的能力，红细胞生成素对脐血细胞增殖的影响，人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响，JAK2、STAT5蛋白酪氨酸磷酸化情况。结果：10～75mg/L人参总皂营均能提高脐血细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率，以25mg/L提高幅度最为明显。2—50U/mL红细胞生成素均能促进脐血细胞的增殖，以5U/mL促进增殖效果最为明显。0—100mg/L人参总皂苷作用脐血细胞24h后，红细胞生成素受体的表达无明显变化。人参总皂苷作用造血细胞24h后，加入红细胞生成素继续刺激0～***2和SWAT5的酪氨酸磷酸化程度均明硅增强。结论：人参总皂苷在促进造血细胞增殖的过程中，尽管对造血细胞红细胞生成素受体的表达无明显影响，但可能通过在红细胞生成素受体介导的信号转导过程中增强JAK2和SWAT5的酪氨酸磷酸化程度发挥作用。

摘要：目的探讨芒果苷(mangiferin,MA)对高果糖引起的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)肾间质纤维沉积的影响及其可能的机制。方法 24只SHRs按随机单位组设计分组法分为对照组、果糖组、果糖+低剂量芒果苷(5 mg/kg)组和果糖+高剂量芒果苷(15 mg/kg)组。实验周期为7周,7周末处死大鼠,取血浆、肾脏组织。检测血浆葡萄糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)和肾组织甘油三酯含量,Masson染色后半定量评估肾间质纤维沉积的程度,Real-time PCR检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、CD68、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白α-Ⅳ链[collagen alpha-4(Ⅳ)chain,col4a4]、转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator,u PA)mRNA的表达,免疫组化检测肾脏u PA、PAI-1蛋白表达水平。结果与对照组比较,果糖组SHRs肾间质胶原纤维沉积率显著增加(P<0.01),而芒果苷(15 mg/kg)明显减轻果糖引起的SHRs肾间质胶原纤维沉积(P<0.05)。各组肾脏甘油三酯含量没有变化;肾组织MCP-1、CD68、α-SMA、col4a4、TGF-βmRNA也没有明显变化,但芒果苷(15 mg/kg)明显逆转果糖引起的u PA/PAI-1 mRNA比值的降低(P<0.05),同时降低高果糖引起PAI-1蛋白表达水平升高。结论芒果苷能改善高果糖所致SHRs肾脏间质纤维沉积,其机制可能与调控肾组织PAI-1、u PA有关。

摘要：通过组织胚胎学多媒体教学实验室的改造和教学软件制作的设计、实施和完成,以及使用后的效果的分析,探讨了改进组织胚胎学实验课的教学手段,对于提高教学效率,保证教学质量,培养学生独立学习、观察分析的能力的作用.

摘要：我国医学研究生培养一般分为科研型和临床型两种模式.我校基础专业科研型研究生的培养计划中包括3个方面:一是通过学位课程的学习,提高基础理论水平;二是通过完成科学文献的查阅,科研课题的设计、实施,撰写论文和答辩等,培养其科学研究的能力;三是要求研究生参加专业教学的全过程,完成一定学时的实验教学任务,培养他们的组织协调能力、教学表达能力.