摘要：目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景,尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生殖细胞的方法,拟搭建稳定高效的原始生殖细胞培养平台。方法：实验于2006-10/2007-08在重庆医科大学组织胚胎学教研室重庆市生物化学分子药理学重点实验室完成。①实验材料：清洁级昆明孕鼠由重庆医科大学动物实验中心提供,见阴栓计为0.5d胚龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胚龄8．5d胎鼠尾端尿囊及周围组织，取胚龄9．5～10．5d胎鼠后肠及周围组织，取胚龄11．5d，12．5d胎鼠生殖嵴及周围组织，分别经0．25％胰酶一0．02％EDTA消化并接种于0．1％明胶包被的培养皿中。比较不同妊娠时间点取材对原代、F1代胚胎生殖细胞克隆形成的影响。采用SSEA-1免疫组织化学法计数细胞阳性率，计数胚胎生殖细胞克隆联合MTT法比较胚龄11．5d，12．5d两个时间点原始生殖细胞的增殖能力。比较上述两种取材培养方法对胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞扩增的影响。采用碱性磷酸酶染色、免疫组化检测SSEA一1、免疫荧光检测Nanog，体外分化实验鉴定分化能力。结果：①胚龄11．5d，12．5d胎鼠原代和F1代集落形成率较胚龄8．5～10．5d高，扩增效率显著提高（P〈0．01）。②免疫组织化学法检测分离的胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞SSEA-1阳性率差异不显著（P〉0．05）。原代第3天克隆计数显示，胚龄11．5d胎鼠高于12．5胚龄胎鼠（P〈0．01），MTT数据显示11．5胚龄组稍高于12．5胚龄组。③两种方法对胚龄11．5d，12．5d胎鼠胚胎生殖细胞集落形成无显著性差异（P〉O．05），但生长方式有所不同。④克隆胚胎生殖细胞呈典型的胚胎干细胞样集落生长，能稳定传代；碱性磷酸酶、SSEA-1、Nanog表达强阳性：体外能分化为囊状类胚体。结论：胚龄11．5d和12．5d胎鼠，尤其是胚龄11．5d胎鼠扩增原始生殖细胞效率较高，在这两个时间点运用与周围组织共培养法和生殖嵴分离培养法均适宜。

摘要：熔蜡箱是组织浸蜡不可缺少的设备.目前常用的熔蜡箱仍然是Lillic和Fuller介绍的电热恒温箱或带水套的电热恒温箱,甚至是靠灯泡加热的简陋装置.作者认为这些溶蜡箱有如下不足:(1)蜡熔化慢;(2)温度控制不好(空气传递温度慢,箱壁与箱室温差约10℃);(3)操作和观察不方便(需打开箱门操作,造成箱内热量散失.);(4)不便安装真空浸蜡装置.为改进上述不足,我们设计了一种简易水浴熔蜡箱(附图).1 材料和方法1.1 材料(1)电热恒温水温箱:温度范围37℃～65℃(上海医疗器械七厂制造,HH·W 21·Cu600型,功率500瓦,温度波动1℃,内径60×30×19cm).(2)泡沫板:2～3cm厚.(3)蜡杯:服药量杯、搪瓷杯、烧杯、金属杯都可,但边口缘约大.杯的容量40～100 ml.真空蜡杯作者用的是立式5片染色缸(去掉底边).1.2 方法 用刀将泡沫板切割成与水浴表面形状大小的板快.

摘要：背景:国内外研究发现人参皂苷及其单体在抑制白血病细胞增殖、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等方面均有疗效,目前主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究,涉及慢性白血病的报道非常少。目的:探讨人参皂苷单体Rb1,Rg1对人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2009-03在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室和眼科实验室完成。材料:K562细胞由重庆医科大学临床检验系提供。纯度为98.6%的人参皂苷单体Rb1,Rg1由南京艾斯替么中药研究所提供。方法:取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108L-1,空白对照组予以常规培养;人参皂苷单体Rb1组分别加入20,40,80,160μmol/L的Rb1;人参皂苷单体Rg1组分别加入5,10,20,40,80μmol/L的Rg1。主要观察指标:MTT比色法、锥虫蓝拒染法检测K562细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果:人参皂苷单体Rb1,Rg1在体外对K562细胞增殖均有明显的抑制作用,在20～160μmol/LRb1和5～20μmol/LRg1浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,且均在作用48h时抑制率达高峰。与空白对照组比较,体外培养48h后160μmol/LRb1组细胞周期分布无变化;20μmol/LRg1组S期细胞比例明显增加(P<0.05),G1期细胞比例明显下降(P<0.05),且160μmol/LRb1组、20μmol/LRg1组均未出现"亚二倍体"峰。结论:人参皂苷单体Rb1,Rg1均可抑制K562细胞增殖,Rg1增殖抑制作用可能是通过将K562细胞阻滞于S期而实现的,而Rb1的增殖抑制作用与细胞周期的关系有待进一步分析。

摘要：背景:信号传导及转录活化因子3(signaltransducerandactivatoroftran-scription3,STAT3)蛋白广泛表达于不同类型的细胞和组织中,是重要的信号转导及转录级联成分,参与调控细胞的增殖分化等多种生理功能。但是在胚胎肝脏发育中是否有STAT3的表达,STAT3是否参与了胚胎肝脏中期发育过程,目前国内外尚无文献报道。目的:通过研究STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达,试图揭示STAT3信号转导通路在胚胎肝脏发育过程中的作用和可能机制。设计:以STAT3蛋白为研究对象随机对照的基础研究。单位:一所军医大学的组胚教研室。材料:本实验于2004-01/2004-06在解放军第三军医大学组胚教研室的实验室完成。KM种小鼠(清洁级)由解放军第三军医大学动物中心提供。随机取雄鼠10只,雌鼠20只,体质量25～30g。方法:分别取交配后13.5d(n=8)、交配后14.5d(n=9)、交配后15.5d(n=7)鼠胚做冰冻连续切片。每2张切片中取1张用0.01mol/LPBS代替STAT3一抗设阴性对照实验。利用免疫细胞化学技术和免疫荧光细胞化学技术显示STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达。主要观察指标:鼠胚冰冻连续切片STAT3蛋白的表达情况。结果:在孕13.5d(E13.5d)鼠胚中,STAT3蛋白在肝细胞中的表达较强,孕14.5d(E14.5d)和孕15.5d(E15.5d)STAT3蛋白在肝脏中的表?

摘要：人促红细胞生成素受体(EPOR)属于单跨膜区段无酶结构的膜受体,EPOR的空间构型以二聚体的形式存在,其中二硫键和色氨酸/丝氨酸基团(WSXWS)结构对EPOR的空间构型稳定及功能有重要作用。EPOR的跨膜段对其活性有关键性的作用。EPOR在造血细胞膜上的表达随造血细胞对于促红细胞生成素(EPO)的依赖而变化,其在空间上的表达分布为少量的EPOR表达在细胞膜的表面,其余存在于细胞的区室当中,这就为调节EPOR在膜上的表达量提供了可能性。EPOR通过内含体溶酶体途径降解,蛋白酶体控制这种机制,用蛋白酶体抑制剂可使EPOR的酪氨酸激酶活性和细胞内信号转导路径持续2 h。某些EPO的拟肽可与EPOR结合引起药理学活性,如EPO模拟肽1和EPOR来源肽,以及EPOR分子内部的结构变异都可以引起EPOR持续的活性。研究人造血细胞膜表面EPOR的表达、空间构型、降解、将信号传入细胞内的机制等,有助于更深入了解红细胞的药物信号决定因素及设计出增强EPOR功能的模拟药物。