摘要：目的　探讨脱氧核酶 (DNAzyme ,Deoxyribozyme)在培养细胞内对呼吸道合胞病毒 (RSV)复制的影响 ,为使用脱氧核酶控制RSV感染提供理论依据。方法　采用光镜、电镜观察自行设计与合成的抗RSV基因组RNA脱氧核酶DZ6 0 4对RSV致 9HTE细胞病变效应及超微结构变化的影响 ;病毒空斑形成阻断试验以及四甲基偶氮唑盐比色试验检测脱氧核酶DZ6 0 4对RSV复制的抑制和对RSV感染的 9HTE细胞的保护作用。结果　脱氧核酶DZ6 0 4可明显改善RSV所致的细胞病变 ,干预组病变出现时间和完全病变时间延迟 ,随着RSV感染量的逐渐减小 ,效果逐渐增强 ;脱氧核酶的病毒抑制效应与其浓度有关 ,浓度越高 ,效果越明显 ;脱氧核酶能明显减轻与推迟病毒感染早期细胞的超微结构变化 ;脱氧核酶DZ6 0 4具有抗RSV效应 ,能明显提高细胞感染RSV后的存活率 (P 0 0 5 )。结论　我们设计与合成的抗RSV基因组RNA脱氧核酶DZ6 0 4在培养人气道上皮细胞内具有特异性抗RSV效应。

摘要：目的:通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A(recombine exfoliative toxin A,r ETA),为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料。方法:根据Gen Bank公布的ETA基因序列设计引物,从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)基因组中扩增ETA基因,插入原核表达载体p QE30,构建重组质粒p QE30-ETA。将p QE30-ETA转化表达菌*** M15,优化诱导表达条件,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot鉴定。重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下,观察皮肤病理改变,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果:重组质粒p QE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927 bp,与基因文库中的ETA序列完全吻合。SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27 k D,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间4 h,可得到最大表达量的可溶性蛋白,约为20%。Western blot显示与***产生的ETA蛋白在同一位置,重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90%以上,注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙。结论:成功构建了重组质粒p QE30-ETA,表达了具有生物学活性的重组***表皮剥脱毒素A。

摘要：目的比较RNA干扰(RNAi)技术与利巴韦林抗呼吸道合胞病毒(RSV)效应,探讨RNAi技术体外抑制RSV的有效性。方法用成功构建的表达载体pshRNA7816及利巴韦林处理HEp-2细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色实验检测pshRNA7816、利巴韦林的细胞毒性和对RSV感染后细胞的保护作用;通过显微镜观察pshRNA7816及利巴韦林对RSV感染细胞病变的抑制效率。结果pshRNA7816对HEp-2细胞的正常生长无明显细胞毒性作用,而利巴韦林在1.0mmol/L以上作用浓度即会对细胞产生细胞毒性作用;pshRNA7816和利巴韦林均能抑制RSV所致的细胞病变,但pshRNA7816对细胞病变抑制作用较利巴韦林强,经过pshRNA7816处理过的RSV感染细胞的细胞存活率明显高于利巴韦林对RSV的最大抑制率(P<0.05)。结论根据RNAi技术所设计的重组质粒pshRNA7816在体外细胞培养系统中较利巴韦林抗RSV活性强。

摘要：目的研究不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘样炎症的影响。方法应用普通级或清洁级的BALB/c和C57BL小鼠,以鸡卵白蛋白作过敏原,采用氢氧化铝和明矾佐剂及滴鼻和雾化的激发方式制备小鼠哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞分类记数和观察细支气管周围的嗜酸性粒细胞(Eos)炎症。结果BALB/c和C57BL小鼠嗜酸性粒细胞炎症无差异,清洁级比普通级、明矾佐剂比氢氧化铝佐剂、多次的雾化比一次滴鼻的激发方式能更明显地诱导小鼠哮喘炎症。结论小鼠哮喘炎症程度受饲养环境、种属、佐剂及激发方法的影响,实验设计时应予充分的注意。

摘要：病毒入胞是病毒入侵的第一步。本研究前期已经率先发现人偏肺病毒存在胞吞的入胞方式。病毒的胞吞过程需要经历粘附,胞吞体和膜融合的过程。病毒入胞是病毒感染的第一个关键步骤,因此如果可以找到人偏肺病毒病毒胞吞入胞发生的关键时间段,不仅对于其入胞机制的研究,还有抗病毒策略的设计都大有帮助。本研究在研究前期基础上,通过全内反射荧光显微技术、激光共聚焦技术、R18/DiOC双波长成像技术等形态学的观测方式建立了一套观测病毒入胞时间段的方法。通过这套方法发现人偏肺病毒入胞的时间主要集中在感染后的前15 min。为了进一步验证入胞的关键时间段,本研究利用离心可以增强病毒感染的方法,验证了感染前15 min确实是人偏肺病毒入胞的关键时间段。本研究通过形态学观测的方法并验证发现人偏肺病毒入胞主要发生在感染后的前15 min,因此本研究将为今后人偏肺病毒入胞机制的阐明,抗病毒策略设计等提供关键信息,从而为疫苗和抗病毒药物研发提供理论基础。

摘要：目的:构建针对呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因m RNA的短发卡结构状RNA(shRNA)重组载体质粒,为利用RNA干扰技术抗RSV感染的深入研究奠定基础;方法:按shRNA设计原则,选择RSV-M 2基因作为靶基因,设计19bp长的能产生短发卡结构的两段DNA反向重复序列,中间以9bp序列间隔,经退火形成互补双链,克隆至转录载体pgenesil-1上,重组质粒经酶切和测序鉴定,然后将构建成功的重组质粒转染H EP2细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光细胞发生率以评估转染效率。结果:将设计合成的DNA片段成功克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列,并且荧光显微镜下观察细胞有较多的绿色荧光蛋白表达。结论:成功构建了针对RSV M 2基因m RNA的shRNA重组载体质粒,可利用重组质粒进一步研究其对RSV感染的抑制,从而为抑制RSV感染寻找新的基因治疗手段。

摘要：背景对于有血便、腹胀等表现且腹部超声门静脉积气征(PVG)阳性的新生儿,临床上仍存在将食物蛋白过敏性直肠结肠炎(FPIPC)误诊为NEC的情况。目的比较NEC和FPIPC的临床资料及腹部超声表现,并分析NEC的相关因素。设计病例对照研究。方法纳入2019年1月1日至12月31日在重庆医科大学附属儿童医院住院、至少1次腹部超声检查显示PVG阳性的新生儿,根据出院时第一诊断分为NEC组和FPIPC组。从电子病历中截取患儿的一般资料、临床表现和体征、实验室检查结果、腹部超声报告等,行影响因素分析。主要结局指标腹部超声检查PVG阳性的新生儿中确诊为NEC的影响因素。结果NEC组68例,FPIPC组42例。NEC组胎龄、入院日龄小于FPIPC组,出生体重和入院体重低于FPIPC组,腹胀、反应低下、肠鸣音减弱的百分比高于FPIPC组,N%高于FPIPC组,CRP升高和PCT异常的百分比高于FPIPC组;FPIPC组腹泻的百分比高于NEC组;差异均有统计学意义。腹部超声检查:NEC组肠蠕动减慢、腹腔积液的比例高于FPIPC组,差异均有统计学意义;PVG阳性检出日龄在两组间差异无统计学意义;腹部超声复查(NEC组67例,FPIPC组37例)3 d内PVG未消失的比例在两组间差异无统计学意义。Logistic回归发现,腹部肠鸣音减弱(OR=14.7,95%CI:2.6~82.2,P=0.002)、CRP>10 mg·L^(-1)(OR=24.7,95%CI:1.4~431.7,P=0.028)、超声示肠蠕动减慢(OR=26.9,95%CI:1.8~389.9,P=0.016)与NEC相关。结论新生儿腹部超声PVG阳性时,需结合胎龄、出生体重、临床表现、炎症指标、腹部超声特点等进行鉴别诊断,当腹部肠鸣音减弱、CRP增高、腹部超声示肠蠕动减慢时,需警惕NEC。

摘要：隐匿性乙肝病毒感染的诊断,通常使用巢式PCR的方法,来检测血清中的HBV DNA。因中国人群感染乙肝病毒的基因型与国外人群存在差异,故本研究的目的是对现有文献已经介绍的诊断隐匿性乙肝病毒感染的PCR检测方法进行优化,从而适用于中国隐匿性乙肝病毒感染人群的诊断。本研究通过对文献报道的巢式PCR检测方法进行验证,发现其Core/pre-core区段扩增结果不理想,故根据我国乙肝病毒的基因型以及HBV C基因的保守性原则自行设计优化实验。利用临床收集的HBV阳性样本验证其灵敏度及特异度;收集父亲或/和母亲为HBV阳性患者,而孩子HBs Ag结果为阴性的样本来验证其扩增结果。本研究优化设计的检测HBV C基因的引物,具有灵敏度高特异性好的优点。本研究临床收集了100份父亲或/和母亲为HBV阳性患者,而孩子HBs Ag结果为阴性的血清样本,用本研究优化后的引物检测,可以提高隐匿性乙肝病毒的检测分辨率,提高了4倍的检测效率。本研究优化设计的隐匿性乙肝病毒感染的引物可以用于中国人群中隐匿性乙肝病毒感染的检测,具有较高的灵敏度和特异性。

摘要：目的调查中国儿科医务人员对脉搏血氧饱和度监测的知识、态度和行为(简称知信行),并分析其影响因素。方法采用自行设计的问卷,在2022年3月11日至14日对来自中国31个省、自治区、直辖市的11849例儿科医务人员进行线上调查。采用Logistic回归分析儿科医务人员脉搏血氧饱和度监测知信行的主要影响因素。结果儿科医务人员脉搏血氧饱和度监测知识、态度、行为总得分分别为(5.57±0.96)分、(11.24±1.25)分和(11.19±4.54)分,得分率分别为69.61%、74.95%和55.99%。Logistic回归分析显示,儿科医务人员的年龄、从业年限、所在地区和所在单位是否配置脉搏血氧仪是知识水平的主要影响因素(均P<0.05);知识水平、性别、学历、从业年限、所在地区、所在医院级别和所在单位是否配置脉搏血氧仪是态度水平的主要影响因素(均P<0.05);知识水平、性别、年龄和所在单位是否配置脉搏血氧仪是行为水平的主要影响因素(均P<0.05)。结论中国儿科医务人员对脉搏血氧饱和度监测的知识和态度水平有待进一步提高,脉搏血氧仪的使用存在明显不足。亟须制定相关政策/指南,加强教育培训,提高知信度,增加脉搏血氧仪的配置,普及推广脉搏血氧饱和度监测在临床实践中的应用。