摘要：目的预测人偏肺病毒(hMPV)融合蛋白N-糖基化位点,构建N-糖基化修饰突变体。方法NetNGlyc1.0 Server神经网络软件预测hMPV4个亚型代表株F蛋白氨基酸序列的N-糖基化位点;根据预测结果针对性地设计突变引物,应用基因工程技术进行定点突变,从而获得特定位点去糖基化的F基因,包括单位点突变体、双位点突变体及三位点突变体;双酶切鉴定、基因序列分析重组质粒,明确N-糖基化修饰突变体构建是否成功。结果hMPV4个亚型代表株F蛋白氨基酸序列从N端起第57、172、353位均存在可能性大于50%的N-糖基化位点。构建hMPVF蛋白7个不同的N-糖基化修饰突变体,并通过序列分析测定证实重组突变质粒构建成功。结论hMPVF蛋白的N-糖基化位点保守,不同亚型的代表株有相同的糖基化位点,利用定点突变技术成功构建了糖基化突变体重组质粒。

摘要：目的了解2006-2007年重庆地区急性呼吸道感染住院儿童人鼻病毒（HRV）的检出情况、感染特点及流行规律。方法收集2006年4月-2007年3月重庆医科大学附属儿童医院呼吸科住院的部分急性呼吸道感染患儿的鼻咽深部吸取物390份,离心后当日提取呼吸道标本RNA,应用针对HRV5′端非编码区保守序列设计引物,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测标本中的HRV基因组RNA。随机抽取5例RT-PCR鉴定HRV阳性的PCR产物进行序列测定,以验证PCR检测的特异性。对HRV阳性病例总结其感染特点及临床特征。结果390例标本中HRV阳性61例,阳性率为15.6%。RT-PCR检测5例HRV阳性的PCR产物行序列测定经Genbank比对均证实为HRV。HRV阳性患儿中,≤2岁49例,〉2-5岁10例,5岁以上2例。HRV感染几乎全年散发,2006年12月HRV检测阳性率最高,达29.5%。重庆地区HRV感染无明显高发季节。HRV感染患儿的临床表现主要为咳嗽（96.8%）、气促（61.5%）、喘息（56.5%）、发热（35.5%）。临床诊断依次为支气管肺炎20例（32.8%）,间质性肺炎15例（24.6%）,毛细支气管炎12例（19.7%）,重症肺炎8例（13.1%）,支气管哮喘4例（6.5%）,喘息性支气管炎2例（3.3%）。8例重症肺炎中先天性心脏病2例,中度营养不良1例,且均在2岁以内。平均住院天数7.5d。61例HRV阳性患儿中,53例进行痰培养,40例提示细菌感染,13例正常。结论HRV是重庆地区婴幼儿急性下呼吸道感染较为常见的病毒病原,其流行无明显季节特点。HRV和喘息之间可能存在密切关系,HRV感染在有心肺基础疾病的儿童中有重症倾向。