摘要：目的设计部分可吸收椎间融合器(partially bioabsorbable interbody fusion cage,PBIFC),并应用有限元模型评估其生物力学性能。方法采用纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)和多聚氨基酸复合硫酸钙材料,设计并制作PB-IFC。建立完整L3/4腰椎节段的有限元模型并验证;在该模型上,模拟经前路植入PBIFC或同外形非吸收型椎间融合器n-HA/PA66 cage,分别建立植入即刻和植入4周的有限元模型;在L3上表面施加400 N轴向压缩预载荷和10 Nm扭矩,模拟脊柱压缩、前屈、后伸、旋转和侧屈5种运动,计算各模型的应力值及应力轮廓。结果植入即刻,PBIFC模型植骨的应力高于n-HA/PA66 cage模型;融合器及终板应力低于n-HA/PA66 cage模型;两个模型终板应力轮廓未见明显区别。植入4周时,PBIFC模型植骨的应力高于n-HA/PA66 cage模型;融合器及终板应力低于n-HA/PA66 cage模型,且差值较植入即刻时更大;PBIFC模型的终板应力轮廓较n-HA/PA66 cage模型大。结论 PBIFC较相同外形的非吸收型融合器具有更多的优点,是一种适宜的新型椎间融合器。

摘要：目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼cdc42基因,探讨其对早期骨软骨发育的影响。方法通过多序列比对分析cdc42的种属保守性,设计cdc42基因的gRNA,利用CRISPR/Cas9技术构建cdc42敲除的斑马鱼突变体。应用整胚原位杂交检测cdc42的表达模式,繁殖并利用转基因标记鱼系Tg(col2a1a:GFP)观察软骨发育表型,并通过茜素红染色观察椎体矿化。结果多序列比对分析显示cdc42在人、小鼠和斑马鱼中高度保守,原位杂交结果显示cdc42在斑马鱼头颅及身体中广泛表达,包括下颌软骨区域。成功设计cdc42的gRNA并利用CRISPR/Cas9技术构建了cdc42基因敲除的斑马鱼突变体。cdc42突变体在受精后第3天表现出体长短小(P<0.01)和头颅发育迟缓,头部和眼睛小(P<0.01),以及下颌发育凹陷。Tg(col2a1a:GFP)斑马鱼显示突变体梅克尔软骨和角舌软骨细胞形态异常,软骨细胞排列紊乱,其角舌软骨夹角增大、长度缩短(P<0.01)。纯合突变体在受精后10~13 d死亡。茜素红染色结果提示突变体椎体矿化数量减少以及软骨内骨化面积减少(P<0.01)。结论通过CRISPR/Cas9技术成功敲除了斑马鱼cdc42基因,导致下颌软骨发育迟缓、椎体矿化延迟以及软骨内成骨减少。

摘要：目的观察低频脉冲超声对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)治疗的疗效。方法总结2008年6月至2009年6月门诊和住院按疗程治疗的膝关节骨关节炎患者246例。将患者按随机化区组设计分为低频脉冲超声加口服塞来昔布胶囊治疗组(A组)86例、单纯低频脉冲超声治疗组(B组)80例和口服药物组(C组,口服塞来昔布胶囊)80例。对比观察3组患者治疗前和治疗8周后的VAS评分、Lequence评分、关节液炎症介质指标(IL-1、MMP-9)。结果治疗8周后,针对疼痛的VAS评分,A组总有效率93.0%,B组83.8%,C组75.0%,3组间疗效有统计学差异(P<0.05)。针对关节活动情况的Lequence评分,A组总有效率87.2%,B组76.3%,C组68.8%,3组间疗效有统计学差异(P<0.05)。治疗前后IL-1、MMP-9的变化量A组分别为(51.30±9.29)pg/ml和(49.23±8.45)ng/ml;B组(39.21±10.62)pg/ml和(40.12±7.36)ng/ml;C组(34.06±9.98)pg/ml和(33.78±10.02)ng/ml;A组各项观察指标均有明显改善,与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.01),B组和C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低频超声治疗骨关节炎可明显减轻关节局部的症状,缓解关节肿胀,增加关节的活动度,减轻关节炎症,疗效优于单用口服药物和单纯低频超声治疗,提示二者可能有协同作用。

摘要：目的:利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除Lrtm1(leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1)基因的C2C12细胞系,为研究Lrtm1基因的作用提供实验基础。方法:设计3对针对Lrtm1基因的向导RNA(sgRNA),将sgRNA插入载体pCRISPRLvSG06中;利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pCRISPR-LvSG06;将病毒感染C2C12细胞,并加入嘌呤霉素筛选,将筛选嘌呤霉素阳性的细胞提取RNA,逆转录成c DNA;设计Cas9引物,利用cDNA为模版,PCR验证C2C12细胞中Cas9的表达,确认慢病毒成功感染C2C12细胞;利用96孔板挑选单克隆细胞的方法筛选得到单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序Lrtm1基因相关序列并与野生型Lrtm1基因进行对比,确认敲除成功的克隆细胞株;诱导敲除Lrtm1稳定细胞株成肌分化,检测成肌分化标志因子Myosin的蛋白表达,RT-PCR检测转录因子PAX7的mRNA表达,Western blot检测H3K27me3蛋白水平。结果:测序结果显示向导RNA(sgRNA)成功插入载体质粒;将单克隆细胞DNA测序结果显示A和C克隆成功敲除Lrtm1基因;敲除Lrtm1基因后成肌分化标志因子Myosin蛋白表达降低,成肌转录因子PAX7 mRNA的表达降低,在分化72和96 h组,H3K27me3蛋白水平较野生型组增高。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功敲除Lrtm1基因,稳定敲除Lrtm1基因的C2C12细胞系构建成功;敲除Lrtm1后能抑制C2C12细胞成肌分化,并且抑制成肌转录因子PAX7的m RNA表达,PAX7mRNA表达降低的原因可能为H3K27me3水平增高。

摘要：背景:双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,对绝经后骨质疏松形成过程中的白细胞介素相关因子增强骨吸收的抑制作用目前的报道较少。目的:验证双醋瑞因对去卵巢大鼠骨量丢失的干预作用。设计、时间及地点:完全随机分组设计,随机对照实验,于2008-08/11在重庆医科大学实验动物中心实验室完成。材料:清洁级3月龄雌性SD大鼠40只,随机分为4组:假手术组、去卵巢组、双醋瑞因10,100mg/(kg·d)组,每组10只。双醋瑞因胶囊(每粒50mg含双醋瑞因48.1mg),为昆明积大制药有限公司生产,批号:20070532。方法:除假手术组外其他3组大鼠分离出双侧卵巢结扎输卵管血管后切除卵巢,假手术组只切除卵巢周围少量脂肪组织,逐层缝合皮肤。去卵巢术后第2天双醋瑞因10,100mg/(kg·d)组开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组给予等量的生理盐水,持续给药10周后麻醉下处死所有大鼠采血,收集骨骼标本。主要观测指标:以骨密度双能X射线测量仪测量第3腰椎、股骨骨密度;放射免疫法测定骨组织中白细胞介素1β、白细胞介素6水平及血清骨钙素水平。结果:40只大鼠均进入结果分析。去卵巢组骨密度低于假手术组(P0.05)。结论:雌性大鼠卵巢切除10周后骨量丢失明显,双醋瑞因对去卵巢后大鼠由于骨吸收增强所引起的骨量丢失有干预作用。对成骨细胞介导的骨形成无明显的影响。

摘要：背景：既往对损伤骨骼肌的处理主要是修复肌膜及肌外神经。目的：实验拟观察肌内神经对损伤股直肌的修复作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验。组织学观察，于2006-09／2007-08在重庆医科大学动物实验中心完成。材料：新西兰大白兔20只，体质量2．0～2．5kg，右侧股直肌用于制备骨骼肌损伤模型，左侧股直肌作为对照。方法：20只大白兔随机数字表法分为2组。肌内神经完整组采用不全离断方式，在神经入肌点以远4．0～5．0mm处横断股直肌而保留肌内神经完整，肌内神经断裂组采用完全离断方式在神经入肌点以远4．0～5．0mm处横断股直肌及肌内神经。主要观察指标：①术后28周测量股直肌的湿重、股直肌等长收缩力的变化。②苏木精-伊红染色观察股直肌形态变化，Masson三色染色观察纤维化程度，肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色及还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶染色区别肌纤维的类型，并计算肌纤维横断面面积。结果：①与对照侧相比，肌内神经断裂组实验侧股直肌湿重下降，等长收缩力下降（P〈0．05）。②与对照侧相比，肌内神经完整组Ⅰ型、Ⅱa型肌纤维横断面面积恢复较佳。Ⅱb型肌纤维较差（P〈0．05），各型肌纤维构成比例基本恢复；肌内神经断裂组Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型肌纤维横断面面积均恢复较差（P〈0．05）。结论：肌内神经能够促进损伤骨骼肌的肌纤维再生，减轻肌肉萎缩及纤维变性，恢复肌纤维的正常形态及组成方式，从而促进损伤骨骼肌的恢复。

摘要：背景:新近研究表明骨水泥诱导成骨能力较差、在体内降解过慢,其单独应用的效果并不理想。因此,需要对其进行改型,希望研制出一种能克服上述缺点的新型材料运用于临床。目的:观察脱钙骨基质颗粒、丙烯酸树脂骨水泥复合物填充修复股骨骨缺损的能力,从而确定该复合材料的最佳配方。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/09在重庆医科大学动物实验中心完成。材料:将脱钙骨基质颗粒和丙烯酸树脂骨水泥按不同质量比例(2∶8,3∶7,4∶6,5∶5,6∶4)构成复合材料。方法:在新西兰大白兔双侧股骨制备骨缺损填充模型,将各比例复合材料植入骨缺损处,以单纯丙烯酸树脂骨水泥材料作为对照。主要观察指标:对复合材料和单纯材料进行扫描电镜观察及生物力学测试。在术后4,8,12周时进行大体标本观察、组织病理学、X射线片观察,比较其修复填充骨缺损的能力。结果:脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比在3∶7～6∶4的范围内,复合材料中存在较多100μm以上的裂隙,当质量比小于3∶7时,材料内部的大部分间隙<100μm,质量比大于6∶4时两种材料不能有效地凝固在一起。随质量比的增加,材料抗压极限强度递减,各组数据经方差分析,差异具有显著性意义(P<0.05)。在各时间点大体标本观察、组织病理学、X射线片观察显示骨缺损填充部位均有不同程度新骨形成。12周时脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比在4∶6时骨结合率最高。结论:随着脱钙骨基质颗粒质量比的增加,孔隙越丰富而材料力学强度逐渐降低。脱钙骨基质颗粒与丙烯酸树脂骨水泥质量比为4∶6时修复低承重部位松质骨的骨缺损效果较好。

摘要：背景:阿仑磷酸钠是新一代的二磷酸盐,属第2代骨质疏松药,临床上广泛用于治疗骨吸收增加类疾病。目的:观察阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及护骨素(OPG)mRNA表达的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-11/2008-03在重庆医科大学基础研究所完成。材料:成骨细胞来源于手术中取得的松质骨骨块;阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司生产,批号:06130。方法:在含1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5,1×10-4mol/L不同浓度的阿仑磷酸钠培养液中培养成骨细胞,以不加阿仑磷酸钠培养为对照。主要观察指标:①成骨细胞观察。②以四甲基偶氮唑盐检测阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖的影响。③以半定量反转录-聚合酶链反应方法观察不同浓度阿仑磷酸钠对成骨细胞表达OPG/RANKLmRNA的影响。结果:1×10-5,1×10-4mol/L的阿仑磷酸钠抑制成骨细胞增殖,1×10-9～10-6mol/L的阿仑磷酸钠促进成骨细胞增殖,其中1×10-8mol/L的阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖作用最强。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性降低RANKLmRNA表达,干预72h,1×10-5mol/L抑制作用最大(P<0.01)。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性增加护骨素mRNA表达,干预72h,1×10-6mol/L增加作用最明显(P<0.01),而1×10-5mol/L时又减低。结论:阿仑磷酸钠能使成骨细胞增殖,1×10-8mol/L浓度增殖作用最强,其可能通过调节OPG/RANKLmRNA表达而影响骨代谢。

摘要：背景：LIM矿化蛋白1（LIM Mineralization protein，LMP—1）是一种细胞内非分泌蛋白，主要在骨的钙化阶段起作用。目前发现LMP—1可以促进骨形态发生蛋白2和转化生长因子β1等多种蛋白质合成增加，提示其可能通过招募众多的成骨因子共同参与成骨细胞的分化。目的：应用AdEasy腺病毒载体系统构建人LMP-1基因的腺病毒重组体，并检测感染病毒的兔骨髓间充质干细胞LMP-1的表达。设计、时间及地点：开放性实验，于2006—03／2007—02在解放军第三军医大学西南医院中心实验室完成。材料：纯种新西兰大白兔3只，用于分离制备骨髓间充质干细胞。携带人LMP-1基因的pIRES2-EGFP-LMP-1质粒由重庆医科大学附二院骨科保存；AdEasy腺病毒由美国Tong-ChuanHe博士惠赠：人胚肾293细胞由重庆医科大学检验系王宏兵硕士惠赠。方法：以pIRES2-EGFP—LMP—1质粒为模板进行PCR扩增，在下游引物中加入特定序列，使扩增出的LMP—1基因带有编码6个组氨酸（即His标签）的碱基序列，将其作为目的基因，TA克隆后测序。双酶切后插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack—CMV内，经PmeⅠ线性化，在BJ5183菌内与骨架质粒pAdeasy—1的同源重组，构建重组腺病毒质粒pAd-LMP—1。通过脂质体介导在HEK293细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad—LMP—1，扩增纯化后测定滴度，以最佳MOI值体外感染兔骨髓间充质干细胞，行RT—PCR及Western Blot法检测LMP—1表达。主要观察指标：重组腺病毒质粒pAd—LMP-1的鉴定，检测其滴度及感染效率。RT—PCR、Western Blot法检测感染细胞LMP—1 mRNA及蛋白的表达。结果：①测序鉴定携带His标签的LMP—1基因的重组质粒pMD18-T—LMP—1构建成功，包装扩增后获得滴度约3．5×10^9efu／mL的腺病毒重组体Ad—LMP—1。以150的MOI值感染兔骨髓间充质干细胞可以获得最佳感染效率，感染3d后达50％-70％。②病毒感染后的骨髓间充质干细表达LMP—1 mRNA及蛋白。结论：成功构建携带His标签的人LMP—1基因的腺病毒重组体，证实感染重组病毒的骨髓间充质干细胞可有效表达LMP—1。

摘要：目的：以影像学定位探讨腰椎棘突上缘根部与椎弓根的解剖关系，提供相关数据为椎弓根穿钉确定准确的解剖定位点。方法：实验于2007-05/12在重庆医科大学解剖实验室和重庆九龙坡区第三人民医院放射科进行。①测量20具干燥胸腰椎骨标本L1-5节段之棘突上缘根部至椎弓根上缘、下缘及中轴线的距离。②测量60个正常成人腰椎X射线平片及40个正常成人腰椎CT片L1-5节段之棘突上缘根部至椎弓根上缘、下缘及中轴线的距离，对两者的平均值进行比较。③据测量数据结果，以棘突为定位标志，选取合适椎弓根进钉点，在5具正常成人新鲜尸体上做模拟手术。结果：①获得了相关解剖学数据，L1-4棘突上缘根部逐渐接近椎弓根中轴线。L4棘突上缘根部与椎弓根中轴线接近，几近平齐；L5棘突上缘根部多在椎弓根中轴线上方5mm左右范围内。②成人各椎骨棘突上缘根部平面至椎弓根上缘平面、下缘平面及中轴线平面的垂直距离，X射线平片和CT片测量结果比较差异无显著性意义（P〉0.05）。③以所得数据设计螺钉入点，实验中60个螺钉全部穿钉成功，无一例穿透椎弓根皮质。结论：①L1-5的棘突上缘根部都位于椎弓根上、下平面范围内，X射线平片与CT测量值无明显差别，具有较为恒定的解剖位置关系，为椎弓根穿钉置入提供了参考数据。