摘要：为建立猪瘟病毒NASBA-ELISA检测方法,以猪瘟病毒(CSFV)E2基因为研究对象,利用Prim-er 5.0和Blastn生物软件,设计并合成了特异的核酸序列依赖扩增(NASBA)引物和探针。经条件优化,确定的最佳扩增反应条件为42℃,反应1.5h。临床检测结果显示,用该方法可特异地扩增CSFV E2基因约155bp的目的片段,而对TGEV、PRRSV、PCV2、PPV、PEDV、APP和PK-15正常细胞等核酸的检测均为阴性,可最低检出1×100～1×101 copies/μL,其灵敏度比RT-PCR略高。应用该方法对采自重庆部分地区猪场的125份样品进行了检测;结果,猪瘟病毒阳性检出率为5.6%,NASBA-ELISA法与RT-PCR法的检出符合率为94.4%。结果表明,NASBA-ELISA方法可应用于CSFV的快速鉴别检测。

摘要：全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,heat shock protein 90(HSP 90)等基因分别设计了疫霉属的通用引物和此两种检疫性疫霉的特异引物,通过进行反应体系优化,建立了同时检测柑橘上两种检疫性疫霉的特异三重PCR检测方法,并进行了灵敏度试验.用15个柑橘疫霉菌株与甜橙的混合DNA做模板进行模拟带菌试验,结果表明该三重PCR分子检测能实现两种检疫性疫霉菌的同步特异检测,这两种检疫性柑橘疫霉提供了特异、可靠、便捷、适于口岸应用的检测方法,可有效促进柑橘类水果的快速通关.

摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)是引发猪繁殖障碍的主要病原,建立其基因芯片快速检测体系,对开发猪繁殖障碍快速检测试剂盒具有重要意义。根据GenBank中已发表的PRRSV、CSFV和PCV-2的病毒基因组序列,设计合成特异性引物和特异性较强的60mer的寡核苷酸探针,并将探针按所设计阵列固定于表面经氨基化修饰的玻片上,制备出寡核苷酸芯片。通过引物标记及特异性验证,建立了带标记引物的多重PCR检测体系,从而产生大量可与寡核苷酸探针特异性互补的带标记的DNA片段。将标有荧光染料的扩增产物与芯片上寡核苷酸探针杂交,扫描、分析芯片上荧光信号。结果表明,芯片上各样本对应探针位点呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。分别用基因芯片检测方法和PCR/RT-PCR检测60份临床病料,两者符合率高达92%,表明该检测技术能够用于临床病料的检测及快速诊断PRRSV、CSFV和PCV-2。

摘要：为建立我国禁止进境的2种检疫性真菌丁香疫霉Phytophthora syringae和栗黑水疫霉***的同步分子检测方法,根据疫霉属的18S rRNA、HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物、丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异性引物,建立三重PCR检测方法,并进行灵敏度测试和模拟带菌试验。结果表明,可同时检测李属植物上丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异三重PCR检测体系为:最佳引物浓度组合18SUF/18SUR、PCSF/PCSR和PSSF/PSSR依次为0.2、0.8、1.0μL,最佳退火温度为63℃,最佳退火时间为20 s。该体系扩增丁香疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和683 bp的HSP90基因特异条带,扩增栗黑水疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和314 bp的Ypt1基因特异条带,对照菌只出现18S rRNA条带;三重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出3个片段。表明该三重PCR检测方法能实现丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异性检测,可有效改进李属类水果及其种苗上检疫性疫霉的快速检测。

摘要：目的为得到实验室现有的山羊痘、绵羊痘、疙瘩皮肤病病毒的ORF132基因序列,以便于后续研究。方法本实验在参考GenBank公布的羊痘病毒、疙瘩皮肤病病毒ORF132基因序列的基础上,设计了3对引物,对1株山羊痘病毒,1株绵羊痘病毒,两株疙瘩皮肤病病毒进行PCR扩增,克隆扩增产物,进行测序分析。结果测序结果在NCBI网站进行比对后发现其与标准毒株有较大相似性,同时存在不同的变异现象。结论羊痘病毒属的3种病毒同源性极高,相比之下,ORF132基因具有较好的特异性,通过该次的基因分析,可为PCR引物设计和基因芯片探针设计提供基础。

摘要：总结了纺织品异味检测存在的问题和不足,概述了异味检测方法和方式,探讨了提高异味检测准确性的相关措施及方法,即提高检验员能力,改善实验室环境,合理设计实验室布局,建立和健全测试标准和方法,并比较了国内外标准中异味的检测方法。

摘要：本文总结了目前纺织品气味检测存在的问题和不足,概述了气味检测方法和方式。提出了气味检测实验室人员和环境建设的要求,列举了设计图例,并给出了几点建议。

摘要：为建立简便快速、特异检测沙门菌的方法,根据沙门菌invA基因序列,分别设计特异的捕获探针和检测探针,通过探针与目标rRNA结合,优化反应条件,建立了检测沙门菌的夹心DNA杂交方法。该方法在1.5h内即可完成全过程检测,加入TMB显色液可直接肉眼观察结果或采用酶标仪测定D450nm值判定结果。该方法对其他相关病原菌均无特异性反应,最低检测限为1.2CFU/mL,具有良好的精确度。批内变异系数在16.53%~17.97%之间,批间变异系数在16.33%~22.10%之间。本方法的建立为沙门菌的大批量、快速检测和防控提供了新的技术手段。

摘要：为建立同时鉴别检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）、副猪嗜血杆菌（HPS）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪肺炎支原体（Mhp）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）这6种病原的寡核苷酸芯片方法,根据这6种病原的特异保守序列,设计了6对特异性引物和探针,建立多重PCR体系,优化杂交参数,进行方法评估。结果显示,该方法检测APP、HPS、Mhp、PCV2、PRRSV及CSFV的灵敏度分别为5.8×10^2copies/L、7.8×10^3copies/L、6.8×10^3copies/L、6.3×10^2copies/L、4.8×10^3copies/L、5.5×10^2copies/L,且与猪源伪狂犬病病毒、猪细小病毒、日本乙型脑炎病毒、猪水疱病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、小反刍兽疫病毒及沙门菌等9种病原无交叉反应。用建立的多重PCR对186份临床样本的检测结果显示,单一感染率为18.3%（34/186）,混合感染率为5.9%（11/186）,与测序验证完全一致。该方法为多种病原的流行病学调查和临床诊断提供了一种快速、高通量的检测手段。

摘要：为快速检测家畜嗜衣原体,选取家畜嗜衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因的高度保守区域,设计特异性引物和探针,通过对反应条件的优化,建立家畜嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的最低检测限为2.8×10copies/μL,在2.8×102~2.8×106 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其标准曲线方程为y=-3.281 5x+41.396,线性相关系数r2=0.999 4,扩增效率为101.7%;该方法可特异性检测家畜嗜衣原体,对肺炎嗜衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热嗜衣原体、流产嗜衣原体等6种动物衣原体无交叉反应,特异性好;其批间重复试验和批内重复试验的变异系数分别为0.170 2%~0.467 2%、0.331 4%~2.796%,重复性良好。采用本试验建立的方法与OIE推荐的方法进行比较,二者的结果表现出良好的符合率。该方法的建立为家畜嗜衣原体的早期检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。