摘要：为对基因Ⅰ型和Ⅱ型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)进行鉴别检测,本研究根据GenBank中已登录的基因Ⅰ型和Ⅱ型BVDV 5'非编码区(5'-UTR)的参考序列,设计了一对BVDV Ⅰ型和Ⅱ型通用引物和2条鉴别探针,建立了Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,并利用该检测方法进行临床样品检测。特异性试验结果显示,除Ⅰ型和Ⅱ型BVDV外,该方法对猪瘟、牛传染性鼻气管炎、口蹄疫病毒等均无扩增曲线。敏感性试验结果显示,该方法对Ⅰ型BVDV检测下限为10拷贝/μL,Ⅱ型BVDV检测下限为100拷贝/μL,敏感性高。重复性试验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于1%。临床样品检测结果显示,Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR检测方法可鉴别Ⅰ型和Ⅱ型BVDV,检测结果与OIE认可的BVDV普通PCR扩增产物测序结果一致。本研究所建立的Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR具有快速、准确、可鉴别等优点,可用于Ⅰ型和Ⅱ型BVDV的快速鉴别检测。

摘要：为确定实验室常用细胞来源的可靠性,以及培养过程中是否存在不同种属间细胞的交叉污染现象,本研究针对不同物种的细胞色素b基因进行引物设计并优化,建立PCR扩增体系,对实验室常用的7种不同种属来源的细胞(MDBK、MDCK、BHK21、ST、SP20、293、VERO)进行细胞种属鉴定。试验结果表明:该PCR检测方法特异性较好,操作简便,最低可检测到0.01 ng/μL的DNA含量。结论:本研究所建立的方法能够很好的对7种不同种属的细胞进行鉴别,对细胞培养过程中的质量把控具有重要的指导意义。

摘要：为简便、快速地区分与鉴定伪狂犬病毒感染，该研究针对猪伪狂犬病野毒株与基因缺失株设计了一种荧光定量PCR检测方法，分别选取伪狂犬病病毒gB基因和gE基因的保守区，设计相应引物和探针，通过建立双重荧光定量PCI妨怯，不仅可以区分临床中野毒株与基因缺失株感染，还可以对伪狂犬病毒进行定量分析。试验结果表明：该研究所建立的检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高，对猪伪狂犬病的诊断检测及疫苗生产具有重要的参考价值，有利于伪狂犬的免疫与净化。

摘要：为建立一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法,研究针对塞内卡病毒3C基因保守区域设计了一对引物和探针,将3C基因克隆到pCR-4 TOPO载体中,以重组质粒为标准品,通过优化PCR反应条件,建立了一种检测SVA的实时荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到2.5×10 copies/μL,灵敏度高于普通PCR;与其他相关病毒及细菌均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于4%,具有良好的稳定性。研究建立的一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法可以检测SVA的定性和定量,对SVA快速诊断检测具有重要意义。

摘要：为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) TaqMan双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的BVDV 5'-UTR基因序列和IBRV gB基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针。结果显示以含有BVDV 5'-UTR基因和IBRV gB基因的重组质粒为模板绘制的标准曲线,其相关系数(R^2)均大于0.990,线性关系较好。特异性试验结果显示,该方法仅对BVDV和IBRV检测为阳性,而对口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感病毒、牛轮状病毒、牛巴氏杆菌、猪瘟病毒、牛支原体、牛、羊布鲁氏菌检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的检测下限约为10拷贝/μL,重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于2%,利用OIE采纳的BVDV、IBRV荧光定量PCR方法与本实验建立的方法分别对47份牛病料样品进行检测,二者对BVDV和IBRV检测的符合率分别可达97.87%和100%。研究表明所建立的荧光定量PCR方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于BVDV和IBRV的双重定量检测。

摘要：随着科学技术的进步,人们对灯具和灯泡提出了更高的节能和科学管理要求,使得智能照明控制的地位日益重要。与商业建筑相比,车间内大功率和制冷设备所占比例较小,而照明系统所占比例较高。基于PLC的应用程序照明控制系统可以更好地反映在节能管理和提高车间科学治理水平方面的优势。

摘要：介绍兽药洁净室工程竣工调试验收要点。洁净室工程验收应按分项验收、竣工验收和性能验收三阶段进行，一般是静态下的，分项验收、竣工验收由建设方负责组织，由建设、施工、设计、监理各方负责人参加，组成工程验收组负责执行和确认。分项验收和竣工验收全部完成后，由建设方委托有工程质检资质的第三方对洁净室综合性能全面评定检测。

摘要：摘要:生物反应器是大规模细胞悬浮培养的核心设备,由于动物细胞与微生物细胞有很大差异,对体外培养环境有严格的要求,所以借助生物反应器模拟体内环境使细胞进行增殖,是动物细胞能在体外存活并大量繁殖的有效途径。因此,生物反应器是动物细胞悬浮培养的重要支柱,它的设计和选择直接影响动物细胞悬浮培养的成败,文章对生物反应器的各个系统进行了剖析,予以在实践中指导试验和生产。

摘要：根据口蹄疫病毒VP1基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计4条特异性引物,通过对退火温度等反应条件进行优化,建立能够同时扩增出O型、A型、Asia-1型口蹄疫病毒的多重RT-PCR检测方法。结果表明,建立的方法最低可以检测出约含1 pg/μL的病毒样品;该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等其他相关病毒的检测结果均为阴性,特异性良好。建立的方法能够对口蹄疫O型、A型、Asia-1型病毒准确定型,可广泛用于口蹄疫病毒3个血清型的快速检测和分子流行病学调查。

摘要：目的本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力。方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白。利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定。结果成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌。经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白。间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显。结论本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子。