摘要：目的探讨逆转录病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰迁移诱导基因7(Mig-7)对肝细胞癌(HCC)细胞血管生成拟态(VM)形成及体外侵袭转移能力的影响。方法设计2条Mig-7 m RNA寡核苷酸序列(Mig-7 shRNA-1,Mig-7 shRNA-2)和1条作为负对照的无关序列(Mig-7 shRNA-N)。构建Mig-7shRNA逆转录病毒表达载体质粒,并将要接受转染的人肝癌细胞MHCC-97H分为6组:转染Mig-7 shRNA-1组;转染Mig-7 shRNA-2组;转染Mig-7 shRNA-N组;转染空载质粒组(Vector);重组人血管内皮抑素(ES,商品名:恩度)组;MHCC-97H细胞对照组(Control)。半定量PCR、Western blot检测其对Mig-7表达的影响;三维细胞培养观察其对VM形成的影响;细胞间粘附实验、Transwell侵袭实验及迁移实验观察其对细胞粘附、侵袭及迁移能力的影响。结果转染后,Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组中Mig-7 m RNA与蛋白的表达、MHCC-97H细胞形成VM能力、细胞侵袭、迁移能力明显减低(P<0.05),细胞间粘附能力明显增加(P<0.05);Mig-7 shRNA-N组、Vector组、ES组中MHCC-97H细胞Mig-7的表达、VM形成、细胞间粘附、迁移、侵袭能力较MHCC-97H细胞组均无明显变化。结论逆转录病毒介导的shRNA能够有效下调Mig-7的表达并明显抑制HCC细胞VM形成能力及侵袭转移能力,增加细胞间的粘附作用;ES对HCC细胞的Mig-7表达、VM形成、侵袭转移及粘附能力无明显影响。

摘要：目的探讨逆转录病毒介导的RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因-7（Mig-7）联合重组人血管内皮抑素（ES）对人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长、转移的抑制作用。方法设计2条Mig-7-mRNA寡核苷酸序列（Mig-7-shRNA-1、Mig-7-shRNA-2）和1条作为负对照的无关序列（Mig-7-shRNA-N）。构建特异性M迫-7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒，转染Mig-7高表达人肝癌细胞MHCC-97H。建立人肝细胞癌（HCC）裸鼠皮下移植瘤模型，根据转染情况和给药不同分为4组：pSIREN-M1组；pSIREN-MN组；ES组；pSIREN-Ml＋ES组。比较各组移植瘤体积、质量、转移情况；免疫组织化学观察各组移植瘤中血管生成拟态（VM）形成及肿瘤微血管密度（MVD）的差异；Westernblot检测各组Mig-7及血管内皮生长因子（VEGF）的表达。组间比较采用单因素方差分析，计量资料的组间比较采用Fisher精确概率法检验。结果PSIREN-M1组移植瘤体积、质量、转移率、Mig-7表达及VM形成明显低于PSIREN-MN组（尸〈0．05），VEGF表达及MVD明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；ES组移植瘤体积、质量及转移率、VEGF表达及MVD明显低于PSIREN-MN组（P〈0．05），Mig-7表达及VM形成明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；DSIREN-Ml＋ES组的移植瘤体积、质量及转移率、Mig-7表达与VM形成、VEGF表达与MVD明显低于PSIREN-M1组及ES组（P〈0．05）。结论Mig-7-shRNA重组逆转录病毒联合ES抑制HCC移植瘤生长及转移的效果明显优于两者单用。体内单用靶向肿瘤血管内皮细胞的“抗肿瘤血管生成治疗”效果有限的原因可能是其促进了VM的形成。

摘要：目的:构建、表达迁移诱导蛋白7(migration-inducing protein 7,MIG7),制备该融合蛋白的兔多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体。方法:设计并合成MIG7蛋白特异性多肽片段,合成的MIG7多肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,构建半抗原-载体偶联物。以MIG7特异性多肽-KLH为抗原免疫大白兔,制备抗MIG7多克隆抗体。40%硫酸铵沉淀、甘氨酸溶液洗脱纯化抗体,Dot blot检测抗体血清效价。免疫组化与qRT-PCR验证MIG7抗体。结果:免疫组织化学染色与qRT-PCR检测结果一致,证明该抗体可特异性结合MIG蛋白,获得MIG7多克隆抗体。结论:本研究成功制备并纯化了特异性较高的抗MIG7多克隆抗体,为进一步研究MIG7在血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成和肝癌侵袭转移中的机制奠定了基础。