摘要：目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。 方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病毒抗体 (抗 - HCV)。结果 :患者血清 TTV DNA总阳性率为 2 7.5 %。对其中 1例 PCR扩增产物测序 ,结果与其他TVV分离株如 GH1、TA2 78、TTVCHN1和 TTVCHN2的核苷酸序列同源性为 89%～ 10 0 % ,推测的氨基酸序列同源性为87%～ 10 0 %。抗 - HCV阳性与阴性患者的 TTV DNA阳性率无明显差异。所有患者均未见 AL T明显升高。结论 :血液透析患者存在较严重的 TTV感染 ,TTV感染与 HCV感染无明显相关性 ,未发现 TTV感染导致 AL T明显升高的证据。

摘要：目的应用持续质量改进(CQI)方法建立对慢性肾脏病(CKD)3~4期患者的管理模式,并且探讨CQI对CKD患者肾功能预后的影响。方法选择在上海市静安区闸北中心医院肾内科CKD专病门诊定期随访的86例CKD患者(3期50例,4期36例)。将患者随机分为观察组和对照组,每组43例。观察组应用PDCA四步法,即设计(plan)―实施(do)―检验(check)―应用(act),采取医疗干预和健康教育相结合的模式;对照组采取医疗干预的传统管理模式。两组均每月随访1次,随访时间为1年,以血清肌酐(Scr)水平翻倍或进入终末期肾病、发生心脑血管事件为观察终点。比较两组按时随访率、估算的肾小球滤过率(e GFR)和Scr水平。结果 (1)观察组平均随访次数为(10.7±2.8)次,按时随访率为(89.9±12.8)%,对照组平均随访次数为(4.1±2.2)次,按时随访率为(34.2±4.9)%,两组间差异有统计学意义(P均0.05)。观察组实施CQI后的e GFR为(39.35±12.23)m L/(min·1.73 m2),高于观察组实施CQI前的(37.22±11.02)m L/(min·1.73 m2)和对照组实施CQI后的(35.04±12.31)m L/(min·1.73 m2),差异均有统计学意义(P均<0.05);Scr水平为(139.25±14.15)μmol/L,低于观察组实施CQI前的(145.16±15.41)μmol/L和对照组实施CQI后的(148.06±15.63)μmol/L,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论应用CQI管理方法,采取医疗干预和健康教育相结合的模式,可以改善CKD 3~4期患者的肾功能,减少终末期肾病和心脑血管事件的发生率。

摘要：目的:构建针对膜联蛋白(annexin)Ⅱ的短发夹RNA(shRNA)的表达载体,观察其对目的基因表达的影响。方法:根据GenBank中annexinⅡ基因已知序列设计了2条序列,即annexinⅡshRNA1、annexinⅡshRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil1载体,转化扩增后进行序列测定。3种重组表达载体均转染HEK293细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别在基因和蛋白水平上检测各自annexinⅡ的表达,以未转染细胞作为空白对照。结果:3种重组表达载体(pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-annexinⅡshRNA2和pGenesil1-negative shRNA)经限制性酶切及测序分析证明基因插入正确。转染HEK293细胞后,转染pGenesil1-annexinⅡshRNA2组细胞annexinⅡ基因和蛋白表达明显低于转染pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-negative shRNA以及空转染细胞(P<0.05),而后三者间没有明显差异。结论:成功构建了针对annexinⅡ的shRNA表达载体(pGenesil1-annexinⅡshR-NA2),转染细胞后可抑制annexinⅡ基因表达。

摘要：科学研究是人类有目的、有计划地探索未知领域的一种极其复杂的认识活动。这个复杂的认识过程大致包括下列程序：选择课题、实验构思、实验设计、实验实施、结果分析、论文撰写或总结报告。其中科研选题和实验设计在科研中具有重要意义。选题是科研过程中具关键性的一步，...

摘要：目的构建表达小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)特异性shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠足细胞dynactin-1的敲低效果。方法针对小鼠dynactin-1mRNA序列,设计合成3种shRNA,克隆到入门质粒pENTR/pTER中,再利用LR反应重组到pLenti X2Puro慢病毒目的质粒,经过酶切测序鉴定后,将慢病毒质粒和包装质粒共转染293FT细胞,包装得到病毒颗粒。各组shRNA病毒载体转染小鼠足细胞后,用嘌呤霉素抗性筛选细胞,利用蛋白质印迹法检测各组细胞中dynactin-1蛋白的表达水平。结果构建的各组shRNA入门质粒和慢病毒载体经酶切及测序鉴定正确;慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞,制备病毒颗粒,转染小鼠足细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达shRNA的足细胞系;蛋白质印迹检测结果表明转染dynactin-1-shRNA组的dynactin-1蛋白表达降低。结论构建的小鼠dynactin-1-shRNA慢病毒载体能有效降低小鼠足细胞中dynactin-1蛋白表达,为进一步研究dynactin-1在足细胞中的功能奠定了基础。

摘要：继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)是尿毒症患者的常见并发症之一.由于低血钙、高血磷及甲状旁腺激素(PTH)不易被清除等原因,多数尿毒症患者都伴有SHPT,其代谢紊乱引起的骨结构、骨转化异常影响患者的生活质量.如何控制SHPT是临床探索的一个焦点,多年来国内外报道了使用大剂量1,25(OH)2D3(钙三醇)静脉或口服冲击治疗SHPT抑制其功能[1],但价格昂贵、并发症发生率高,且不适用于每一个患者.因此我们设计应用小剂量1,25(OH)2D3在慢性肾功能衰竭(CRF)合并SHPT的早期进行干预,旨在阻碍甲状旁腺功能亢进的进一步发展,现将结果报告如下.

摘要：　　摘　要　目的:观察Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞 (HKC)凋亡的影响,探讨Cyr61在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用及机制。　方法:RT PCR扩增Cyr61基因全长,构建pcDNA3. 1 +Cyr61重组质粒,转染并筛选获得稳定转染pcDNA3. 1+Cyr61的HKC细胞。经RT PCR、Northern、Westernblot鉴定转染细胞系基因的整合及表达。对空白HKC、空质粒pcDNA3. 1转染的HKC、Cyr61转染的HKC和囊肿衬里上皮细胞去血清培养 72h后,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,Westernblot检测磷酸化Akt和Bad含量。　结果:构建了pcDNA3. 1+Cyr61重组质粒并获得稳定转染该质粒的HKC细胞。空白HKC与质粒pcDNA3. 1转染组之间上述指标无显著差异(P>0 05),Cyr61基因转染组与空白组、pcDNA3. 1转染组相比,凋亡指数显著降低 (P0. 05);在Cyr61抗体存在下,Cyr61基因转染组的上述指标与空白组无显著差异 (P>0 .05 )。　结论:过表达Cyr61的HKC对去血清诱导的凋亡特性与囊肿衬里上皮细胞相似,过表达的Cyr61可能通过自分泌途径,促进Akt和Bad磷酸化,抑制细胞凋亡,参与ADPKD囊肿形成和发展。

摘要：目的 :研究特异性分离中国汉族人多囊肾病 1型致病基因 (polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法 ,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰。 方法 :利用与同源序列间的个别碱基差异设计 8对能涵盖 PKD1多拷贝区的长链 PCR引物 ,分别对两例健康汉族人基因组 DNA进行 PCR,其扩增产物通过巢式 PCR进行序列测定。 结果 :通过优化PCR体系 ,尤其是以高质量基因组 DNA为模板 ,适当提高退火温度 ,经巢式 PCR测序证实扩增产物序列与 PKD1多拷贝区一致。 结论 :该研究采用的长链 PCR体系可克服同源序列的影响 ,适用于中国汉族人 PKD1多拷贝区的特异性扩增 ,为进一步通过单链构象多态性分析检测汉族人 PKD1突变位点奠定基础。

摘要：目的　建立适合筛查汉族人多囊肾病 1型致病基因 (PKD1)突变的检测体系。方法　利用设计的 82对引物 [8对针对PKD15′端多拷贝区的长链聚合酶链式反应 (PCR)引物和 5 7对巢式PCR引物 ,17对针对 3′端单拷贝区PCR引物 ]分别对PKD1的 4 6个外显子进行扩增 ,扩增产物通过单链构象多态性 (SSCP)分析筛检出异常条带后 ,再经测序确定基因突变位点。利用建立的PCR SSCP检测体系对汉族人 2个常染色体显性遗传性多囊肾病患者家系进行PKD1突变检测 ,健康献血员为对照。结果　用 82对PCR引物 ,可成功扩增PKD1各个外显子区域 ,并经测序证实为PKD1目的片段。将建立的SSCP PCR基因突变检测体系 ,分别从 2个汉族人常染色体显性多囊肾病 (ADPKD)家系检测出PKD1基因Del 3bp(G49761 G49763 )和C4 76 2 9T 2个突变 ,其可分别导致编码产物第 382 7位缺失谷氨酸(Glu382 7)和第 35 5 5位丝氨酸 ,而产生由苯丙氨酸 (S35 5 5F)替代的改变。结论　本研究建立的PCR SSCP检测体系 ,可完成PKD1各外显子区域特异性扩增 ,并成功检测出了汉族人 2个ADPKD家系基因突变位点 ,不仅为PKD1基因突变的致病机理研究提供宝贵资料 。

摘要：目的 :在开展甲状旁腺疾病的超声诊断及甲状旁腺增生的超声介入治疗前 ,认识和掌握甲状旁腺的解剖学特征。方法 :在 2 0具成人尸体上观测甲状旁腺的位置、数目 ,甲状旁腺与甲状腺的毗邻关系 ;测量甲状旁腺的最大长度、宽度和厚度 ,并测量甲状旁腺距甲状腺后缘或上、下极之间的距离。 结果 :2 0例标本共解剖出 6 5个甲状旁腺 ,平均每例 3.2 5个 ;其中上、下甲状旁腺成对出现者 7例 (35 % ) ,成对的上甲状旁腺并单侧下甲状旁腺者 4例 (2 0 % ) ,成对的下甲状旁腺并单侧上甲状旁腺者 1例 (5 % ) ,只解剖到上甲状旁腺和下甲状旁腺的分别为 4例 (2 0 % )。 结论 :本研究所获得的相关结果 ,对应用超声检查甲状旁腺以及进行超声引导下穿刺甲状旁腺时设计安全有效的进针路径具有指导意义。