摘要：本文构建了维生素d受体(Vitamin d receptor,VdR)融合蛋白的真核表达载体,并获得稳定表达VdR融合蛋白的细胞体系,为含有活性维生素d食品及药物的鉴定建立成熟的细胞模型。设计并合成特异性引物扩增VdR基因,将扩增产物克隆至pcdNA3.1/His真核表达载体上,将其转染HEK293细胞。采用免疫沉淀(IP)技术鉴定VdR融合蛋白的表达效率。在构建pcdNA 3.1/VdR-His成功的基础上,用活性1,25(OH)_2d_3处理转染的细胞,收集总蛋白和m RNA,分别利用免疫印迹(Western blot,WB)和实时定量PCR(q RT-PCR)技术,检测VdR融合蛋白以及其下游基因CYP24A1基因的表达。IP结果证实VdR融合蛋白具有转录活性。WB和q RT-PCR结果显示,1 nmol/L浓度的活性1,25(OH)_2d_3处理转染细胞能有效激活VdR蛋白的表达,以及显著增强CYP24A1的m RNA表达(p<0.01)。利用该细胞模型检测维生素d类药物的活性,结果显示不同药物中维生素d的活性与药物种类有关。pcdNA3.1/VdR-His融合表达载体构建成功,并以此构建了鉴定活性维生素d的细胞模型。