摘要：目的　探讨螺杆菌感染与人类原发性肝癌(PLC)的相关性。方法　选取 21例PLC患者的肝癌组织为研究对象(实验组), 12例非肝癌手术患者的肝组织作对照组。参照文献设计螺杆菌属细菌 16SrRNA基因特异性引物,进行聚合酶链反应 (PCR)扩增,扩增产物经Southern杂交证实,并将PCR产物进行测序及同源性比较。同时,将两组标本制成病理切片用于螺杆菌属的cDNA mRNA原位杂交实验。通过定性和定位测定评价肝组织螺杆菌感染与PLC的相关性。结果　实验组 62%(13 /21)的肝癌组织中检出螺杆菌属 16SrRNA存在,而对照组无阳性检出 (P<0 .01)。所有PCR产物经Southern杂交得到证实。利用原位杂交技术检测实验组和对照组标本螺杆菌属 16SrRNA mRNA,实验组有 13例阳性,对照组均为阴性 (P<. 0 01 )。比较显示,肝癌组织中的螺杆菌属16SrRNA序列与幽门螺杆菌的 16SrRNA序列有 97 80%的同源性。结论　PLC患者肝组织中可能存在螺杆菌属感染且感染率较高,提示螺杆菌感染与PLC的发生可能存在某种相关性。

摘要：目的　建立多重半套式聚合酶链反应(PCR)快速检测脑脊液标本中常见的病原菌。方法　通过对病原菌 1 6SrRNA基因保守区和变异区的序列分析 ,设计通用引物及革兰阴性菌、革兰阳性菌的特异性引物 ,分别作为外、内侧引物 ,对脑脊液标本中不同细菌的DNA进行多重半套式PCR扩增 ;同时与常规细菌培养法作比较 ,并检测了该方法的敏感性。结果　外侧扩增后革兰阳性菌、革兰阴性菌经扩增后均有长约 1 0 32bp的片段产生 ;内侧扩增两种细菌除 1 0 32bp的产物外 ,革兰阳性菌另有一 336bp的特异性产物 ,革兰阴性菌另有一 1 2 7bp的特异性产物。该方法最低可检测出8cfu ml的大肠埃希菌 ;62份脑脊液标本扩增结果与培养法相比 ,敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为 93 .8%、5 .7%、88.2 %、97.8%。结论　多重半套式PCR方法能特异、敏感。

摘要：沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,Ct)是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的Ct检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16SrRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16SrRNA基因可变区内设计Ct特异性探针,用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术检测尿道炎患者Ct感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。[第一段]

摘要：目的建立快速检测脑脊液标本中常见病原菌的微型寡核苷酸芯片。方法根据脑脊液中常见病原菌16S rRNA基因序列设计通用引物和检测探针;探针固定于尼龙膜上制成寡核苷酸芯片;通用引物扩增病原菌DNA并标记生物素,产物与芯片进行反向杂交检测;对该体系的敏感性和特异性进行了测试,并检测了32例临床病原菌感染的脑脊液标本。结果所有实验菌株均只与芯片上相应探针杂交。该法最低可检测出10 CFU/ml的大肠埃希菌;32例临床本的检测结果与常规鉴定法完全一致。结论该寡核苷酸芯片法能够准确、敏感、快速地检测脑脊液标本中的病原菌。

摘要：构建SARS冠状病毒S基因序列克隆p-SARS-S,作为自行设计、建立的RT-PCR检测方法的阳性对照,并为该基因的表达奠定基础。设计合成了位于病毒基因21504～22136位的长633bp的序列片断作为模板进行PCR扩增;将PCR产物与T-Easy载体连接,经过转化提取重组质粒DNA。对构建的阳性克隆进行PCR、酶切、测序鉴定。对经EcoRⅠ酶切鉴定为阳性的重组表达质粒测序,结果显示插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致。构建的阳性对照克隆p-SARS-S有助于建立严格的SARS病毒基因室内质控措施。

摘要：目的　设计开发《医学微生物学》试题库系统。②方法　利用VisualFoxpro 6 .0数据库软件 ,采用面向对象的程序设计方法 ,按照人们习惯的思维方式建立问题域的模型 ,开发出尽可能直观、自然地表现求解方法的软件系统。③结果　设计出具有自动成卷、题库维护、试卷打印等功能的试题库系统。④结论　系统容量大、易维护 ,具有交互界面 ,成卷理论性强、速度快 ,适于不同类型的考试及各类教员出题。

摘要：目的:利用RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞株skov3细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达及细胞的体外增殖活性。方法:根据EGFR mRNA序列设计特异性siRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入线性化质粒pSilencerTM2.1-U6neo,以HifectinII真核转染试剂将重组质粒转染至skov3细胞中,用RT-PCR和免疫细胞化学方法分别鉴定转染前后EGFR基因在mRNA和蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定转染前后细胞增殖活性的改变。结果:DNA测序证实EGFR siRNA表达载体的siRNA插入序列完全正确,该表达载体可特异性抑制EGFR基因的表达;转染后细胞的增殖受到抑制,其中第5天的抑制率达到30%(P<0.05)。结论:靶向EGFR的序列特异性siRNA真核表达载体可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达和细胞的增殖。

摘要：①目的　从海洋生物双齿围沙蚕消化道上皮细胞中获得编码丝氨酸内肽酶某一功能基因的克隆。②方法　以丝氨酸内肽酶高度保守位点设计引物 ,利用 5′cDNA末端快速扩增 (5′RACE)和 3′RACE的方法 ,分别获得该保守位点前后的片段 ,克隆、测序。③结果　获得一条长度为 5 12bp编码丝氨酸内肽酶相关基因的序列。

摘要：①目的　构建基因变构IL 2 (88ArgIL 2 )的重组克隆。②方法　将正常人的扁桃体细胞经PHA刺激后 ,获得cDNA文库 ,并以此为模板 ,经套式PCR扩增得IL 2的基因编码序列。测序确认正确后 ,设计含有突变位点的引物 ,经PCR定点诱变技术获得变构IL 2克隆并进行序列测定。③结果　IL 2基因定点诱变成功 ,并获得了基因变构IL 2重组克隆。④结论　IL 2重组基因变构克隆的构建为进一步在原核和真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型基因变构IL

摘要：①目的　利用基因工程技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出白细胞介素 2 1(IL 2 1)的编码基因 ,并在大肠杆菌中进行表达。②方法　以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板 ,经PCR获得IL 2 1的全基因片段。测序确认后 ,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物 ,经PCR获得IL 2 1成熟肽的编码基因。将此IL 2 1基因插入表达载体 pGEX4T 2 ,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达。 ③结果　琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论值的大小相等。SDS PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带。目的蛋白约占总菌体蛋白的 10 %。④结论　成功地构建了IL 2