摘要：背景：目前研究主要是利用大鼠等动物模型来探讨如伺生成脂肪细胞，对于体外分离培养的人骨髓间充质干细胞向脂肪细胞表型转化的实验报道不多。目的：拟在体外建立人骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的实验方法。设计、时间及地点：细胞形态学体外观察，于2006-12／2007-11在山东省青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料：骨髓来源于青岛大学医学院附属医院行自体干细胞移植治疗糖尿病患者的骨髓血，IBMX，地塞米松，吲哚美辛，胰岛素等诱导剂为Sigma公司产品。方法：无菌条件下抽取骨髓血，联合应用密度梯度离心法及贴壁筛选法，以单克隆形式分离培养人骨髓间充质干细胞，当细胞汇合至90％时胰蛋白酶消化传代。取第3代骨髓间充质干细胞，加入含10％胎牛血清、100U／mL青霉素、100mg／L链霉素、1μmol／L地寒米松、10mg／L胰岛素、0．5mmol／LIBMX、50μmol／L吲哚美辛的低糖DMEM培养基，作为体外特定微环境向脂肪细胞方向诱导分化，以单纯加入低糖DMEM培养基的细胞作为对照组。诱导3周后行油红O染色。主要观察指标：骨髓间充质于细胞的形态变化及细胞表面标志鉴定，脂滴形成及脂肪细胞分化率。结果：接种后第2-3天骨髓间充质干细胞开始贴壁，两端有较长突起，呈克隆样生长，形成大小不一的集落；传代后骨髓间充质干细胞呈长梭形，漩涡样生长；第3代细胞CD44呈阳性，不表达CD34,由克隆扩增出的骨髓间充质干细胞具有高度的同源性。诱导第3周油红O染色示胞核呈蓝色，脂滴呈橙红色，脂肪细胞分化率为（86．0±5．6）％，对照组未见脂滴形成。结论：含有地塞米松、IBMX及胰岛素等诱导剂的体外特定做环境对骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞具有诱导促进作用。

摘要：背景:随着人胰岛素基因及某些血糖调节酶基因的克隆,以及重组载体为基础的基因克隆技术的建立,使骨髓间充质干细胞更容易向胰岛素分泌细胞分化,且具有体外扩增明显而无致瘤性的优点。目的:利用胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)基因转染人骨髓间充质干细胞,观察基因修饰向胰岛样细胞的分化情况。设计、时间及地点:细胞-基因学体外实验,于2008-01/07在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于糖尿病患者,由青岛大学医学院附属医院干细胞中心提供。方法:利用反转录聚合酶链技术构建PDX-1基因的cDNA,酶切后插入经相同酶切处理的含绿色荧光蛋白的空白载体PEGFP-N1,构成重组质粒,再进行BglⅡ、HindⅢ双酶切筛选、鉴定并测序。Percoll法分离培养人骨髓间充质干细胞,当细胞汇合至90%时胰蛋白酶消化传代。转染前1d加入无抗生素培养基,将第3代细胞按5×105接种于6孔培养板,适量重组载体及脂质体溶解后混合形成DNA-脂质体混合物,培养5h后更换普通培养液。同时设立对照组,在6孔板中进行空白质粒转染。主要观察指标:脂质体介导转染后,荧光显微镜观察细胞转染情况;免疫荧光染色检测PDX-1蛋白的表达;双硫腙染色鉴定细胞分化情况。结果:通过测序、凝胶电泳、酶切等确定PDX-1基因已正确插入重组质粒。荧光显微镜下,成功转染的骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,质粒转染效率约70%。转染8d的细胞PDX-1呈阳性表达,对照组细胞PDX-1呈阴性。转染后14d可见半悬浮的胰岛样细胞团,双硫腙染色呈棕红色,而未转染的对照组细胞双硫腙染色不着色。结论:PDX-1基因重组载体能够导入人骨髓间充质干细胞且稳定表达,并可以转化为胰岛样细胞。

摘要：背景:已有实验表明益智胶囊可明显改善多发梗死性痴呆模型大鼠学习记忆能力,其对多发梗死性痴呆的疗效如何?对多发梗死性痴呆患者智力的改善是否有作用?目的:观察益智胶囊治疗多发梗死性痴呆患者的疗效及对智力的影响,并与吡拉西坦药物进行比较。设计:随机对照、双盲实验。单位:青岛大学医学院附属医院特需保健科,青岛大学医学院脑血管病研究所。对象:选择1999-10/2002-10青岛大学医学院附属医院特需保健科确诊为多发梗死性痴呆患者94例,男51例,女43例;年龄45～79岁。知情同意参加本实验。随机分为益智胶囊组47例和对照组47例。方法:益智胶囊组用药:益智胶囊成分为制何首乌14g,人参4g,石菖蒲8g,远志6g,水蛭10g,淫羊藿10g,知母6g,川芎12g,每粒胶囊含内容物0.228g,相当于生药10g。6粒/次,3次/d,口服。对照组用药:吡拉西坦,0.9g/次,3次/d,口服。两组均治疗3个月。参照卫生部1995年制定发布的中药新药治疗痴呆的临床研究指导原则中的疗效判定标准评估疗效(显效:症状、体征明显改善;证候积分减少≥70%;好转:症状、体征均有好转;证候积分减少≥30%;无效:症状、体征无明显改善,甚或加重;证候积分减少不足30%)。智力测验使用中国修订的韦氏成人智力量表:包括语言量表和操作量表两部分,共11个分测验。主要观察指标:①两组患者治疗效果。②两组患者治疗前后言语智商、操作智商、全智商。结果:参加实验94例,中途由于未按规定服药脱落12例,进入结果分析82例(益智胶囊组42例,对照组40例)。①治疗效果:益智胶囊组显效21例,有效14例,无效7例,总有效率达83%(35/42);对照组显效7例,有效15例,无效18例,总有效率55%(22/40)。益智胶囊组总有效率明显高于对照组(Z=3.549,P0.05)。治疗后益智胶囊组明显高于对照组[91.64±24.38,81.42±19.32;88.28±20.63,73.18±18.04;89.83±22.4,74.62±20.20,(t=5.198～6.958,P<0.001)]。结论:益智胶囊治疗多发梗死性痴呆有良好的疗效,在改善多发梗死性痴呆患者的智力方面优于吡拉西坦。