摘要：背景:肌腱组织细胞具有分泌胶原的功能,在伤口愈合及粘连中有重要的作用。知之较少的是乳酸对肌腱细胞的生物学作用。目的:探讨兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和乳酸对细胞的增殖、胶原产生和对转化生长因子β1,基础纤维母细胞生长因子,白细胞介素8分泌的影响。设计、时间和地点:随机对照动物实验,于2005-09/2006-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。材料:选用6只成年清洁级新西兰大白兔,雌雄不拘。方法:①进行兔腱鞘成纤维细胞、腱外膜和腱内膜成纤维样细胞的分离和培养,亚甲蓝染色观察细胞形态并鉴定3种细胞类型。②以加入25mmol/L乳酸培养细胞,测量细胞的数量。③比较加入25,50,100和200mmol/L乳酸后细胞胶原产生量和对转化生长因子β1,基础纤维母细胞生长因子,白细胞介素8分泌量,并与不加乳酸培养为对照比较。主要观察指标:使用免疫组化检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的产生,通过酶联免疫吸附试验定量检测不同剂量乳酸对细胞Ⅰ型胶原产生的影响及对转化生长因子β1,基础纤维母细胞生长因子,白细胞介素8产生的影响。结果:①25mmol/L乳酸使培养的细胞数量降低,3种细胞组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。②乳酸可以使实验组Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原组织产生明显多于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③当乳酸浓度增加至50mmol/L时,实验组3种细胞的Ⅰ型胶原量增加达最高峰,与乳酸浓度为0mmol/L时比较,差异有非常显著性意义(t=4.58,3.97,3.16,P<0.01);当乳酸浓度增加到100mmol/L和200mmol/L时,Ⅰ型胶原产生量明显减少。④实验组乳酸浓度为25mmol/L时对转化生长因子β1,基础纤维母细胞生长因子,白细胞介素8的分泌量增加,白细胞介素8的分泌量减少,与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:乳酸能增加腱鞘成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞的胶原产生量,增加的程度与乳酸的浓度有关,以50mmol/L时最佳,而这种刺激作用可能与增加转化生长因子β1,基础纤维母细胞生长因子和减少白细胞介素8的分泌量有关。

摘要：背景： 研究表明，转化生长因子β1在肌腱损伤愈合过程中增加了肌腱细胞胶原的合成和术后粘连的形成。目的：观察转化生长因子β1抗体对转化生长因子β诱导的肌腱细胞胶原产生及术后粘连形成的影响。 设计、时间及地点：随机分组观察实验，于2005-09/2006-06在同济医学院实验动物中心完成。材料：选择2~5月龄新西兰大白兔，体质量3.5~4.5 kg。转化生长因子由美国Santa Cruz B iotechnology公司提供。方法：取兔屈指肌腱分离肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞，将细胞随机分成2组，实验组加入1 μg/L 转化生长因子β后，再加入0.1，0.5，1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，对照组不添加任何试剂，酶联免疫吸附实验测定Ⅰ型胶原。取84只兔行中趾屈指肌腱切断吻合术，将其中36只兔随机分成3组，腱鞘内分别注入生理盐水、1.0，2.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，4，8周后取出肌腱行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察；余48只兔随机分成2组，腱鞘内分别注入生理盐水和1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，1，2，4，8周后取出肌腱，原位杂交方法测定肌腱转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达。 主要观察指标：各组兔肌腱细胞胶原产生及术后粘连情况。结果：酶联免疫吸附实验显示，转化生长因子β1能明显提高肌腱细胞Ⅰ型胶原的产生；转化生长因子β1抗体能降低3种细胞Ⅰ型胶原的产生，随抗体质量浓度增加，Ⅰ型胶原水平逐渐降低，且呈剂量依赖性；术后4，8周，与1.0，2.0 mg/L 转化生长因子β1组比较，生理盐水组屈趾肌腱滑动距离较短，模拟主动屈曲度明显受限（P 〈 0.05），最大抗断裂载荷各组间比较差异无显著性意义（P 〉 0.05）。扫描电镜和组织学观察结果显示，术后4，8 周生理盐水组胶原纤维排列紊乱，1.0，2.0 mg/L 转化生长因子β1组胶原纤维排列整齐。原位杂交结果显示，术后各时间点1.0 mg/L 转化生长因子β1组转化生长因子β1 和Ⅰ型胶原mRNA表达均低于生理盐水组（P 〈 0.05）。 结论：转化生长因子β1抗体能有效抑制转化生长因子β1在肌腱损伤修复中的作用，减少粘连形成。

摘要：目的构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TI MP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的蛋白的生物学活性。方法采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TI MP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TI MP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TI MP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TI MP1蛋白。结论成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。

摘要：背景:转化生长因子β是一种在组织损伤的修复和更新中具有多种生物学效应的细胞因子;腱鞘成纤维细胞和Ⅰ型胶原在肌腱愈合和粘连形成过程中起着重要的作用。目的:观察兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和转化生长因子β1对细胞的增殖和胶原产生的影响。设计:对比观察实验。单位:青岛大学医学院附属医院创伤外科。材料:实验于2004-07/2005-09在青岛大学医学院附属医院动物实验室完成,选用6只成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量3.5～4.5kg,由青岛市实验动物中心提供。胶原酶(sigma),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原抗体(Sigma),转化生长因子β1(武汉博士德生物公司)。方法:按文献方法进行将实验兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并培养,将3种细胞采用含血清培养液培养后,转移到不含血清的培养液中,分为实验组及对照组,实验组每孔加入5μg/L转化生长因子β1,对照组不予添加。主要观察指标:①用细胞计数法观察培养1,2,3,4d各组细胞增殖情况。②采用免疫细胞化学染色检测细胞培养4d后Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的产生;通过酶联免疫吸附试验法定量检测2组细胞的各型胶原含量。③采用RT-PCR定量检测2组细胞Ⅰ型胶原基因的表达。④酶联免疫吸附试验法测定不同剂量的转化生长因子β1(0,5,10,15和20μg/L)作用于3种细胞的Ⅰ型胶原含量。结果:①每种细胞培养1d后增长率相近,培养2～4d,腱鞘细胞增殖率显著增高,与其他两种细胞增殖率比较,差异有显著性意义(P<0.05)。②免疫细胞化学染色显示3种细胞均可以产生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原;酶联免疫吸附试验法定量测定胶原结果显示:各组腱鞘细胞产生的3种胶原量最多,且实验组各种细胞Ⅰ型胶原含量高于对照组(P<0.05～0.01)。③实验组腱鞘细胞Ⅰ型胶原基因表达比对照组增加1.3倍,差异有统计学意义(P<0.01),腱外膜细胞和腱内膜细胞表达也高于对照组(P<0.05)。④胶原产生量在5～10μg/L转化生长因子β1作用时明显增加,而转化生长因子β1增加到10～20μg/L时胶原产生量无明显改变。结论:转化生长因子β1可增加腱鞘成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞胶原的产生和Ⅰ型胶原的基因表达,在肌腱损伤后调节转化生长因子β1的水平可能对肌腱粘连的防止具有重要的作用。

摘要：背景:近年来,生长因子在肌腱愈合与粘连形成中的作用受到关注,其中转化生长因子与组织粘连与瘢痕形成的关系更倍受重视。目的:观察兔屈趾肌腱Ⅱ区伤口愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化。设计:随机对照动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院骨科。材料:选用清洁级成年新西兰大白兔60只,体质量4.0～4.5kg,雌雄不拘,由青岛市实验动物中心提供。所有动物的左前肢作为实验侧,同一动物右前肢作为对照侧。按术后1,7,14,21,28和56d6个时间点进行观察,每个时间点10只。其中6只进行原位杂交实验,4只进行免疫组织化学染色。实验过程中对动物的处置均符合动物伦理学标准。方法:实验于2005-09/2006-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。麻醉后将所有动物左前中趾Ⅱ区屈趾深肌腱切断并用使用标准Kessler缝合法修复,对照侧不进行干预。分别于术后1,7,14,21,28和56d麻醉后处死动物,实验侧沿原切口切开皮肤,切取肌腱与腱鞘。对照侧采取相同措施。主要观察指标:将肌腱与腱鞘组织进行原位杂交和免疫组织化学染色,观察转化生长因子β1的表达情况。结果:纳入的60只动物全部进入结果分析。①原位杂交结果:实验侧肌腱损伤后1d,转化生长因子β1 mRNA的表达明显升高,在肌腱损伤后的14～21d,转化生长因子β1 mRNA的表达持续升高达到最高峰,28d开始下降,56d时仍保持较高水平。修复部位周围的腱鞘组织转化生长因子β1 mRNA的表达水平更高,在相同时间点,腱鞘细胞内的转化生长因子β1 mRNA的表达均高于肌腱组织。对照侧肌腱组织和腱鞘内均存在着转化生长因子β1 mRNA的表达,但是水平较低。实验侧各时间点腱鞘与肌腱细胞转化生长因子β1 mRNA的表达明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。②免疫组织化学染色结果:实验侧动物转化生长因子β1蛋白信号的表达术后第1天开始增加,14～21d达到高峰,56d仍保持较高的水平。对照侧动物存在转化生长因子β1蛋白信号的表达,但表达水平较低。结论:正常无损伤的肌腱和腱鞘细胞能产生转化生长因子β1,当肌腱损伤后,细胞因子被激活,增加的细胞因子主要由肌腱细胞与腱鞘细胞产生,与肌腱的内、外源性愈合机制是一致的。

摘要：背景:特定条件下,骨髓间充质干细胞可向成骨细胞、成软骨细胞等细胞分化。但骨髓中间充质干细胞含量极低,体外如何获取、纯化并使其高效快速增殖是组织工程技术应用和推广的前提。目的:优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、鉴定,同时对其生物学性状进行观察。设计、时间和地点:观察性实验,于2005-09/2006-07在同济医学院实验动物中心完成。材料:兔龄2个月雌性新西兰纯种大耳白兔1只,用于间充质干细胞取材及原代培养。方法:采用密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代对抽取的骨髓液进行纯化。首先将培养瓶中的培养液吸出,加PBS后再加入2.5g/L胰酶约3.0mL,置于37℃培养箱中,两三分钟后在倒置显微镜下观察细胞形态,当细胞胞质回缩,细胞变瘦长,细胞间隙增大,同时有少量脱壁的圆形细胞时可终止消化,加入含血清的L-DMEM完全培养基即可。按1.0×108L-1的密度接种到一次性塑料培养瓶中进行培养。主要观察指标:间充质干细胞的形态、超微结构和表面标志物的表达;第1,3,5,8,10代细胞的增殖情况,并绘制出生长曲线。结果:①经密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代方法所得的间充质干细胞很纯,第3代和第5代细胞形态单一,细胞排列具有典型的漩涡状结构。②透射电镜观察显示间充质干细胞核大,以圆形或类圆形为主,胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞。③传代培养的间充质干细胞生长曲线呈S型,第1,3,5代细胞增殖能力强,细胞生长旺盛,而第8,10代细胞增殖明显减弱。④所分离培养的细胞表达CD44、CD90,不表达CD34,电镜观察为低分化细胞。结论:分离培养的细胞为间充质干细胞且成分单一,具有干细胞特性,第3代和第5代细胞很纯且其增殖能力强。

摘要：[目的]观察氨甲喋呤联合咖啡因对骨肉瘤细胞株的作用。[方法]以国人骨肉瘤细胞株OS-732细胞为研究对象,根据析因试验设计原因,设1无药组(阴性对照组),2咖啡因组,3氨甲喋呤组,4咖啡因、氨甲喋呤联合用药组(混合用药组)。培养一段时间后,分别采用MTT法细胞毒性试验和流式细胞仪(FCM)分析,观察3组药物对细胞的毒性(用残存细胞吸光度A值表示)及细胞周期的影响。[结果]FCM分析各组于48 h G2/M期细胞比例(%)为1组(23.210±0.416),2组为(23.120±0.440),3组为(28.770±0.531),4组(23.267±0.319),1组与2组间差异无统计学意义,其余各组间差异有统计学意义(P<0.01)。各组残存细胞吸光度A值为1组(0.411±0.006),2组(0.401±0.006);3组(0.304±0.007),4组(0.105±0.002),组间差异及交互作用有统计学意义(P<0.01)。[结论]氨甲喋呤与咖啡因具有协同作用,可增加氨甲喋呤对骨肉瘤细胞株的抑制率。

摘要：目的调查全国范围2015至2017年髋/膝关节置换手术量及因假体周围感染(PJI)接受翻修的比例及其病例资料。方法流行病学调查。于2018年11月至2019年12月采用方便抽样方式及自行设计的问卷调查全国41家医院;根据骨骼肌肉感染协会的标准诊断PJI。通过检索各医院住院患者数据库获得PJI患者的资料。从临床记录中提取问卷条目。收集后计算PJI翻修手术的比例,比较髋/膝PJI翻修患者临床资料的差异。结果全国36家医院(87.8%)报告了数据,2015至2017年共实施髋膝关节置换术99791例次,因PJI翻修946例次(0.96%)。髋PJI总翻修率为0.99%(481/48574),2015至2017年分别为0.97%(135/13963)、0.97%(153/15730)和1.07%(193/17881);膝PJI总翻修率为0.91%(465/51271),2015至2017年分别为0.90%(131/14650)、0.88%(155/17693)和0.94%(179/18982);黑龙江(2.2%,40/1805)、福建(2.2%,45/2017)、江苏(2.1%,85/3899)、甘肃(2.1%,29/1377)和重庆(1.8%,64/3523)报告的翻修率较高。结论2015至2017年全国34家医院总体感染翻修率为0.96%;其中髋PJI翻修率略高于膝PJI;不同地区医院翻修率存在差异。

摘要：目的 探讨采用小切口非对端缝合器修复急性闭合性跟腱断裂的近期疗效。方法 自行设计小切口非对端缝合器,并于2011年9月-2013年9月临床用于治疗22例符合选择标准的急性闭合性跟腱断裂患者。男16例,女6例;年龄22～55岁,平均32.6岁。左侧12例,右侧10例。致伤原因：运动伤16例,局部暴力致伤4例,高处坠落伤2例。MRI检查示跟腱远侧断端距跟骨结节距离40～70 mm,平均35 mm。受伤至手术时间0.5～7.0 d,平均4.2 d。术中于跟腱起点处作长约4 cm切口,置入小切口非对端缝合器夹持跟腱止点,引入2根不可吸收缝线将断端对合缝合。术后石膏托外固定6周。结果 术后切口均Ⅰ期愈合,均未出现腓肠神经损伤、切口感染并发症。22例均获随访,随访时间8～14个月,平均11个月。术后8个月按Arner-Lindholm疗效评定标准：获优19例,良3例。随访期间均无跟腱再次断裂发生。结论 采用小切口非对端缝合器修复急性闭合性跟腱断裂安全,术后患者可早期行功能锻炼,近期疗效满意。

摘要：目的:研究肩胛骨的解剖学特点,为肩胛骨骨折临床治疗及内固定物的设计提供参考.方法:取国人101副(男49副,女52副)肩胛骨标本,分别测量其各项指标.结果:肩胛骨各测量值同性别间左右两侧比较无差异;肩胛骨上角处厚度男女分别为4.12±1.03(2.16～7.05) mm和4.00±1.33(1.47～10.18) mm,肩胛冈与冈下窝夹角角度为136.71°±11.64°(101.9°～175.8°)和137.81°±11.78°(101.4°～166.0°),下角角度为50.08°±2.90°(42°～586)和49.37°±2.86°(42°～56°),以上测量值男女间比较差异无统计学意义;其余测量值男性均大于女性,差异均有统计学意义.结论:本次测量结果可为肩胛骨骨折手术过程中骨折复位以及肩胛骨内固定物的设计与制作提供参考,术前参照此数据对钢板预塑形可有效缩短手术时间,并降低反复弯折造成钢板韧性降低疲劳断裂的风险.本研究同时丰富了国人体质调查的资料.