摘要：背景:目前CRISPR/Cas9结合Cre-loxP技术制备溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)基因敲除小鼠的实验方法非常少见。目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠基因组中BRD4基因片段,构建BRD4基因敲除小鼠。方法:根据BRD4基因的外显子序列,设计一段gRNA并合成。gRNA体外转录后和Cas9 mRNA以及含loxp位点的质粒共同注射入受精卵细胞中,Cas9通过识别gRNA先导链切割目的片段,然后loxp插入到切割位点,在与Cre配种后,Cre酶会切割loxp位点实现最终的特异性删除效果。注射后的受精卵细胞移植至C57BL/6N雌性小鼠获得子代小鼠,对子代小鼠进行测序鉴定其基因型。将成功导入loxp位点的小鼠BRD4-loxP^(+/-)(F0代)与野生型C57BL/6N小鼠配繁后筛选可稳定遗传的小鼠BRD4-loxP^(+/-)(F1代),BRD4-loxP^(+/-)小鼠一部分互相交配,一部分与CAGGCre-ER^(TM)鼠交配,获得BRD4-loxP^(+/+)小鼠和BRD4-loxP^(+/-)、CAGGCre-ER^(TM)共表达的小鼠(F2代);F2代小鼠互相交配可以获得纯合子BRD4-loxP^(+/+)、CAGGCre-ER^(TM)小鼠。将6-8周纯合子小鼠腹腔注射它莫昔芬75 mg/kg(溶于玉米油中),连续7 d即可完成BRD4基因的诱导敲除。取基因敲除后的小鼠尾部片段,吸附柱法提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测BRD4基因片段在小鼠尾部组织中的表达。结果与结论:①通过PCR筛选鉴定出F1代小鼠7,8,9,10,12,14,16,19,20,21,25,42,43和47号小鼠为成功插入2条loxP片段等位基因的杂合型小鼠;②F2代交互繁育出的F3代纯合子用它莫昔芬诱导后,经PCR凝胶电泳验证表明纯合子小鼠中BRD4基因片段被成功敲除;③提示利用CRISPR/Cas9技术结合Cre-loxP技术成功构建出了BRD4基因敲除小鼠。

摘要：[目的]观察氨甲喋呤联合咖啡因对骨肉瘤细胞株的作用。[方法]以国人骨肉瘤细胞株OS-732细胞为研究对象,根据析因试验设计原因,设1无药组(阴性对照组),2咖啡因组,3氨甲喋呤组,4咖啡因、氨甲喋呤联合用药组(混合用药组)。培养一段时间后,分别采用MTT法细胞毒性试验和流式细胞仪(FCM)分析,观察3组药物对细胞的毒性(用残存细胞吸光度A值表示)及细胞周期的影响。[结果]FCM分析各组于48 h G2/M期细胞比例(%)为1组(23.210±0.416),2组为(23.120±0.440),3组为(28.770±0.531),4组(23.267±0.319),1组与2组间差异无统计学意义,其余各组间差异有统计学意义(P<0.01)。各组残存细胞吸光度A值为1组(0.411±0.006),2组(0.401±0.006);3组(0.304±0.007),4组(0.105±0.002),组间差异及交互作用有统计学意义(P<0.01)。[结论]氨甲喋呤与咖啡因具有协同作用,可增加氨甲喋呤对骨肉瘤细胞株的抑制率。

摘要：目的利用实时荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法以MRSA mecA基因为靶序列设计引物和探针,以自MRSA中提取的DNA为模板,优化引物、探针的浓度和退火温度,同时验证方法的特异性、敏感性、重复性、灵敏度和线性范围,并与K-B法和微量琼脂稀释法(MIC)相比较。结果建立的反应体系在上游引物、下游引物浓度为0.2 mmol/L、退火温度为55℃时,具有良好的特异性和敏感性,与大肠埃希菌等8种细菌均无交叉反应;对MRSA检测的灵敏度达到10 CFU/ml。结论建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对MRSA做出快速准确的报告,实现准确、快速和定量检测。

摘要：目的探讨双能光子CT在痛风评估中的价值。方法回顾性分析临床确诊为痛风患者111例,其中男105例,女6例。行双能量CT扫描获得CT原始图像和GOUT后处理图像,采用配对设计秩和检验统计法分析CT原始图像和GOUT后处理图像显示的尿酸盐结晶数目。对双能CT测得尿酸盐结晶数目与患者的病程和血尿酸水平分别行Spearman秩相关分析。结果51例(45.95%)位于足部,其中30例(27.03%)累及第一跖趾关节;41例(36.94%)位于膝关节,12例(10.81%)位于踝关节,4例(3.60%)位于手部,2例(1.80%)位于腕部,1例(0.90%)位于腰椎。CT原始图像39例(35.14%)未见异常密度结节,25例(22.52%)见单发高密度结节,47例(42.34%)见多发高密度结节;后处理图像45例(40.54%)见单发尿酸盐结节,66例(59.46%)见多发尿酸盐结节。15例(13.51%)CT原始图像和后处理图像发现结节数目一致,96例(86.49%)后处理图像发现结节多于CT原始图像。CT原始图像和后处理图像发现结节数目差异有统计学意义(Z=-8.522,P<0.001)。病例组病程3 d~30年,血尿酸水平319~800μmol/L,双能CT测得尿酸盐结晶数目与病程和血尿酸水平均为中度正相关(r_s分别为0.465,0.433,P均<0.001)。结论双能光子CT对于痛风患者尿酸盐结晶有较高检出率,对于疑似痛风患者行双能CT检查有助于痛风的确诊。

摘要：背景:气质在儿童心理发展中发挥重要的作用。气质主要由遗传所决定,但也受一些其他因素的影响,研究其影响因素,进而从影响因素入手进行气质培育对于促进儿童心理发展和减少行为问题的发生具有重要意义。目的:分析母乳喂养与4～5岁儿童气质特征之间的关系。设计:整群抽样调查。单位:青岛大学医学院附属医院、淄博市中心医院、青岛大学医学院儿科研究所。对象:选择2005-03/06淄博市市内4区的8所幼儿园4～5岁儿童737名,其中男孩399名,女孩338名。调查对象及其家属对本实验目的均知情。方法:采用NYLS3～7岁儿童气质量表和自制的儿童气质影响因素问卷,采用分层整群抽样的方法,对737名儿童进行调查。对气质类型9个维度与生后4个月内喂养类型、母乳喂养持续时间的相关性进行分析;以气质各纬度为因变量,以生后4个月内喂养类型、母乳喂养持续时间等为自变量进行多元逐步回归分析。主要观察指标:气质纬度、生后4个月内喂养类型和母乳喂养持续时间。结果:纳入儿童737名,全部进入结果分析。相关分析发现气质维度适应度与生后4个月内主要喂奶粉正相关(r=0.084,P=0.030),规律性和注意分散与只喂奶粉负相关(r=-0.087,-0.075,P=0.022,0.047),活动水平与只喂母乳正相关,与母乳与奶粉量相等负相关(r=0.084,-0.077,P=0.030,0.045),趋避性与主要喂母乳负相关(r=-0.097,P=0.012)。气质维度规律性、情绪本质、活动水平与母乳喂养持续时间4～6个月负相关(r=-0.082,-0.102,-0.153,P=0.036,0.009,0.001),情绪本质、活动水平与母乳喂养持续时间≥9个月正相关(r=0.089,0.088,P=0.024,0.025)。校正家庭结构、父母亲受教育水平等因素后,适应度的影响因素是主要喂奶粉;反应强度的影响因素是母乳喂养持续时间4～6个月和主要喂母乳;规律性的影响因素是母乳喂养持续时间7～9个月和只喂奶粉;活动水平的影响因素是母乳与奶粉等量和母乳喂养持续时间7～9个月;情绪本质的影响因素是只喂奶粉和母乳喂养持续时间7～9个月;趋避性的影响因素是主要喂母乳和母乳与奶粉等量;注意分散的影响因素是主要喂奶粉。结论:婴儿生后4个月内喂养类型和母乳喂养持续时间与4～5岁儿童气质维度发展有关,在气质培养与干预中应充分考虑母乳喂养的作用。

摘要：背景:有研究结果显示运动功能的改善与认知功能密切相关,认知状态好者其运动功能恢复好,早期认知功能的评定可预测运动功能的预后,对患者各项综合能力,社交能力及生活质量的提高均十分有益。目的:观察脑卒中患者认知功能与偏瘫和失语的关系,分析急性脑卒中患者早期认知功能障碍的影响因素。设计:对比观察。单位:泰安市中心医院神经内科和青岛大学医学院附属医院神经内科。对象:选择2002-01/2005-05泰安市中心医院神经内科和青岛大学医学院附属医院神经内科住院的急性脑卒中患者50例,其中男32例,女18例,年龄34～78岁。均符合全国第四次脑血管病会议急性脑卒中的诊断标准,并均经脑CT或MRI证实;且均对评估和检测项目知情同意。其中偏瘫患者44例,男30例,女14例,年龄34～78岁。失语症患者30例,男17例,女13例;年龄34～78岁。非失语症患者20例,男14例,女6例;年龄38～70岁。方法:①采用西方失语成套测验检查法评定是否失语。以失语商93.8为非失语。②采用Fugl-Meyer运动功能评分法评定运动功能。上下肢合计100分,分数越高表示功能越好。③采用洛文斯顿作业治疗用认知成套测验法评定认知功能。内容分为定向力、知觉能力、视运动组织能力、思维运作能力4大项检查,共22个分测验。分数越高表示认知功能越好。功能评定时间均为发病后半个月。样本组间均数行t检验,多组间均数比较用单因素方差分析,偏瘫Fugl-Meyer积分与认知功能评分结果相关性处理采用多元相关分析。主要观察指标:①脑卒中患者认知功能与偏瘫的相关性。②脑卒中患者认知功能与失语的关系。结果:急性脑卒中患者50例均进入结果分析。①脑卒中患者认知功能与偏瘫的相关性:44例偏瘫患者认知功能洛文斯顿作业治疗用认知成套测验法检查内容中的定向力、知觉能力、视运动组织能力积分和认知功能总积分与Fugl-Meyer运动功能评分法积分呈显著正相关(r=0.534,0.598,0.500,0.548,P0.05)。②脑卒中患者认知功能与失语的关系押失语症患者认知功能洛文斯顿作业治疗用认知成套测验法中的定向力、知觉能力、视运动组织能力、思维运作和认知功能总积分分别为(4.60±2.37),(15.10±6.02),(14.00±6.93),(12.33±6.77),(1.83±1.09)分,明显低于非失语症患者眼(7.30±1.08),(23.20±1.11),(24.25±4.08),(24.20±5.43),(3.50±0.76),t=5.44～7.197熏P<0.05演。结论押认知功能障碍较重的急性脑卒中患者偏瘫程度较重;合并失语症的脑卒中患者认知功能显著降低。

摘要：针对肺部疾病初筛实践中CT图像异常先验判读机制的效能性问题,设计了一种基于深度卷积神经网络的异常肺部CT图像初筛平台并开展了临床实践验证。该平台使用CT扫描设备采集肺部CT图像,形成数据池;利用深度卷积神经网络对数据池训练集进行肺部异常特征学习,构建时间正序下的肺部CT图像异常特征全息感知机制;在Inception V3模型中结合Google Net网络结构,实现参数自动调整优化,达到对肺部疾病精准初筛的目的。使用青岛市中心医院临床肺部CT图像集进行实验,结果表明,该平台在肺部CT图像异常判读均值准确率达96.52%,肺部疾病初筛均值有效率达93.07%,可实现肺部疾病的初筛工作。

摘要：针对具有旋转结构的医疗设备其转动侧需要直流供电时,常使用导电滑环而可能会存在的磨损等问题,设计了一种无需导电滑环的医用设备非接触式调压稳压电源。利用LLC的电气隔离特性以及电压增益特点,实现了一种一次侧、二次侧完全隔离并可以相对旋转的电路。通过实验实现了非接触式调压稳压,为该类型设备供电提供了一种可行的思路。

摘要：目的:探讨股骨粗隆间骨折数字化虚拟手术设计系统建立的方法及其在临床应用中的价值。方法:选取20例股骨粗隆间骨折患者,行CT扫描,采用Mimics三维重建软件,在重建出骨折三维数字化模型并进行相关测量基础上,模拟复位,将三维重建的螺钉、钢板内固定模板与之拟合,明确内固定置入的方向、长度、角度等数据,建立数字化手术设计系统,初步指导临床应用,并与术后影像学资料进行对比分析。结果:重建出股骨粗隆间骨折三维数字化虚拟可视模型,并可进行多种长度、角度、体积等数字化测量,与数字化内固定模板拟合良好,可初步用于股骨粗隆间骨折的数字化手术模拟及手术治疗方案的选择。结论:初步建立了股骨粗隆间骨折数字化虚拟手术设计系统,初步临床应用效果良好。

摘要：目的:探讨3D打印技术在骨肿瘤术前规划中的应用方法及价值。方法:选取1例股骨下段肿瘤患者(软骨肉瘤),进行CT扫描股骨下段,层厚0.625mm,得到二维原始图像以DICOM格式输出,采用Mimics三维重建软件,重建出股骨下段三维模型,通过蒙版编辑(Edit Masks)重建股骨下段肿瘤的三维模型,通过布尔运算,得出股骨下段去除肿瘤的三维模型,3D打印出股骨下段带肿瘤、去肿瘤及肿瘤的三维仿真模型。在重建的股骨下段三维模型基础上,进行肿瘤大小的测量,截取植入骨块大小的估算,设计内固定钢板的预折弯、螺钉置入的最佳位置并精确测量螺钉的长度、角度等数据,初步指导临床应用,并与术后影像学资料进行对比分析。结果:手术用时及出血量减少了近一半,实现了微创、精准的手术目标。术后X光片检查显示,植骨块位置良好,恢复了骨肿瘤区域解剖结构,内固定物放置位置准确。结论:3D打印模型能够很好地显示骨肿瘤的解剖关系,可以有效帮助医生进行术前手术规划,初步临床应用效果良好。