摘要：目的通过RNA干扰沉默法尼基转移酶(FTase),探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法针对FTase设计并构建3条小干扰RNA(siRNA),转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞(实验组),同时设置阴性对照组(转染NC-siRNA)和空白对照组(不转染siRNA)。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降(P0.05),p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降(P0.05);实验组的细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.05)。结论体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。

摘要：目的通过体外实验探讨法尼基转移酶(FTase)对涎腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞迁移侵袭及上皮间充质转化(EMT)的作用及其机制。方法针对人FTase基因序列设计构建3条小干扰RNA(si-RNA),采用处于对数生长期的SACC-LM及SACC-83细胞,经脂质体瞬时转染技术抑制细胞FTase表达,分别命名为FTase-siRNA-1组、FTase-siRNA-2组、FTase-siRNA-3组,同时设置阴性对照组(NC-siRNA),空白对照组(仅加入转染试剂)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测FTase、HRAS的mRNA表达,选择沉默效率最高的FTase-siRNA进行后续实验;蛋白质免疫印迹法检测FTase、HRAS、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、p65、磷酸化p65(Ser563)、上皮钙依赖黏附蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达以及HRAS膜蛋白表达;Transwell小室及细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果与空白对照组及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组mRNA及蛋白相对表达量均降低(P0.05),HRAS膜蛋白相对表达量降低(P0.05),但磷酸化AKT、磷酸化p65蛋白相对表达量降低;与空白及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组细胞侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05)。结论体外沉默FTase可有效抑制人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83的侵袭、迁移能力,其作用可能是通过干扰HRAS膜蛋白的定位,调控RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路,介导EMT而实现。

摘要：目的通过RNA干扰技术沉默Rce1基因,探讨Rce1对舌癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法体外培养舌鳞状细胞癌Cal-27和SCC-4细胞,设计合成Rce1基因的小干扰RNA(si RNA),采用脂质体载体瞬时转染沉默Rce1基因。根据转染的si RNA不同,将实验组分为Rce1-si RNA-1组、Rce1-si RNA-2组、Rce1-si RNA-3组,脂质体载体分别转染相对应序列的si RNA。脂质体转染si CON作为阴性对照组,不转染si RNA作为空白对照组。采用实时定量聚合酶链反应检测各组Rce1、Rho A以及K-Ras基因的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测Rce1、Rho A、K-Ras、金属基质蛋白酶(MMP)-2及MMP-9的表达,采用体外侵袭实验检测Cal-27和SCC-4的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果实时定量聚合酶链反应及Western blot检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组的Rce1基因及蛋白表达均下调(P0.05),MMP-2、MMP-9表达下降(P<0.05)。体外侵袭实验表明,与对照组相比,实验组在聚碳酯膜上的细胞总数明显减少(P<0.05)。细胞划痕实验表明,实验组划痕处细胞闭合时间明显长于对照组(P<0.05)。结论体外沉默Rce1可以有效下调其在舌癌细胞Cal-27和SCC-4中的表达水平,降低迁移和侵袭能力。

摘要：目的:观察细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在舌鳞癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系,探讨体外沉默Cdc42基因对舌鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法:通过免疫组织化学法检测Cdc42基因在舌鳞癌及癌旁组织中的表达,分析Cdc42表达与舌鳞癌临床病理学参数的相关性及对预后的影响。将人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞随机分为3组,分别为Cdc42-siRNA组、阴性对照组和空白对照组。设计并构建针对人Cdc42基因序列的3条小干扰RNA(siRNA),应用脂质体介导转染方法分别将Cdc42-siRNA和NCsiRNA转染至Cdc42-siRNA组和阴性对照组,空白对照组仅加入转染试剂。通过实时荧光定量反转录PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Cdc42的mRNA及蛋白表达,将沉默效率最高的Cdc42-siRNA转染组作为后续实验组。Western blot检测EMT及MAPK JNK/p38通路相关蛋白的表达,CCK-8、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Cdc42在44例舌鳞癌患者中的阳性表达率为70.5%(31/44),在癌旁组织中的阳性率为38.6%(17/44),差异具有统计学意义(P0.05)。体外实验中,Cdc42-siRNA组细胞Cdc42 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),而p-p38-MAPK、p-JNK蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Cdc42-siRNA组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:舌鳞癌患者中Cdc42表达增加,并且其表达与颈淋巴结转移、临床分期及浸润深度相关。沉默Cdc42可能通过阻断MAPK JNK/p38通路抑制舌鳞癌细胞EMT过程,进而抑制侵袭迁移,同时可负向调节舌鳞癌细胞增殖。

摘要：目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰技术体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Icmt)基因,探讨体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡能力的影响。方法针对人Icmt基因序列设计并构建3条siRNA,经脂质体瞬时转染技术转染抑制TSCC细胞系CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,同时设置空白对照组(只加入转染试剂,不加入siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA)。应用荧光组(荧光基团Cy3标记siRNA)检测siRNA转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测沉默Icmt后各组细胞的Icmt、RhoA mRNA表达,选取沉默效率最高组作为实验组进行后续实验。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、RhoA的蛋白表达及RhoA膜蛋白的表达、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖能力、细胞周期变化;Annexin V-APC/碘化丙啶(PI)荧光双染法检测各组细胞的凋亡能力。采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞Icmt mRNA和蛋白表达下降(P0.05),但RhoA膜蛋白表达显著降低(P0.05),但ERK的磷酸化水平明显下降(P<0.05)。CAL-27及SCC-4细胞周期发生改变,细胞比例在G1期增加,S期降低,G2期无明显改变,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05);细胞增殖活性下降、凋亡能力增加。结论体外沉默TSCC细胞Icmt基因,可降低RhoA膜靶向定位,抑制细胞增殖、诱导凋亡,提示Icmt在TSCC增殖和凋亡中可能发挥重要作用,可能作为TSCC基因治疗的分子靶点。

摘要：目的应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113和SCC-4中Rho A基因的表达,探讨Rho A基因表达下调对舌癌细胞侵袭的影响。方法登录Genbank数据库确定人Rho A基因序列,针对Rho A的基因序列设计短链RNA,利用Lipofectamine2000介导法将Rho A-si RNA转染至舌癌Tca8113和SCC-4细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后的舌癌细胞中Rho A m RNA的表达,蛋白质印迹法检测Rho A、半乳糖凝集素-3(galectin-3)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果舌癌细胞转染Rho A-si RNA后,Rho A的基因和蛋白表达下降,galectin-3和MMP-9蛋白表达下降,细胞体外侵袭能力降低。结论 Rho A-si RNA可以有效地抑制舌癌Tca8113和SCC-4细胞中Rho A的表达,通过降低galectin-3和MMP-9的表达从而降低细胞的侵袭能力。Rho A在舌癌的侵袭和转移中可能发挥重要的作用。

摘要：目的探讨数字三维重建联合3D打印技术在血管化腓骨移植修复重建下颌骨缺损手术的术前规划、术中指导及医患沟通中的临床应用价值。方法选取下颌骨切除手术26例,其中包括口腔恶性肿瘤11例,下颌骨成釉细胞瘤7例,颌骨囊肿病变5例,下颌骨牙源性角化囊性瘤3例。所有病人术前均行头颅三维CT扫描,获得DICOM数据,行三维建模,重建出下颌骨三维数字模型,并转换为STL格式,通过激光快速3D成型打印机制作三维1:1实物模型。对下颌骨膨隆、变形、破坏者,通过镜像及修补技术进行数字三维重建,根据对侧下颌骨反求出患侧复原模型,3D打印出重建的镜像模型。术前应用3D打印模型与病人及其家属沟通并进行3D打印模型的效度验证。行下颌骨部分切除的病例,在3D打印原型上进行手术设计,制定手术方案,确定截骨线。在3D打印镜像模型上,进行移植腓骨的制备设计,对重建固定板进行术前精准预弯。按照术前手术模拟、规划实施手术,术后进行验证、评估及随访。结果术前应用3D模型获得了良好的沟通效果,病人及其家属理解度和满意度高。应用数字三维重建联合3D打印辅助手术规划,实际手术与模拟手术的效果一致,节省了术中弯制重建板的时间,使得移植腓骨与下颌骨断端精密接合,术后面型恢复良好。双层移植腓骨良好恢复了下颌骨高度,二期牙种植后恢复了颌面外观及咀嚼功能。结论数字三维重建联合3D打印能全方位、直观、精确地显示下颌骨的三维解剖结构以及病灶情况,对手术有极大的临床指导价值,实现下颌骨缺损的精准移植腓骨修复,获得了优良的临床效果,极大地提升了显微外科游离组织瓣修复重建的临床水平。

摘要：目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用脂质体载体瞬时转染Icmt-siRNA抑制舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,将实验组分为Icmt-siRNA-1组、Icmt-siRNA-2组、Icmt-siRNA-3组;同时将脂质体转染NC-siRNA作为阴性对照组,只加转染试剂作为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印记法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、K-Ras的mRNA和蛋白表达及K-Ras膜蛋白的表达;Western免疫印迹检测Cyclin D1、p21、Akt、p-Akt蛋白表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性、周期变化和凋亡能力。应用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR和Western免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,实验组Icmt mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),K-Ras膜蛋白表达显著下降(P0.05),但p-Akt表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖活性检测结果表明,与对照组相比,实验组细胞增殖能力显著下降(P<0.05);流式细胞术检测结果表明,实验组细胞凋亡水平较对照组显著增加,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05)。结论:体外沉默Icmt基因可有效抑制CAL-27和SCC-4细胞增殖且诱导凋亡,其作用可能是通过影响K-Ras膜蛋白靶向膜定位,负性调控细胞周期和下调Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路而实现。

摘要：目的评价两种不同牙龈翻瓣设计(舌向四角瓣与传统三角瓣)对下颌低位埋伏第三磨牙拔除术后反应的影响。方法选取2020年9月至2021年4月就诊于青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心的53例要求拔除双侧下颌低位埋伏第三磨牙的患者作为研究对象,采用随机、临床自身对照临床试验设计,将患者两侧患牙一侧采用舌向四角瓣,另一侧采用传统三角瓣法拔除。记录两组手术时间、术后疼痛、张口受限、面颊部肿胀的发生情况,并进行比较分析。结果舌向四角瓣组手术时间长于传统三角瓣组(P0.05)。术后5d内,舌向四角瓣组疼痛强度及服用镇痛药数量明显低于传统三角瓣组(P<0.05)。结论虽然采用舌向四角瓣手术时间长于传统三角瓣,但舌侧四角瓣较传统三角瓣术后反应明显降低。

摘要：目的 通过对比采用传统牙冠模型与根骨数字化的三维整合模型进行虚拟排牙的牙根位置,探讨根骨信息在虚拟排牙中的重要性。方法 选择骨性偏颌患者11例。获取治疗前口内扫描牙冠数据,即治疗前传统牙颌模型,将CBCT根骨信息与传统牙颌模型配准、整合得到治疗前三维整合模型。由专业排牙技师1名分别采用传统牙颌模型与三维整合模型进行虚拟排牙,得到P1、P2目标位。同时,将根骨信息与P1、P2目标位整合,得到P1与P2的三维整合模型。比较P1、P2的移动设计、牙根外露与牙根平行度差异。结果 P1存在明显的牙根外露与牙根不平行,而P2可显著改善。P2相对P1移动变化集中于偏斜侧牙齿、部分非偏斜侧后牙的颊舌向整体移动、转矩,部分前牙的近远中整体移动。结论 包含根骨信息的隐形矫治设计系统可以帮助优化目标位,改善骨开窗、骨开裂、牙根平行度欠佳等问题。