摘要：目的构建鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株鼠毒素基因缺失的突变菌株,建立鼠疫耶尔森氏杆菌的基因敲除方法,为研究鼠疫耶尔森氏杆菌基因奠定基础。方法选择1株鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株(菌株号为0614F)为实验菌株。利用Artemis软件阅读鼠疫菌91001株基因序列,查找并导出鼠毒素(Ymt)及其两侧100个基因序列。设计同源区突变盒引物和鉴定引物,采用λ-Red系统一步法敲除0614F鼠毒素编码基因并进行鉴定。结果质粒提取试剂盒提取Escherichia coli DH5α培养物pKD46质粒50μl,浓度为121.1ng/μl;同源区突变盒引物扩增含有氯霉素抗性基因菌株DNA,PCR产物进行1%琼脂糖电泳凝胶电泳鉴定后切胶,用胶回收试剂盒提取氯霉素线性突变盒50μl,浓度为724ng/μl;0614F菌株经两次电转化获得具有氨苄青霉素和氯霉素抗性的菌株,用相应鉴定引物进行PCR鉴定,获得菌株鉴定为鼠毒素基因缺失株0614F-△Ymt。结论应用基因敲除技术对鼠疫耶尔森氏杆菌鼠毒素基因定向突变成功,为青藏高原型鼠疫菌株新型疫苗研究奠定了实验基础。

摘要：目的了解海南州鼠疫疫源地分离的鼠疫菌耐消毒剂及耐药相关基因携带状况,以指导该疫源地的鼠疫防治。方法根据美国国立生物信息中心(NCBI)公布的耐消毒剂qacEdelta1-sul1基因、耐氨基糖苷类链霉素strA、strB基因、耐β-内酰胺类抗菌药物tem、shv、ctx-m基因及耐磺胺类药物sull、sul2、sul3基因序列,分别在每个基因上设计一对引物,逐一对87株分离自青海省海南州鼠疫自然疫源地的鼠疫菌的DNA进行PCR扩增,扩增产物进行凝胶电泳,用凝胶成像系统拍照后读取结果。结果 PCR扩增结果显示,阴性对照和阳性对照均成立,87株鼠疫菌的PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳,均未在预计的DNA标志物(Mr)处出现条带,其PCR扩增结果均为阴性。1954-2016年期间从青海省海南州共和县、贵德县、同德县、兴海县、贵南县分离的鼠疫菌株中尚未发现有耐链霉素、磺胺类药、β-内酰胺类抗菌药物及耐消毒剂等相关基因的菌株。结论海南州鼠疫疫源地分离的87株鼠疫菌不具有耐消毒剂及耐药相关基因的特征。

摘要：目的观察云南玉龙鼠疫菌株D106004和青藏高原鼠疫菌株Z176003在基因组上的差异及遗传学特征。方法应用BLAST软件,将鼠疫D106004和Z176003菌株编码序列(CDS)进行差异比对。选取22个差异CDS,设计相应引物22对,在来源不同(青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地和云南齐氏姬鼠、大绒鼠鼠疫自然疫源地)、时间跨度约50年、分布地区包括西藏、青海、四川、甘肃、云南的6种生态型119株鼠疫代表性菌株进行PCR扩增,并将PCR产物测序验证。菌株均来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室。结果119株鼠疫代表性菌株的22个差异CDS,PCR扩增产物实际测序结果累计序列长度为2.13 × 10^6 bp;差异CDS在云南玉龙D106004与青藏高原Z176003菌株所属疫源地内119株鼠疫代表性菌株中同源性较高,78.2%(2 047/2 618)序列不存在差异,21.8%(571/2 618)序列上存在缺失、错义、移码3类基因突变差异。差异特征在疫源地6种生态型鼠疫菌株中稳定存在,呈现6种不同的地理分布。结论云南玉龙D106004和青藏高原Z176003菌株,二者同源性较高,亲缘关系相近,基因组上存在的差异较小,但不同生态型菌株的遗传性特征稳定存在.

摘要：目的对青海省果洛藏族自治州(果洛州)鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)进行病原学分析及耐药相关基因检测,为该地区的鼠疫防治提供科学依据。方法对1978-2016年间青海省果洛州分离的13株鼠疫菌进行糖醇类酵解试验、毒力测定、毒力因子检测、质粒分析及鼠疫菌基因差异区段(DFR)分型等研究,并根据美国国立生物信息中心(NCBI)公布的耐氨基糖苷类链霉素strA、strB基因、耐β-内酰胺类抗菌药物tem、ctx-m基因和耐磺胺类药物sul1、sul2基因序列,在每个基因上设计1对引物,以该13株鼠疫菌DNA为模板分别进行上述6个耐药基因的PCR扩增,以检测其是否携带耐药相关基因。结果根据生化分型指标,13株被试菌株中9株为青藏高原型,4株为祁连山型。毒力测定结果显示,13株被试菌株均为强毒级别的鼠疫菌,13株菌中有11株具备鼠疫菌特有的4个毒力因子,被试菌株携带相对分子质量分别为6×106、45×106、65×106和6×106、45×106、52×106的2种质粒谱。DFR分为4个基因组型,5型(7株)、8型(4株)、36型和01b型(各1株)。耐药基因检测结果显示,阴性对照和阳性对照均成立的情况下,所测13株鼠疫菌的PCR检测结果均为阴性,未发现耐链霉素、耐β-内酰胺类抗菌药物及耐磺胺类药物的菌株。结论青海省果洛州分离的鼠疫菌具备青藏高原鼠疫病原体特征,鼠疫菌的毒力强,但尚未出现耐抗菌药物菌株,但仍需加强鼠疫监测和鼠疫防治知识宣传力度,严防动物间鼠疫波及人间。

摘要：目的研发旱獭信息采集报告系统,提高旱獭动物鼠疫监测效力,为鼠疫防控策略的制定和基础研究提供相关科学依据。方法通过对2014年青海省境内旱獭鼠疫疫点的现场调查,使用全球定位系统(GPS)采集旱獭的空间分布定位数据,包括玉树藏族自治州,果洛藏族自治州,乌兰、尖扎、兴海和祁连县等地区的352个样点,使用高程、坡度、坡向、植被覆盖度和草地类型5个环境变量以及样点经纬度,利用ArcGIS 10.2软件将旱獭活动样点数据展示到CGCS2000坐标系中。通过分析喜马拉雅旱獭调查监测工作需求及工作流程,开展数据库模型设计和系统结构设计,构建系统模型。通过应用ArcGIS Runtime SDK for Android相关组件,Spatialite移动端支持的轻量空间数据库,在Eclipse开发环境中完成开发,实现多种数据与移动地理信息系统平台集成形成旱獭信息采集系统。结果创建旱獭信息采集系统V3.0,结合青海省鼠疫自然疫源地喜马拉雅旱獭生境相关信息可以实现以下基本功能:鼠疫监测调查数据的管理与分析;生成空间数据、属性数据及与其相关联的图片,空间数据和属性数据用数据库文件存储和导出;历史疫点数据导入、路线规划、实时定位导航和轨迹回放功能等。通过应用青海省旱獭信息采集系统,改变了传统纸质合并GPS的作业方式,减轻了调查人员的作业负担,有效提高了作业效率。通过统一的调查手段和方式确保了数据的一致性,可做到规范化和标准化。结论旱獭信息采集报告系统V3.0能有效改进旱獭鼠疫监测方式,提高动物鼠疫疫情发现的概率,为动物和人间鼠疫疫情应急处置提供辅助决策。