摘要：目的了解青海省玉树藏族自治州(简称玉树州)鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)的基因分型,探讨其遗传特征。方法选取1963-2007年分离自玉树州鼠疫自然疫源地的44株代表性鼠疫菌,提取DNA,针对CRISPR的3个位点(YPa、YPb和YPc)设计引物,进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序及分析,鉴定CRISPR间区序列(spacer),确定CRISPR基因型和类群。结果44株鼠疫菌在CRISPR 3个位点上共有23种spacer,YPa位点14种、YPb位点6种、YPc位点3种,其中有2种新spacer,a106和a107。根据spacer阵列形式,44株鼠疫菌被分为15个CRISPR基因型、6个CRISPR类群,6个类群分别为Cb4、Cc3′、Ca7、Ca7′、Ca△5′和Ca35′,其中Ca7为主要流行类群(34株)。结论玉树州鼠疫菌CRISPR位点具有多种基因型,遗传多态性较高,种群结构复杂。

摘要：目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据。方法 分离培养海西地区1957—2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的代表性鼠疫菌110株,提取其DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsl基因设计引物P-F和P-R和TaqMan-MGB探针Probe1 [FAM]和Probe2[VIC],利用荧光定量PCR技术,进行耐药rpsl基因筛查。结果 110株被试菌株中FAM检测均为阳性(RFU峰值>2000);VIC阳性的为0株(RFU峰值<200)。阳性对照和空白对照成立。结论 实时荧光定量PCR结果显示,该地区未检测出耐链霉素菌株。

摘要：目的了解我国是否存在耐药及耐消毒剂鼠疫菌株,为鼠疫临床治疗提供准确信息。方法收集我国1943-2016年分离自10处鼠疫自然疫源地的2753株鼠疫菌,根据美国国立生物信息中心(NCBI)公布的耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB,耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M,耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3,耐消毒剂基因qacE△1-sul1的序列信息,分别针对每个基因设计1对引物。提取2753株鼠疫菌基因组DNA,采用PCR法对所有DNA样本进行上述9个目的基因扩增。结果PCR检测阴性对照和阳性对照成立,2753株鼠疫菌DNA样本均未见耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB,耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M,耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3及耐消毒剂基因qacE△1-sul1对应的目的条带。结论我国鼠疫菌尚未检测到上述耐药及耐消毒剂基因,但鼠疫菌耐药性的监测工作仍需持续开展。

摘要：目的构建鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株鼠毒素基因缺失的突变菌株,建立鼠疫耶尔森氏杆菌的基因敲除方法,为研究鼠疫耶尔森氏杆菌基因奠定基础。方法选择1株鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株(菌株号为0614F)为实验菌株。利用Artemis软件阅读鼠疫菌91001株基因序列,查找并导出鼠毒素(Ymt)及其两侧100个基因序列。设计同源区突变盒引物和鉴定引物,采用λ-Red系统一步法敲除0614F鼠毒素编码基因并进行鉴定。结果质粒提取试剂盒提取Escherichia coli DH5α培养物pKD46质粒50μl,浓度为121.1ng/μl;同源区突变盒引物扩增含有氯霉素抗性基因菌株DNA,PCR产物进行1%琼脂糖电泳凝胶电泳鉴定后切胶,用胶回收试剂盒提取氯霉素线性突变盒50μl,浓度为724ng/μl;0614F菌株经两次电转化获得具有氨苄青霉素和氯霉素抗性的菌株,用相应鉴定引物进行PCR鉴定,获得菌株鉴定为鼠毒素基因缺失株0614F-△Ymt。结论应用基因敲除技术对鼠疫耶尔森氏杆菌鼠毒素基因定向突变成功,为青藏高原型鼠疫菌株新型疫苗研究奠定了实验基础。

摘要：目的研究青海省鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)基因型分布特征。方法对分离到的青海省148株鼠疫菌,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证。结果148株青海省鼠疫菌共包括8个基因型,即1、5、7、8、14型、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5型和8型为主。祁连山南麓和青海湖环湖地区的祁连、门源、刚察、海晏、共和、天峻等的菌株绝大多数属于基因型8型,占40．5％(60／148);位于青南高原的格尔木、玉树、扎多、治多、称多、囊谦和曲麻莱等的菌株,其基因型主要为5型,占31．8％(47／148)。青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因型全部为14型,占8．1％(12／148)。结论在青海省分离的鼠疫菌中,喜马托雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌的基因型以5型和8型为主,青海田鼠疫源地鼠疫菌以基因型14型为主。

摘要：目的调查西藏自治区鼠疫自然疫源地是否存在耐药及耐消毒剂的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)菌株,为鼠疫的临床治疗提供准确信息。方法根据美国国立生物技术信息中心公布的耐氨基糖苷类链霉素StrA和StrB基因,耐β-内酰胺类抗菌药物TEM、SHV和CTX-M基因,耐磺胺类药物Sul1、Sul2和Sul3基因序列,耐消毒剂耐药QacEdeltalsul1基因,分别在每个基因上设计1对引物,逐一对分离自西藏自治区鼠疫自然疫源地的鼠疫菌DNA进行PCR检测。结果阴性对照和阳性对照成立,355株鼠疫菌的PCR检测结果均为阴性,未发现耐链霉素、耐磺胺类药物及耐β-内酰胺类抗菌药物和耐消毒剂菌株。结论西藏自治区鼠疫自然疫源地鼠疫菌尚未出现耐药及耐消毒剂菌株。

摘要：目的研究西藏地区鼠疫菌的基因组成和基因分型。方法对西藏地区分离到的75株鼠疫菌，按照周东生等已经证实的22个差异区段（DFRs）设计引物，对每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用聚合酶链反应（PCR）进行验证。结果西藏地区75株鼠疫菌共包括3个基因型，即5、6、10型。藏北地区分离的鼠疫菌为5型和6型，分别占24．0％、13．3％；藏南地区分离的鼠疫菌为10型，占62．7％。结论在西藏地区鼠疫菌中，青藏高原型鼠疫菌为5和6型，岗底斯山型鼠疫菌为10型。