摘要：【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×10^2-1.0×10^8拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值（Ct）之间具有良好的线性关系（R^2=0.992）,最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率（分别为40.7%和78.9%）。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。

摘要：研究不同生长阶段白玉菇菌糠的营养成分及其发酵饲料的制备工艺条件。结果表明,白玉菇第3潮采摘后菌糠营养成分最为丰富,粗蛋白含量最高、粗纤维含量最低,是一种潜在的动物饲料原料来源。通过响应面分析法中Plackett-Burman试验设计,筛选出对白玉菇菌糠发酵效果影响显著因素作正交试验。结果表明,白玉菇菌糠发酵饲料制备最佳工艺条件为白玉菇菌糠:玉米粉8:1、发酵温度30℃、乳酸菌:酵母菌1:2、菌液接种量2.5%。发酵后,白玉菇菌糠粗蛋白、无氮浸出物显著提高,粗纤维显著降低。此外,菌糠香味明显改善、pH下降、乳酸含量提高,菌糠感官品质得到较大改善。

摘要：为了提高表达含有猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因DNA疫苗的死疫效应,本研究通过人工合成的方法将GP5基因的密码子改造为猪体嗜好的密码子,并将其作为免疫原基因,连同野生型GP5基因,分别插入表达载体pIRES1neo中,构建重组质粒pIR-optiGP5和pIR-GP5.将这两种质粒分别转染293T细胞,转染后48 h,采用间接免疫荧光和Western blot方法检测GP5基因的体外表达情况,结果两种检测方法显示重组质粒pIR-optiGP5的蛋白表达量明显多于pIR-GP5。为了评价DNA免疫质粒pIR-optiGP5的免疫效果,选取30只6～8周龄雌性BALB/c小鼠,将pIRES1neo、pIR-GP5、pIR-optiGP5分别以100μg/只剂量,进行肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周,同时,利用间接免疫荧光技术、流式细胞技术、淋巴细胞特异性增殖试验等方法检测其体液免疫和细胞免疫水平。结果显示:DNA免疫质粒pIR-optiGP5在二免后即可检测到荧光抗体,而pIR-GP5在三免后才能检测到;且发现用pIR-optiGP5质粒免疫小鼠,其CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞百分数及特异性刺激指数均高于pIR-GP5免疫小鼠,推测经过密码子优化的GP5基因其蛋白在小鼠体内得到了较高水平的表达,并诱导了较强的免疫应答,这为进一步研究和设计有效的PRRSV DNA疫苗提供了新的思路。

摘要：为探讨不结球白菜提取物(NCCE)对肉鸡生产性能、屠宰性能、免疫器官指数、血清免疫指标及血清抗氧化水平的影响。本试验选取240只1日龄健康AA肉仔鸡,随机分为4组,每组设3个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别在基础日粮中添加100 mg/kg、500 mg/kg、900 mg/kg的NCCE,试验期35 d。结果显示,试验Ⅱ组能显著提高肉鸡后期日增质量和饲料转化率,显著增加肉鸡活质量,显著降低肉鸡腹脂率;试验Ⅲ组能显著增加肉鸡全净膛率;试验Ⅱ组、Ⅲ组能显著提高肉鸡法氏囊指数和胸腺指数;试验Ⅰ组、Ⅱ组血清Ig G含量显著高于对照,试验Ⅱ组血清Ig M、补体C3含量显著高于对照,试验Ⅰ组补体C4含量显著高于对照;试验Ⅱ组血清超氧化物酶歧化酶(SOD)活性显著高于对照,试验各组血清总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均高于对照,试验组血清丙二醛(MDA)含量均低于对照。可见,日粮中添加一定水平的NCCE对肉鸡的产肉性能、免疫功能及抗氧化能力均有一定的促进作用,其中,以500 mg/kg的添加量效果最佳。

摘要：应用DPPH自由基清除法、羟自由基清除法、超氧阴离子自由基清除法、ABTS+·清除法四个抗氧化指标对不结球白菜的5个不同极性部位石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的抗氧化能力进行评价,同时考察了总酚和总黄酮的含量与抗氧化能力的关系,并对活性最强部位进行了脂质抗氧化研究。结果表明,除水相外,不结球白菜其他4个极性部位均表现出一定的抗氧化能力。总酚和总黄酮的含量与各部位的抗氧化能力具有显著相关性。乙酸乙酯相清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基、ABTS+·的EC50值分别为(0.64±0.05)、(1.17±0.12)、(1.02±0.15)、(0.78±0.07)mg/m L;乙酸乙酯相的抗氧化能力最高,其总酚的含量为(151.32±1.87)mg GAE/g DW,总黄酮含量为(32.97±0.56)mg rutin/g DW;10 mg/m L的乙酸乙酯相对H2O2诱导红细胞氧化的抑制率达到62.11%,对H2O2诱导小鼠肝脏脂质过氧化的抑制率为51.26%。实验结果表明,不结球白菜乙酸乙酯相具有较强的抗氧化活性,是天然抗氧化活性物质的良好来源。

摘要：根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gB基因序列,设计并合成了2对特异性引物,以PRV容A株细胞培养毒为模板,通过对PCR扩增条件的优化,建立了区分PRV野毒株和疫苗毒株的双重PCR方法。该方法能从野毒株基因组中同时扩增出2条大小分别为400bp(gE基因)、582bp(gB基因)的特异性片段,从疫苗毒DNA中仅扩增出1条大小为582bp的片段。试验证明所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,对临床上20份PRV感染疑似病料进行检测,双重PCR检测的结果与单重PCR检测结果总体符合率为100%,表明所建立的双重PCR检测方法可用于猪伪狂犬病野毒感染的快速诊断和流行病学调查。

摘要：采用生物信息学方法对克隆测序的不结球白菜(Brassica campestris ***)Bc GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)蛋白质的理化性质、跨膜区、亲水性、亚细胞定位、所含模体及蛋白质结构进行了预测。理化性质分析表明,该酶含有328个氨基酸,相对分子量为35 161.2,p I值为9.03。TMpred跨膜分析表明,该酶没有跨膜螺旋区,这与Prot Scale预测的该酶为亲水性蛋白质相吻合。用Target P server程序预测该酶定位于线粒体上,结构域分析表明该酶含有多种磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。借助SWISS-MODEL软件对该酶进行了三维同源建模。