摘要：目的　针对柯萨奇病毒 3型 (CVB3)基因组重要功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列 ,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用。方法　通过病毒空斑形成试验及致细胞病变作用 ,了解反义核酸抑制及阻断CVB3 病毒感染细胞的能力。结果　实验所设计的反义核酸中SCB1对感染HeLa细胞的CVB3 病毒活性抑制作用较强 ,当病毒感染量为 1MOI时 ,病毒活性抑制率高达 90 % ;SCB4 和SCB2 均为 75 % ;SCB6有 5 0 %抑制作用 ;而SCB3 和SCB5以及非特异性对照序列对CVB3病毒基因基本没有任何作用。结论　通过以上实验确定SCB1、SCB2 、SCB4 等较好的抗病毒反义核酸序列 。

摘要：根据中国儿童有氧能力发育规律和肥胖儿童实测值,设计运动处方。强度为最大氧消耗的50%(现场控制心率为最大心率的65%)。每天1小时,每周5天,共12周,运动方式为有氧运动,配合饮食指导和行为矫正。预期减脂肪2.7kg,实际减脂肪3.87kg。本方案安全,效果稳定,儿童乐于接受。

摘要：目的 了解2008-2009年北京分离的肠道病毒71型（EV71）基因组3＇末端的基因特征（未包括多聚腺苷尾）,探讨是否与病毒的致病性有关.方法 于2008-2009年手足口病流行期间采集来首都儿科研究所附属儿童医院就诊的普通手足口病患儿和合并重症神经系统并发症患儿的咽/鼻拭子或疱疹液标本.将标本接种Vero细胞进行肠道病毒分离,同时设计肠道病毒通用引物、EV71和柯萨奇病毒A组16型（CA16）特异性引物通过巢式RT-PCR对分离到的肠道病毒进行型别鉴定.对引起不同临床类型感染的10株EV71分离株的基因组3＇末端进行序列测定和分析.结果 10株EV71的3＇末端均包含1386 nt的3D、终止密码子TGA和81 nt的3＇UTR,由3D核苷酸序列所推导的3D蛋白含462个氨基酸.10株EV71的3D和3＇UTR核苷酸同源性分别为95.8%～99.6%和96.3%～100%,重症来源的4株毒株中有3株在3Dpol第140位和第263位同时出现了相同的氨基酸变异（R140K和I263V）.10株EV71的3D与C4亚型代表株具有最高的核苷酸和氨基酸同源性,分别为92.7%～94.2%和96.8%～97.6%;在3＇UTR与CA16/G10具有最高的核苷酸同源性（88.9%～91.4%）.3D区的遗传进化分析表明10株EV71在亲缘关系上与C4亚型最密切,与CA16/G10较密切,而与EV71其他基因型和亚型较疏远.结论 基因组3＇末端在EV71进化中可能有一定的作用.

摘要：目的用聚合酶链反应检测新生儿衣原体感染状况。方法参照文献报道的沙眼衣原体及肺炎衣原体基因序列，分别设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测住院新生儿衣原体感染。结果因呼吸道感染住院的１２３名新生儿的咽拭子标本，沙眼衣原体及肺炎衣原体感染率分别为１３．８％和４．９％。结论ＰＣＲ检测沙眼衣原体及肺炎衣原体感染具有特异、敏感、快速的特点，可为临床诊断提供科学依据。

摘要：为制订单纯肥胖症行为治疗方案提供依据，采用自行设计的心理行为问题问卷表对６２例１２～１４岁的单纯性肥胖儿童和同年龄、同性别的６２名正常体重儿童进行问卷测验。测试结果采用单因素卡方检验和多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析。筛出肥胖儿童饮食、运动方面的行为特点有：进食速度快，非饥饿状态下进食，临睡前进食，爱吃甜点心及甜饮料，不喜欢上体育课，课间、晚饭后很少去户外活动，看电视时间较长等；这些行为特点与肥胖的发生发展密切相关。肥胖儿童还存在着不良的心理状态，如有自卑感和孤独感，有事情喜欢藏在心里，常因为身材被同伴取外号，不愿在集体活动中表现自己等。提示肥胖已经对儿童造成了较为严重的心理损害，应引起重视。

摘要：目的了解2007年5—6月北京市儿童中流行的手足口病的病原。方法于2007年5、6月间采集来首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的手足口病患儿咽拭子标本6份和1份病情危重的手足口病并发神经系统症状而急诊收住院患儿(编号F4243,年龄9岁8个月,女性)的经气管插管呼吸道抽吸液、脑脊液及血清标本。将咽拭子和气管插管抽吸液标本接种Hep-2、MDCK和Vero细胞进行病毒分离。同时设计位于肠道病毒5’非编码区(UTR)的通用引物2对(巢式PCR)、肠道病毒71型(EV71)VP1基因不同位置的特异性引物2对半(PCR和半巢式PCR)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的特异性引物1对检测标本中的病毒核酸。首先用随机引物将标本中的RNA逆转录成cDNA,然后分别用上述引物进行PCR扩增肠道病毒5’UTR和EV71/CA16的VP1基因片段;对EV71阳性的标本还扩增了VP1全基因,扩增产物直接进行序列测定和分析。结果6例门诊就诊的普通手足口病患儿和F4243的呼吸道标本中均扩增到肠道病毒5’UTR基因片段,有2例门诊患儿和F4243的标本中还扩增到EV71的VP1基因片段,提示该组手足口病患儿均为肠道病毒感染,其中3例为EV71感染。序列测定和分析表明有1例普通手足口病患儿(F4211)和F4243标本确定为EV71。所有标本接种Hep-2和MDCK细胞均未出现病变,说明常见的呼吸道病毒为阴性。除1份咽拭子标本(F4283)外,其余6份接种Vero细胞的标本均出现细胞病变。用肠道病毒通用引物和EV71特异性引物对分离到的病毒株核酸的扩增结果显示这6株病毒均为肠道病毒,其中F4211和F4243为EV71,与直接从呼吸道标本中扩增的结果相符;其余4株为CA16。结论北京市儿童中流行的手足口病与肠道病毒EV71和CA16感染有关;EV71可以在5岁以上儿童中引起严重的神经系统并发症,应引起注意。

摘要：目的利用逆转录一环介导等温扩增技术（reverseloop—mediatedisothermalamplification，RT—LAMP），建立一种快速且敏感、特异的从急性呼吸道感染儿童的呼吸道标本中检测呼吸道合胞病毒（RSV）的方法。方法设计特异性RT—LAMP扩增引物，对引物进行特异性与灵敏度评估后，应用LA-320C实时浊度仪，对RSV5株分离株及经直接免疫荧光法（DFA）呼吸道病毒多病原检测过的急性呼吸道感染患儿的呼吸道标本101例进行RT—LAMP检测，并以本研究室已建立的RT-巢式PCR为对照方法。结果所建立的RT—LAMP方法敏感度好，60min扩增反应时间内每个反应可检测到1个拷贝的RSV（A或B亚型）RNA；且方法特异性好，与其他病毒间无交叉反应；4株A亚型及1株B亚型RSV分离株RT-LAMP方法检测均为阳性；在101例经DFA检测的呼吸道标本中，所建立的RT—LAMP方法与DFA方法在RSVA、B亚型检测的总符合率为95．0％，且两种方法的相关系数为0．895；与RT-巢式PCR的总符合率为94．1％，两种方法的相关系数为0．871。结论本研究所建立的RT—LAMP方法耗时短、操作简便、灵敏且特异，适用于儿科临床工作中疑似RSV感染的呼吸道标本的快速、特异的病原学检测。

摘要：目的探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式PCR．P1一RFLP基因分型方法并对其应用进行评价。方法参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2／3序列，分别在两个序列内部设计4条内套引物，采用文献报道的外套引物及新设计内套引物进行套式PCR扩增，扩增产物混合后用HaeⅢ酶切，根据不同的酶切图谱结果判断其型别，同时采用测序验证；对标准株DNA及临床标本DNA倍比稀释后进行检测，验证新改良方法敏感性；收集2012年肺炎支原体感染阳性标本，采用研究新改良的方法进行分型检测并与现有方法进行比较。结果经测序验证，以套式PCR为基础的P1-RFLP基因分型方法能够对临床标本进行很好的扩增；与现有的分型方法相比，新改良方法敏感性提高10^3倍，差异有统计学意义；北京地区2012年儿科肺炎支原体流行基因型为I型。结论套式PCR—P1-RFLP基因分型方法敏感性高，能够对临床标本进行很好的扩增。

摘要：细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题。为了扩增６种支原体（精氨酸支原体，口腔支原体，人型支原体，猪鼻支原体，发酵支原体及莱氏支原体）核糖体ＲＮＡ操纵子的１６ｓ和２３ｓＤＮＡ间区，设计了三个通用ＰＣＲ引物（Ｆ１，Ｆ２及Ｒ１）．当以６种支原体ＤＮＡ为模板时，引物Ｆ１和Ｒ１产生３４０到４６８ｂｐ的片段，引物Ｆ２和Ｒ１产生１４５到２１１ｂｐ的片段，当用Ｈｅｌａ细胞或Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ作为模板，用引物Ｆ１和Ｒ１时，在电泳中未观察到特定区带。此法最小能检出８．５ｆｇ精氨酸支原体ＤＮＡ，相当于１３个精氨酸支原体。这说明，当这些支原体污染细胞培养时，能用ＰＣＲ法检测出来。

摘要：目的利用环介导等温扩增技术（LAMP），建立一种快速可靠的儿童急性呼吸道感染标本中腺病毒检测方法。方法根据腺病毒六邻体基因序列设计特异性LAMP引物，使用实时浊度仪对所建立的LAMP方法进行特异性与灵敏度评估后，对3、7、14型腺病毒分离株共11株进行了检测，随后对经直接免疫荧光法（DFA）鉴定为腺病毒阳性的呼吸道标本36例、腺病毒阴性的呼吸道标本72例分别应用巢式多重PCR和LAMP两种方法进行检测。结果所建立的LAMP方法最低检出腺病毒DNA浓度为1．9×10^2拷贝／ml；方法特异性好，与其他病毒间无交叉反应；11株腺病毒分离株应用LAMP方法检测全部为阳性；36例已经过DFA鉴定为腺病毒阳性的标本中，应用LAMP法共检出腺病毒DNA阳性34例；72例DFA鉴定为腺病毒阴性的标本应用LAMP方法检测5例阳性。本研究建立的LAMP方法与DFA的总符合率为93．5％；与巢式多重PCR的总符合率为98．1％。结论本研究建立的LAMP方法耗时短、灵敏度好、特异性高、操作简便，适用于儿童呼吸道标本中腺病毒的宴聆窜懊谏榆测．具右糖好的章际席用前罱．